| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 250mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
CBFβ SMMHC-RUNX1
|
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
AI-10-47(10 μM) 会弱抑制 CBFβ-RUNX 的结合 [2]。 AI-10-47显着抑制 ME-1、TUR、M0-91、THP-1 和 U937 细胞生长 [2]。
肝微粒体稳定性的测量表明，AI-10-47降低了代谢不稳定性，因此证明了二价衍生物AI-10-49的合成是合理的（表1）。AI-10-49是强效的（FRET IC50=260nM）（表1）[等温滴定量热法（ITC）测量得出解离常数（KD）=168 nM]（图S6），改善了体内药代动力学特性（t½=380min）（图S5），与母体质子化二价化合物AI-4-83（IC50约为3μM）相比，对ME-1细胞生长的抑制活性增强（IC50=0.6 mM）（图1F）（图1E）。请注意，AI-10-49在正常人骨髓细胞中显示出可忽略的活性（IC50>25μM）（图1G），这表明了一个强大的潜在治疗窗口。在11种人类白血病细胞系中，ME-1细胞是唯一对AI-10-49高度敏感的细胞系（图S7）。 为了测试AI-10-49在人类inv（16）白血病治疗中的潜在效用，我们评估了用单价AI-10-47和二价AI-10-49剂量范围治疗48小时的四种原发inv（6）AML细胞样本的存活率。如图3B所示，用浓度为5和10μM的AI-10-49处理后，inv（16）患者细胞的存活率降低（个体剂量反应实验如图S12所示）。请注意，二价AI-10-49比单价化合物AI-10-47更有效，因此概括了在人类inv（16）细胞系ME-1中观察到的效果。相比之下，正常核型AML样本的存活率不受AI-10-49治疗的影响（图3C）。对另外五组AML样本的分析表明，AI-10-49治疗特异性降低了inv（16）白血病细胞的存活率，但对其分化没有明显影响（图S13）。当我们通过评估化合物暴露后的集落形成单位（CFU）来评估AML细胞形成集落的能力时，AI-10-49的特异性也很明显。与正常核型和t（8；21）AML患者样本相比，AI-10-49选择性降低了inv（16）AML细胞形成CFU的能力（图3D）。这种抑制作用是剂量依赖性的（在5和10μM时分别为40%和60%）（图3E），而用AI-10-47处理的AML细胞、具有正常核型的AML细胞（图3F）或CD34+脐带血细胞（图3G）的CFU没有变化。这些研究表明，AI-10-49选择性抑制inv（16）AML母细胞的存活率和CFU能力，而它对具有正常核型的AML母细胞或重要的是对正常人类造血祖细胞的影响可以忽略不计[1]。 |
| 酶活实验 |
FRET检测。[1]
如前所述，Cerulean Runt结构域被表达和纯化。Venus CBFβ-SMMHC是通过将6xHis标签和Venus插入NdeI和NcoI位点之间的pET22b载体中，并在NcoI和BamHI位点之间插入CBFβ-SSMHC（CBFβ/SMMHC构建体包含369个氨基酸，CBFβ为1-166，MYH11为166-369（氨基酸1526-1730））构建的。融合蛋白通过标准镍亲和层析纯化，柱上苯并酶处理以去除残留的DNA污染物。使用前，将蛋白质透析到FRET缓冲液（25mM Tris-HCl，pH 7.5，150mM KCl，2mM MgCl2）中。蛋白质浓度分别通过天蓝色和金星在433和513 nm处的紫外吸光度测定。Cerulean Runt结构域和Venus CBFβ-SMMHC以1:1混合，在96孔黑色COSTAR板中达到10nM的最终浓度。将化合物的DMSO溶液加入至DMSO的最终浓度为5%（v/v），然后在室温下在黑暗中孵育平板一小时。使用PHERAstar微孔板读数器测量荧光（激发波长为433 nm，发射波长为474和525 nm）。对于IC50测定，绘制525nm和474nm处的荧光强度比与化合物浓度的对数，并使用Origin7.0将所得曲线拟合为S形曲线。进行了三次独立的测量，并使用它们的平均值和偏差进行IC50数据拟合。 蛋白质核磁共振波谱[1] 所有核磁共振实验均在30°C下在配备低温探头的布鲁克800 MHz仪器上进行。所有NMR样品均在50 mM磷酸钾、0.1 mM EDTA、0.1 mM NaN3、1 mM DTT和5%（v/v）D2O中制备，最终pH值为7.5。15N1 H HSQC实验使用500µM样品，13C1 H HSQC试验在1 mM样品上进行。所有核磁共振数据均使用NMRPipe和Sparky进行处理。加权化学位移变化（百万分之几）通过以下方程式计算：�HN |+（|∆�N|/4.69） |
| 细胞实验 |
蛋白质印迹分析[2]
细胞类型： 4 × 106 SEM 细胞。 测试浓度：10μM。 孵化持续时间：6 小时。 实验结果：细胞中CBFβ与RUNX1的结合微弱减弱（可能是由于其溶解性差）。 共免疫沉淀试验[2] 4×106 SEM细胞用DMSO或10μM的AI-4-88、AI-10-47、AI-10-10-104、AI-12-126和AI-14-91处理6小时。细胞在改良的RIPA缓冲液（50 mM Tris pH 7.5、150 mM NaCl、1%NP40、0.25%脱氧胆酸钠和1 mM EDTA）中裂解。使用抗RUNX1抗体和蛋白-A琼脂糖珠从细胞裂解物中免疫沉淀RUNX1，如下所示：将细胞裂解物与蛋白A琼脂糖珠和2μg RUNX1抗体在IP缓冲液I（50 mM Tris pH 7.5，150 mM NaCl，0.5%NP40，0.25%脱氧胆酸钠）中混合，并以10 rpm的速度旋转5小时。用IP缓冲液Ⅰ洗涤琼脂糖珠两次，然后用IP缓冲溶液II（50 mM Tris pH 7.5，0.1%NP40，0.05%脱氧胆酸钠。）洗涤。所有裂解、免疫沉淀和洗涤步骤都包括DMSO/相应的抑制剂（10μM）。在蛋白质印迹加载缓冲液（100 mM Tris-HCL pH 6.8，200 mM DTT，4%SDS，0.2%溴酚蓝，20%甘油）中，将珠粒在95°C下加热12分钟。洗脱的蛋白质在12%聚丙烯酰胺凝胶中溶解。使用抗CBFβ抗体检测CBFβ。用抗RUNX1抗体重新探测膜，并使用Clean Blot IP检测试剂进行检测。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
对 AI-4-57（AI-10-49 的类似物）的药代动力学性质分析表明，该化合物在小鼠血浆中的半衰期较短（t½ = 37 分钟）（图 S5），且甲氧基上的甲基脱除是其主要代谢产物。三氟甲氧基 (CF3O) 取代已被证实反应活性较低 (18, 19)，因此我们合成了带有该取代基的 AI-10-47。FRET 测量结果表明，该取代基实际上增强了单价化合物的活性（表 1）。肝微粒体稳定性测量表明，AI-10-47降低了代谢风险，因此合成二价衍生物AI-10-49是合理的（表1）。AI-10-49具有强效性（FRET IC50=260nM）（表1）[等温滴定量热法（ITC）测量得到的解离常数（KD）=168nM]（图S6），体内药代动力学性质得到改善（t½ = 380分钟）（图S5），并且与母体质子化二价化合物AI-4-83（IC50约为3 μM）（图1E）相比，对ME-1细胞生长的抑制活性增强（IC50 = 0.6 mM）（图1F）。值得注意的是，AI-10-49 在正常人骨髓细胞中活性极低（IC50 > 25 μM）（图 1G），这表明其具有良好的潜在治疗窗口。在 11 种人类白血病细胞系中，ME-1 细胞是唯一对 AI-10-49 高度敏感的细胞系（图 S7）。[1]
|
| 参考文献 |
[1]. Chemical biology. A small-molecule inhibitor of the aberrant transcription factor CBFβ-SMMHC delays leukemia in mice. Science. 2015 Feb 13;347(6223):779-84.
[2]. Small Molecule Inhibitor of CBFβ-RUNX Binding for RUNX Transcription Factor Driven Cancers. EBioMedicine. 2016 Jun;8:117-131. |
| 其他信息 |
急性髓系白血病 (AML) 是成人白血病中最常见的类型。在染色体倒位 inv(16)(p13q22) 的 AML 中表达的转录因子融合体 CBFβ-SMMHC（核心结合因子 β 与平滑肌肌球蛋白重链）会与野生型 CBFβ 竞争结合转录因子 RUNX1，从而扰乱造血过程中 RUNX1 的活性，并诱发 AML。目前，采用非选择性细胞毒性化疗治疗 inv(16) AML 可获得良好的初始疗效，但长期生存率有限。本文报道了一种蛋白质-蛋白质相互作用抑制剂 AI-10-49 的研发，该抑制剂可选择性地与 CBFβ-SMMHC 结合，并破坏其与 RUNX1 的结合。AI-10-49 可恢复 RUNX1 的转录活性，具有良好的药代动力学特性，并能延缓小鼠白血病的进展。用AI-10-49治疗原发性inv(16) AML患者的原始细胞可诱导选择性细胞死亡。这些数据表明，直接抑制致癌的CBFβ-SMMHC融合蛋白可能是inv(16) AML的有效治疗方法，并为其他癌症的转录因子靶向治疗提供了支持。[1] 转录因子传统上一直被视为不具可行性的药物靶点，但它们具有全新的作用机制，可以更有效地解决干细胞样特性（例如自我更新和化疗耐药性），而这些特性正是导致传统化疗失败的原因。核心结合因子（CBF）是一种异二聚体转录因子，由三种RUNX蛋白（RUNX1-3）之一和一个CBFβ结合伴侣组成。CBFβ通过解除自身抑制来增强RUNX亚基的DNA结合。RUNX1和CBFβ在人类白血病中均经常发生突变。最近的研究表明，RUNX蛋白在多种上皮癌中发挥着关键作用，提示靶向该通路可能具有广泛的应用前景。为了验证这一假设，我们开发了能够与CBFβ结合并抑制其与RUNX结合的小分子。这些抑制剂能够降低RUNX1与靶基因的结合，改变RUNX1靶基因的表达，并影响细胞的存活和分化。这些抑制剂对白血病细胞以及基底样（三阴性）乳腺癌细胞均显示出疗效。这些抑制剂为探索靶向RUNX转录因子功能在其他癌症中的应用价值提供了有效的工具。[2]
|
| 分子式 |
C13H8F3N3O
|
|---|---|
| 分子量 |
279.2173
|
| 精确质量 |
279.061
|
| 元素分析 |
C, 55.92; H, 2.89; F, 20.41; N, 15.05; O, 5.73
|
| CAS号 |
1256094-31-1
|
| 相关CAS号 |
63053-14-5
|
| PubChem CID |
49804932
|
| 外观&性状 |
Off-white to gray solid powder
|
| LogP |
3.3
|
| tPSA |
50.8
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
2
|
| 重原子数目 |
20
|
| 分子复杂度/Complexity |
339
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
FC(OC1C([H])=C([H])C2=C(C=1[H])N([H])C(C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=N1)=N2)(F)F
|
| InChi Key |
JSNWHSDKJSOXET-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C13H8F3N3O/c14-13(15,16)20-8-4-5-9-11(7-8)19-12(18-9)10-3-1-2-6-17-10/h1-7H,(H,18,19)
|
| 化学名 |
2-pyridin-2-yl-6-(trifluoromethoxy)-1H-benzimidazole
|
| 别名 |
AI-10-47; AI-10 47; 1256094-31-1; 2-(Pyridin-2-yl)-6-(trifluoromethoxy)-1H-benzo[d]imidazole; 1H-Benzimidazole, 2-(2-pyridinyl)-6-(trifluoromethoxy)-AI-10-47; 2-(pyridin-2-yl)-5-(trifluoromethoxy)-1H-1,3-benzodiazole; SCHEMBL179143; 2-pyridin-2-yl-6-(trifluoromethoxy)-1H-benzimidazole; CHEMBL3675778; AI10-47; AI 10-47
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~358.14 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.5814 mL | 17.9070 mL | 35.8141 mL | |
| 5 mM | 0.7163 mL | 3.5814 mL | 7.1628 mL | |
| 10 mM | 0.3581 mL | 1.7907 mL | 3.5814 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
N-(2-羟乙基)-N,N-二甲基-2-丙炔-1-溴化铵
亚硒酸钠
ML095 HCL
MDL 100009(MDL100009)
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
