| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 5mg | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
PTK/rotein tyrosine kinase
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|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在我们的实验中，酪氨酸激酶抑制剂tyrphostin 23和Tyrphostin A51以剂量依赖的方式抑制了原代星形胶质细胞培养物中[3H]牛磺酸的体积敏感释放（图1，a和B）。由于不同培养制剂在对照低运动条件下[3H]牛磺酸释放的最大速率之间存在11-23%的差异，因此所有数据都标准化为同一天用相同细胞制剂进行的对照，这些数据非常恒定。在低至100 nM的浓度下，观察到Tyrphostin A51的显著抑制作用。最大抑制不超过50-55%，在50-100μM的浓度下达到饱和，在1.2±1.3μM时达到半最大效果（图1B）。该值非常接近抑制EGF受体激酶活性的IC50（IC50=800nM）（15）。在0.32-10μM的浓度范围内，tyrphostin 23的抑制效力低于Tyrphostin A51，这一发现与tyrphostin23抑制PTK的效力较低（EGF受体激酶的IC50=35μM）是一致的（4,15）。然而，与tyrphostin A51不同，tyrphostin 23效应在高达320μM的中等抑制水平下不会饱和，计算机拟合给出了约90%的最大抑制率和41.0±39.8μM的IC50（图1B）。我们认为，这两种酪氨酸磷酸酶作用的差异可能是由于高浓度酪氨酸磷酸酶23对阴离子通道的非特异性抑制。事实上，tyrphostin 1是tyrphostins的类似物，抑制酪氨酸激酶活性的效力很小，结构类似于tyrphosdin 23（4），在低浓度下对体积依赖性[3H]牛磺酸释放没有影响，而在320μM时，它抑制了15-20%的释放。[1]
蛋白酪氨酸磷酸化是细胞增殖和分化的关键决定因素。本研究的目的是检验与分化相比，负责人骨细胞增殖的信号转导通路可能涉及不同组蛋白酪氨酸激酶（PTK）的假设。为了实现这一目标，我们研究了两种结构不同的PTK抑制剂，即Tyrphostin A51和染料木素，对两种正常人骨细胞类型（下颌骨来源和椎骨来源的骨细胞）的增殖（[3H]胸苷掺入）和分化[碱性磷酸酶（ALP）比活性和胶原合成]的影响。Tyrphostin A51和染料木素均显著降低了细胞酪氨酸磷酸化水平（通过使用商业抗磷酸酪氨酸抗体和增强化学发光检测法的西方分析进行评估），证实这两种效应物是人类骨细胞中有效的PTK抑制剂。关于骨细胞增殖，Tyrphostin A51（5-30微M）对两种人类骨细胞类型的基础[3H]胸苷掺入产生剂量依赖性抑制。相比之下，金雀异黄素（5-20微M）不仅没有抑制，而且以剂量依赖的双相方式显著刺激了这些相同细胞类型的[3H]胸苷掺入，最佳刺激剂量在10至20微M之间。细胞计数证实了这些对细胞增殖的影响。此外，5-30微M的Tyrphostin A51完全消除了10ng/ml表皮生长因子（EGF）对人下颌骨衍生骨细胞的促有丝分裂活性，而5-30微米的染料木素以相加的方式增强了EGF诱导的骨细胞增殖。在骨细胞分化方面，Tyrphostin A51和染料木素均显著增加了人骨细胞中碱性磷酸酶的比活性和胶原蛋白的合成。综上所述，（1）PTKs参与人骨细胞增殖和分化；（2） tyrphostin A51抑制基础和EGF诱导的细胞增殖，因此tyrphos汀敏感的PTK参与了基础和EGF引导的人骨细胞增殖；（3） 金雀异黄素刺激基底细胞增殖，增强EGF介导的细胞增殖，表明金雀异黄酮敏感的PTK可能在人骨细胞增殖中起抑制作用；（4）PTK抑制剂对人骨细胞增殖和分化的这些差异作用与细胞的基础分化状态无关[2]。 |
| 酶活实验 |
流出物测量。[1]
如前所述，用[3H]牛磺酸和4-[3H]天冬氨酸进行氨基酸流出测量。简而言之，在玻璃盖玻片（18×18 mm；1½号；新泽西州Vineland Bellco Biotechnology）上生长的星形胶质细胞用[3H]牛磺酸（8μCi/ml，264 nM）或[3H]天冬氨酸（8μCi/ml，762 nM）预加载过夜。将盖玻片放置在Lucite灌注室（总体积约100μl）中，并以1ml/min的速度用等渗或低渗介质进行灌注。等渗培养基由（以mM计）122 NaCl、3.3 KCl、0.4 MgSO4、1.3 CaCl2、1.2 KH2PO4、10 d-葡萄糖和25 HEPES组成。通过加入NaOH将pH值调节至7.4。低渗培养基含有（以mM计）72 NaCl、3.3 KCl、0.4 MgSO4、1.3 CaCl2、1.2 KH2PO4、10 d-葡萄糖和25 HEPES（pH 7.4）。用冰点渗透压计验证，等渗和低渗介质的渗透压分别为285和190 mosM。收集1分钟的组分并进行液体闪烁计数。使用定制的计算机程序计算氨基酸流出率，作为释放分数（每1分钟间隔开始时细胞中剩余同位素的百分比） |
| 细胞实验 |
人骨细胞增殖试验[2]
如前所述，通过刺激[3H]胸苷掺入细胞DNA来评估人骨细胞增殖。PTK抑制剂分别溶解在DMSO中。测定中DMSO的最终浓度为0.06%。在EGF实验中，EGF溶解在添加了0.1%牛血清白蛋白的DMEM中。为了证实这些抑制剂对人骨细胞增殖的影响，将人下颌骨来源的骨细胞以100个细胞/mm2的密度铺在24孔培养板中，并用上述抑制剂或溶剂对照处理48小时。孵育后，在37°C下用胰蛋白酶处理5分钟，将细胞从培养孔中释放出来。通过在微量离心机中离心收集细胞，并将其重新悬浮在含有2%BCS的0.1 ml DMEM中。用血细胞计数器在10个单独的0.1-mm3网格中计数细胞数量。每个治疗组有六个重复。 细胞ALP特异性活性测定[2] 在1 mM MgCl2存在下，用10 mM PNPP在0.15 M碳酸钠缓冲液（pH 10.3）中测定细胞ALP比活性[21]。ALP的一个单位是在室温下每分钟水解1毫摩尔PNPP所需的酶量。根据Lowry等人测定的细胞蛋白，将比活性标准化。 胶原蛋白合成测定[2] 通过[3H]脯氨酸掺入胶原酶可消化蛋白来评估胶原蛋白合成。简而言之，细胞在无血清的DMEM中培养，并加入效应器48小时。在最后6小时内，加入[3H]脯氨酸和b-氨基丙腈。测定胶原酶可消化和不可消化蛋白质的放射性。将胶原酶不可消化蛋白乘以5.4后计算合成的胶原蛋白百分比，以校正胶原酶可消化和不可消化蛋白质中脯氨酸的相对丰度。 细胞稳态磷酸酪氨酸蛋白水平的测定[2] 如前所述，测量正常人骨细胞中的细胞稳态磷酸酪氨酸蛋白水平。因此，将细胞以100个细胞/mm2的密度接种在含有1%BCS的DMEM中的100cm培养皿中。在接种24小时后，将细胞更换为无血清DMEM，一小时后加入30 mM的每种效应物或相应的溶剂对照，并在37°C下孵育细胞30分钟。处理后，去除细胞培养基，立即用0.3ml十二烷基硫酸钠（SDS）处理缓冲液[0.125M Tris-HCl（pH 6.8），4%SDS，20%甘油，10%乙硫醇，1mM原钒酸钠]提取细胞层。将细胞提取物置于沸水浴中5分钟，并在-20°C下冷冻（作为等分试样），直至电泳。根据Lowry等人的研究，测定提取物中的蛋白质含量（用三氯乙酸沉淀后）。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
2-氨基-4-(3,4,5-三羟基苯基)丁-1,3-二烯-1,1,3-三腈是一种苯三醇。
酪氨酸激酶抑制剂A51是一种参与细胞增殖和分化的蛋白酪氨酸激酶抑制剂。 总之，在原代星形胶质细胞培养中，低渗培养基诱导的细胞肿胀导致至少两种对氨基酸通透的阴离子通道被激活，这两种通道具有不同的体积信号转导机制。其中一种通道可能对应于VSOAC/VSOR通道，它对牛磺酸（和Cl⁻）通透，但对兴奋性氨基酸（EAAs）不通透，并且需要EGF受体非依赖性的、酪氨酸激酶抑制剂敏感的酪氨酸激酶活性才能被低渗刺激。第二种通道对牛磺酸和EAAs（以及Cl⁻）通透，并且不受酪氨酸激酶的调控。本研究的一个重要意义在于，我们有可能利用酪氨酸激酶抑制剂作为分子工具，区分体积依赖性氯离子/牛磺酸通道和体积依赖性必需氨基酸通道。前者是细胞体积调节所必需的。尽管后者的正常功能尚不明确，但它可能在多种星形胶质细胞肿胀的病理情况下导致脑损伤[1]。 |
| 分子式 |
C13H8N4O3
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|---|---|
| 分子量 |
268.22762
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| 精确质量 |
268.059
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| 元素分析 |
C, 58.21; H, 3.01; N, 20.89; O, 17.89
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| CAS号 |
122520-90-5
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| 相关CAS号 |
Tyrphostin A51;126433-07-6
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| PubChem CID |
5328807
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| 密度 |
1.6±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
788.2±60.0 °C at 760 mmHg
|
| 熔点 |
278ºC
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| 闪点 |
430.5±32.9 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±2.8 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.757
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| LogP |
0.04
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| tPSA |
158.08
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
4
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
2
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| 重原子数目 |
20
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| 分子复杂度/Complexity |
565
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C(=C(/C#N)\C(=C(C#N)C#N)N)/C1=CC(=C(C(=C1)O)O)O
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| InChi Key |
JKNOYWVMHPMBEL-UNXLUWIOSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C13H8N4O3/c14-4-8(12(17)9(5-15)6-16)1-7-2-10(18)13(20)11(19)3-7/h1-3,18-20H,17H2/b8-1+
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| 化学名 |
(3Z)-2-amino-4-(3,4,5-trihydroxyphenyl)buta-1,3-diene-1,1,3-tricarbonitrile
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| 别名 |
tyrphostin 51; Tyrphostin A51; 126433-07-6; 122520-90-5; AG-183; 2-Amino-1,1,3-tricyano-4-(3',4',5'-trihydroxyphenyl)butadiene; (3Z)-2-amino-4-(3,4,5-trihydroxyphenyl)buta-1,3-diene-1,1,3-tricarbonitrile; 1,3-Butadiene-1,1,3-tricarbonitrile, 2-amino-4-(3,4,5-trihydroxyphenyl)-;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.7281 mL | 18.6407 mL | 37.2814 mL | |
| 5 mM | 0.7456 mL | 3.7281 mL | 7.4563 mL | |
| 10 mM | 0.3728 mL | 1.8641 mL | 3.7281 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
AOH-1996
hMAO-B-IN-3
Flupyrimin
阿曲库铵
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