Ac-YVAD-pNA   中文名称: Ac-YVAD-肽核酸

Caspase-1

Caspase特异性谱[1]
分析了6种不同合成caspase底物对7种重组人caspase的特异性，结果见补充图S1。在没有竞争性半胱天冬酶的情况下，每一项检测都涉及检测单个半胱天冬酶对不同底物的活性。因此，caspase单位被用作caspase数量的度量。每次试验均使用相同量的活性半胱天冬酶（1u）。Ac-YVAD-pNA、Ac-VDVAD-pNA、Ac-VEID-pNA、Ac-IETD-pNA和Ac-LEHD-pNA分别是caspase-1、2、6、8和9的商业指定底物。Ac-DEVD-pNA是caspase 3和7的底物。图S1左边的一列（A、C、E、G、I、K和M）显示了每种caspase在不同底物下的动力学图。右列（B， D， F， H， J， L和N）表示对不同底物的相对解理效率。每种半胱天冬酶对其指定底物的活性定义为100%。结果表明，caspase-1底物（Ac-YVAD-pNA）是最特异的底物，因为它只被caspase-1切割。然而，caspase-1酶可以切割caspase-9 （Ac-LEHD-pNA）和caspase-1的底物（图S1 A和B）。caspase-2是最特异的caspase，因为它只切割指定的caspase-2底物（Ac-VDVAD-pNA）（图S1）。C和D)。Caspase-3同样能切割3种不同的底物（Ac-VDVAD-pNA、Ac-DEVD-pNA和Ac-VEID-pNA）（图S1）。E和F)。caspase-6对caspase-6底物的切割效率最高（图S1）。G和H)。caspase-7的特异性与caspase-3相似（图S1）。I和J)。有趣的是，对于指定的caspase-9底物（Ac-LEHD-pNA），观察到最高的caspase-8催化活性。该底物的裂解效率是caspase-8 （Ac-IETD-pNA）指定底物的约4.5倍（图S1）。K和L)。caspase-9底物（Ac-LEHD-pNA）是caspase-9的最佳底物。然而，caspase-3、caspase-6和caspase-8底物的活性也很低（图S1）。M和N)。

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在我们的实验条件下，caspase-1的指定底物Ac-YVAD-pNA是最特异的底物，因为它只被caspase-1切割（图S1）。Caspase-1参与炎症过程的调节，其主要底物是炎症细胞因子il -1β。caspase-1在Tyr-Val-His-Asp116/Ala117 （YVHD/A）位点切割pro-IL-β，类似于市售caspase-1底物Ac-YVAD-pNA。我们发现参与细胞凋亡的caspase，即caspase-2、-3、-6、-7、-8和-9，不会切割caspase-1底物。这一结果可能暗示炎症特异性底物，如前il -1β，不能被参与细胞凋亡的半胱天冬酶切割。研究表明，caspase-2作为一种特殊的酶，它严格要求P5残基才能进行有效的切割。我们的结果证实了这种特异性（图S1 C和D）。指定的caspase-2底物Ac-VDVAD-pNA被caspase-2、-3和-7有效地切割（图S1 E、F、I和J）。因此，凋亡细胞对Ac-VDVAD-pNA的切割可能是caspase-2、-3和-7共同作用的结果。Ac-DEVD-pNA是caspase-3和-7的指定底物，可以被这两种酶有效地切割（图S1 E， F， I和J）。Caspase-3和-7也能有效切割分别为caspase-2和-6指定底物的Ac-VDVAD-pNA和Ac-VEID-pNA（图S1 E、F、I和J）。特异性研究中最令人惊讶的结果是，caspase-8切割caspase-9底物（Ac-LEHD-pNA）的效率是其自身底物Ac-IETD-pNA的4.5倍（图S1 K和L）。由于caspase-8和-9分别参与外源性和内在死亡途径，caspase-8对Ac-LEHD-pNA的显著切割可能导致难以确定每种途径的贡献。[1]

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雷公藤红素抑制巨噬细胞[2]
的焦亡 由于雷公藤红素可以抑制LPS和ATP诱导的IL-1β上调和caspase-1的裂解，我们推测雷公藤红素可以抑制巨噬细胞的焦亡。如前所述，焦亡依赖于caspase-1的激活和细胞膜完整性的丧失，它导致细胞裂解，导致细胞内容物渗漏。 首先，我们通过检测caspase-1底物Ac-YVAD-pNA的切割，分析了celastrol是否影响巨噬细胞中caspase-1的激活。与对照细胞相比，LPS和ATP增加了活化caspase-1的水平（图3A）。当用celastrol或caspase-1抑制剂Z-VAD-FMK预处理时，caspase-1的激活显著降低。同样，结果表明，雷公藤红素以剂量依赖性的方式显著减少LPS和ATP诱导的LDH释放（图3B）。

检测caspase-1活性[2]
采用caspase-1活性试剂盒检测caspase-1的活性，该试剂盒基于caspase-1将acetyl-Tyr-Val-Ala-Asp对硝基苯胺（Ac-YVAD-pNA）转化为黄色甲酸产物对硝基苯胺（pNA）的能力。该过程是根据制造商的协议进行的。细胞提取物（50 μg）于96孔微滴板中，浓度为20 nmol Ac-YVAD-pNA， 37℃孵育过夜。用酶标仪测定pNA在405 nm处的吸光度值。

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Caspase特异性谱[1]
分析了6种不同合成caspase底物对7种重组人caspase的特异性，结果见补充图S1。在没有竞争性半胱天冬酶的情况下，每一项检测都涉及检测单个半胱天冬酶对不同底物的活性。因此，caspase单位被用作caspase数量的度量。每次试验均使用相同量的活性半胱天冬酶（1u）。Ac-YVAD-pNA、Ac-VDVAD-pNA、Ac-VEID-pNA、Ac-IETD-pNA和Ac-LEHD-pNA分别是caspase-1、2、6、8和9的商业指定底物。Ac-DEVD-pNA是caspase 3和7的底物。图S1左边的一列（A、C、E、G、I、K和M）显示了每种caspase在不同底物下的动力学图。右列（B， D， F， H， J， L和N）表示对不同底物的相对解理效率。每种半胱天冬酶对其指定底物的活性定义为100%。结果表明，caspase-1底物（Ac-YVAD-pNA）是最特异的底物，因为它只被caspase-1切割。然而，caspase-1酶可以切割caspase-9 （Ac-LEHD-pNA）和caspase-1的底物（图S1 A和B）。caspase-2是最特异的caspase，因为它只切割指定的caspase-2底物（Ac-VDVAD-pNA）（图S1）。C和D)。Caspase-3同样能切割3种不同的底物（Ac-VDVAD-pNA、Ac-DEVD-pNA和Ac-VEID-pNA）（图S1）。E和F)。caspase-6对caspase-6底物的切割效率最高（图S1）。G和H)。caspase-7的特异性与caspase-3相似（图S1）。I和J)。有趣的是，对于指定的caspase-9底物（Ac-LEHD-pNA），观察到最高的caspase-8催化活性。该底物的裂解效率是caspase-8 （Ac-IETD-pNA）指定底物的约4.5倍（图S1）。K和L)。caspase-9底物（Ac-LEHD-pNA）是caspase-9的最佳底物。然而，caspase-3、caspase-6和caspase-8底物的活性也很低（图S1）。M和N)。

[1]. Some commonly used caspase substrates and inhibitors lack the specificity required to monitor individual caspase activity. Biochem Biophys Res Commun. 2008 Dec 19;377(3):873-7.

[2]. A new mechanism of inhibition of IL-1β secretion by celastrol through the NLRP3 inflammasome pathway. Eur J Pharmacol. 2017 Nov 5;814:240-247.

许多指定的底物和抑制剂已被广泛用于研究半胱天冬酶在哺乳动物细胞培养过程中凋亡中的作用。然而，这些底物和抑制剂的特异性尚未得到系统评估。因此，关于特定半胱天冬酶在凋亡细胞中作用的结论存在不准确之处。本研究探讨了七种市售人半胱天冬酶与其指定底物和抑制剂之间的相互作用。结果表明，半胱天冬酶-1的指定底物Ac-YVAD-pNA是特异性最高的底物。所有其他测试的底物均与多种半胱天冬酶存在交叉反应。就酶而言，半胱天冬酶-2的特异性最高，其次是半胱天冬酶-9和-6。半胱天冬酶-3和-7能够有效切割三种底物。半胱天冬酶-1和-8的指定底物甚至并非它们的最佳底物。即使在低浓度下，氟甲基酮 (fmk) 抑制剂对不同的半胱天冬酶也没有特异性。相比之下，醛类抑制剂的效力与 pNA 底物的裂解表现出明显的相关性。这些结果表明，一些常用的半胱天冬酶底物和抑制剂缺乏监测单个半胱天冬酶活性所需的特异性。[1] NLRP3（NOD 样受体蛋白 3）炎症小体是一种含有半胱天冬酶-1 的多蛋白复合物，它控制着 IL-1β 的释放，并与炎症性疾病的发生发展相关。雷公藤内酯醇是从雷公藤中提取的一种药理活性成分，其抗炎活性源于对 IL-1β 分泌的抑制作用。本研究旨在探讨雷公藤内酯醇对巨噬细胞中 NLRP3 炎症小体介导的 IL-1β 和 IL-18 释放的可能调节作用。研究表明，雷公藤内酯醇通过抑制脂多糖（LPS）/ATP诱导的巨噬细胞中NLRP3的表达和caspase-1的裂解，显著降低了IL-1β和IL-18的分泌。此外，雷公藤内酯醇抑制了巨噬细胞的焦亡，这通过caspase-1激活、LDH泄漏和PI摄取实验得到证实。而且，研究发现雷公藤内酯醇的这些抑制作用至少部分是通过降低活性氧的产生和NF-κB的激活来实现的。综上所述，这些发现提示雷公藤内酯醇通过抑制NLRP3炎症小体发挥新的抗炎机制。[2]

C29H36N6O10

628.63

628.249

149231-66-3

10484117

Ac-Tyr-Val-Ala-Asp-pNA

YVAD; Ac-YVAD-{pNA}

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

1108.9±65.0 °C at 760 mmHg

624.5±34.3 °C

0.0±0.3 mmHg at 25°C

1.605

2.61

248.85

7

10

14

45

1080

4

C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)NC1=CC=C(C=C1)[N+](=O)[O-])NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)C

YDPNOCSPPGFBPX-XNHCRPTKSA-N

InChI=1S/C29H36N6O10/c1-15(2)25(34-28(42)22(31-17(4)36)13-18-5-11-21(37)12-6-18)29(43)30-16(3)26(40)33-23(14-24(38)39)27(41)32-19-7-9-20(10-8-19)35(44)45/h5-12,15-16,22-23,25,37H,13-14H2,1-4H3,(H,30,43)(H,31,36)(H,32,41)(H,33,40)(H,34,42)(H,38,39)/t16-,22-,23-,25-/m0/s1

(3S)-3-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-acetamido-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]propanoyl]amino]-4-(4-nitroanilino)-4-oxobutanoic acid

Ac-YVAD-pNA; 149231-66-3; Ac-Tyr-Val-Ala-Asp-PNA; (3S)-3-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-acetamido-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]propanoyl]amino]-4-(4-nitroanilino)-4-oxobutanoic acid; Caspase-1 Substrate IV, Colorimetric; MFCD00274387; SCHEMBL7694593; DTXSID30440596;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 250 mg/mL (397.69 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。