IC50: 30 nM (FLAP)[3] IC50: 3 nM (Leukotriene biosynthesis in intact leukocytes) and 1.1 μM (Leukotriene biosynthesis in human whole blood)[2] PPARα[1]

在小鼠原代角质形成细胞培养物中，MK-886 钠盐（0.5-2 μM；15 小时）处理可降低 keratin-1 表达[1]。使用瞬时转染技术，10 μM MK-886 钠盐可将猴肾成纤维细胞 CV-1 细胞、小鼠角化细胞 308 细胞和人肺腺癌 A549 细胞中 PPARα 的 Wy-14643 活化降低约 80%。在稳定转染系统中，MK-886 钠盐还可减少脂肪酸对 PPARα 的激活 [1]。尽管 Jurkat 细胞中表达所有 PPAR 同工型，但不同的 PPARα 和 PPARγ 激动剂无法阻止 MK-886 钠盐诱导的细胞凋亡[1]。

用 MK-886 钠盐（L 663536；5 mg/kg；口服）治疗的雄性 Sprague-Dawley 大鼠对先前接受过美西麦角治疗的近交系大鼠显示出对抗原诱导的呼吸困难的强烈抑制作用[2]。使用大鼠胸膜炎（ED50，0.2 mg/kg 口服）、炎症爪（ED50，0.8 mg/kg）和抗原激发后大鼠胆汁中白三烯排泄的模型，MK-886 钠盐 (L 663536) 抑制白三烯的产生体内[2]。

PPAR ligand binding assay: MK886与PPARs的结合采用共激活剂依赖受体配体测定(CARLA)。从Walter Wahli获得了一个包含PPARα配体结合域的结构体，该结构体与谷胱甘肽s -转移酶(GST)在框架中克隆。GST-PPAR配体结合域融合蛋白在大肠杆菌BL2 DE3 (pLysS)中表达。将含有融合蛋白的细菌微球重悬于10ml裂解缓冲液[含有1% (v}v) Triton X-100和0.5 mM PMSF的PBS]中，反复冻融裂解。4500 g离心除去DNA和不溶性物质。融合蛋白在4℃下用GSH-Sepharose beads纯化，在裂解缓冲液中洗涤3次，并在20 mM Tris}HCl (pH 8.0)、100 mM NaCl、1 mM EDTA、0.5% Nonidet P-40和1 mM添加1% (w}v)干牛奶的二硫苏糖醇(DTT)中平衡。每次反应使用的蛋白质量为1-3µg。将微球与不同浓度的MK886和$& s放射性标记的类固醇受体共激活因子-1 (SRC-1)一起孵育，SRC-1是由pSG5质粒构建的，该质粒可以在体外表达SRC-1(来自Walter Wahli)，使用偶联转录翻译兔网状细胞裂解液系统。标记通过在[$&S]蛋氨酸存在下孵育1小时来实现，并通过离心回收珠子。然后洗涤，用SDS}PAGE分析与SRC-1的相互作用。gst配体结合区域融合的考马斯亮蓝染色允许不同反应之间的标准化。放射自显影显示SRC-1蛋白复合物。使用扫描图像和UN-SCAN-IT软件确定相对频带密度[1]。

蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： 原代角质形成细胞
测试浓度： 0.5 µM、1 µM 或 2 µM
孵育时间：15小时
实验结果：keratin-1表达减少。

动物/疾病模型：雄性 SD（SD（Sprague-Dawley））大鼠（300-400 g），抗原诱导的呼吸困难[1]
剂量：5 mg/kg
给药途径：口服
实验结果：抑制抗原诱导的呼吸困难。

[1]. Inhibition of peroxisome-proliferator-activated receptor (PPAR)alpha by MK886. Biochem J. 2001 Jun 15;356(Pt 3):899-906.
[2]. L-663,536 (MK-886) (3-[1-(4-chlorobenzyl)-3-t-butyl-thio-5-isopropylindol-2-yl]-2,2 - dimethylpropanoic acid), a novel, orally active leukotriene biosynthesis inhibitor. Can J Physiol Pharmacol. 1989 May;67(5):456-64.
[3]. Mancini JA, et al. 5-Lipoxygenase-activating protein is the target of a novel hybrid of two classes of leukotriene biosynthesis inhibitors. Mol Pharmacol. 1992 Feb;41(2):267-72.

3-[3-(叔丁基硫基)-1-(4-氯苄基)-5-(丙-2-基)-1H-吲哚-2-基]-2,2-二甲基丙酸属于吲哚类化合物，其结构为1H-吲哚，分别在5位被异丙基取代，3位被叔丁基硫基取代，1位被4-氯苄基取代，2位被2-羧基-2-甲基丙基取代。它是一种花生四烯酸5-脂氧合酶抑制剂。它具有多种药理活性，包括作为EC 1.13.11.34（花生四烯酸5-脂氧合酶）抑制剂、抗肿瘤药和白三烯拮抗剂。它是一种芳基硫醚，属于吲哚类化合物、单羧酸类化合物和单氯苯类化合物。
MK-886 是一种白三烯合成的实验性抑制剂。

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尽管 MK886 最初被鉴定为 5-脂氧合酶激活蛋白 (FLAP) 的抑制剂，但最近的数据表明，这种活性并非其诱导细胞凋亡的根本原因 [Datta、Biswal 和 Kehrer (1999) Biochem. J. 340, 371-375]。由于 FLAP 是一种脂肪酸结合蛋白，因此 MK886 可能影响其他此类蛋白。过氧化物酶体增殖物激活受体 (PPARs) 是一类由脂肪酸及其代谢物激活的核受体，与细胞凋亡有关，可能代表 MK886 的作用靶点。利用报告基因检测系统（过氧化物酶体增殖反应元件-荧光素酶）评估了MK886抑制PPAR-α、-β和-γ活性的能力。在猴肾成纤维细胞CV-1、小鼠角质形成细胞308和人肺腺癌A549细胞中，使用瞬时转染系统，发现10-20 μM的MK886可抑制Wy14,643激活的PPAR-α约80%。在CV-1细胞的稳定转染报告基因系统中也观察到了MK886对PPAR-α的类似抑制作用。MK886对PPAR-β和PPAR-γ的抑制作用则非常轻微。MK886通过非竞争性机制抑制PPAR-α，这体现在其对花生四烯酸与PPAR-α蛋白结合的影响，以及在COS-1细胞中进行的瞬时转染报告基因剂量反应研究。一项评估PPAR配体-受体相互作用的实验表明，MK886可阻止活性复合物形成所需的构象变化。在小鼠原代角质形成细胞培养物中，MK886可降低角蛋白-1（一种由PPARα反应基因编码的蛋白质）的表达，提示PPAR抑制在正常细胞中具有功能性后果。尽管Jurkat细胞表达所有PPAR亚型，但多种PPARα和PPARγ激动剂均无法阻止MK886诱导的细胞凋亡。这与MK886作为PPARα的非竞争性抑制剂的作用机制相符，但也可能表明PPARα并非直接参与MK886诱导的细胞凋亡。尽管已发现多种PPAR激活剂，但结果表明MK886能够抑制PPARα，使其成为首个被发现具有此作用的化合物。[1]L-663,536（3-[1-(4-氯苄基)-3-叔丁基硫代-5-异丙基吲哚-2-基]-2,2-二甲基丙酸）是完整人多形核白细胞（PMN）中白三烯（LT）生物合成的强效抑制剂（IC50为2.5 nM）。同样，L-663,536抑制了A23187诱导的大鼠外周血和PMN中LTB4的生成。在抑制人全血中白三烯生物合成的浓度（1.1 μM）下，未观察到对环氧合酶或12-脂氧合酶的影响，这一结果在洗涤的人血小板中也观察到。该化合物对大鼠或猪的5-脂氧合酶没有影响，表明L-663,536不是5-脂氧合酶的直接抑制剂。体内给药时，L-663,536可有效抑制经美西麦角预处理的近交系大鼠的抗原诱导性呼吸困难（ED50为0.036 mg/kg，口服），并可有效抑制松鼠猴的蛔虫诱导性支气管收缩（1 mg/kg，口服）。该化合物在以下模型中抑制了体内白三烯的生物合成：大鼠胸膜炎模型（ED50，0.2 mg/kg 口服）、大鼠爪部炎症模型（ED50，0.8 mg/kg）、抗原激发后大鼠胆汁中白三烯排泄模型，以及豚鼠耳模型（其中用离子载体 A23187 局部刺激诱导白三烯合成）（ED50，2.5 mg/kg 口服和 0.6 微克 局部应用）。结果表明，L-663,536 是一种强效的白三烯生物合成抑制剂，无论在体外还是体内均有效，这表明该化合物适用于研究白三烯在多种病理情况下的作用。[2]

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一种名为 5-脂氧合酶激活蛋白 (FLAP) 的 18 kDa 白细胞膜蛋白最近被证实是两类结构不同的白三烯生物合成抑制剂的靶点。这两类抑制剂分别基于吲哚和喹啉结构，以 MK-886 和 L-674,573 为代表。最近开发了一种基于吲哚和喹啉类抑制剂的新型杂合结构化合物，称为喹啉类化合物。这类化合物，例如 L-689,037，是强效的白三烯生物合成抑制剂，无论在体外还是体内均有效。在本研究中，我们开发并表征了一种高效的放射性碘标记光亲和类似物L-689,037，命名为[125I]L-691,678。该化合物用于FLAP抗血清的免疫沉淀实验，结果表明喹诺酮类白三烯生物合成抑制剂可与FLAP直接相互作用。此外，我们还发现MK-886、L-674,573和L-689,037均能以浓度依赖的方式特异性地与[125I]L-691,678以及MK-886的光亲和类似物[125I]L-669,083竞争性结合FLAP。这些结果表明，这三类白三烯生物合成抑制剂在 FLAP 上具有共同的结合位点，进一步证明 FLAP 是结构多样的白三烯生物合成抑制剂的合适靶点。[3]

C27H33CLNNAO2S

494.06

493.181

C, 65.64; H, 6.73; Cl, 7.18; N, 2.84; Na, 4.65; O, 6.48; S, 6.49

118427-55-7

MK-886;118414-82-7

4519262

Typically exists as solid at room temperature

6.675

70.36

0

3

8

33

645

0

CC(C)C1=CC2=C(C=C1)N(CC3=CC=C(C=C3)Cl)C(=C2SC(C)(C)C)CC(C)(C)C(=O)[O-].[Na+]

CBNCIYNCWVGEKJ-UHFFFAOYSA-M

InChI=1S/C27H34ClNO2S.Na/c1-17(2)19-10-13-22-21(14-19)24(32-26(3,4)5)23(15-27(6,7)25(30)31)29(22)16-18-8-11-20(28)12-9-18;/h8-14,17H,15-16H2,1-7H3,(H,30,31);/q;+1/p-1

sodium;3-[3-tert-butylsulfanyl-1-[(4-chlorophenyl)methyl]-5-propan-2-ylindol-2-yl]-2,2-dimethylpropanoate

MK-886 sodium salt; 118427-55-7; MK886 sodium; MK-886 (sodium salt); PNR27O326B; sodium;3-[3-tert-butylsulfanyl-1-[(4-chlorophenyl)methyl]-5-propan-2-ylindol-2-yl]-2,2-dimethylpropanoate; CHEMBL416657; MK 886 sodium;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。