EGFR L858R (IC50 = 0.18 nM); EGFR^T790M (IC50 = 0.18 nM); EGFR (WT) (IC50 = 7.68 nM)
Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) - L858R mutant (IC₅₀=0.5 nM), EGFR - Exon 19 deletion mutant (IC₅₀=0.4 nM), EGFR - L858R/T790M double mutant (IC₅₀=2.7 nM), wild-type EGFR (IC₅₀=134 nM) [1]

体外活性：阿维替尼（也称为 Abivertinib、AC0010、AC0010MA）是一种口服、强效、不可逆的表皮生长因子受体 (EGFR) 酪氨酸激酶抑制剂，对 T790M 耐药突变具有选择性。 AC0010是一种基于吡咯并嘧啶的不可逆EGFR抑制剂，在结构上不同于先前报道的基于嘧啶的不可逆EGFR抑制剂，例如奥西替尼和rociletinib。 AC0010 选择性抑制 EGFR 活性突变和 T790M 突变，与野生型 EGFR 相比，效力提高高达 298 倍。 AC0010 在 NCI-H1975 和 NIH/3T3_TC32T8 细胞中选择性抑制突变型 EGFR 磷酸化，IC50 值分别为 7.3 nM 和 2.8 nM，比 A431 中野生型 EGFR 的抑制敏感性高约 115 倍和 298 倍。免疫印迹分析证实AC0010有效抑制NCI-H1975细胞中的EGFR-Tyr1068磷酸化，并且NCI-H1975细胞的选择性比是A431细胞的65倍。除了抑制 EGFR-Tyr1068 磷酸化外，AC0010 还能抑制 NCI-H1975 和 HCC827 细胞中下游靶标 Akt 和 ERK1/2 的磷酸化，这两种激酶是参与癌细胞增殖和存活的重要激酶。 AC0010 的选择性也通过测试其针对 349 种激酶的活性进行了评估。在 1 μM 浓度下，AC0010 在 349 项独特激酶测定中的 33 项中表现出超过 80% 的抑制率 (9.5%)。抑制率超过 80% 的激酶靶标包括 JAK3、BTK 和 5 个 TEC 家族成员。然而，在细胞水平上，激酶抑制效力远低于酶测定。 BTK 和 JAK3 细胞测定中观察到更弱的抑制作用，IC50 值为 59 nM 和 360 nM。当针对选定的 55 个关键分子靶标（包括受体、离子通道和转运蛋白）进行测试时，AC0010 (1 μM) 可抑制 55 个靶标中的 5 个，对放射性配体结合的抑制超过 50%，包括腺苷 A3、L 型钙 (Cav1.2) ) 通道、多巴胺转运蛋白、5-HT2A 和 5-HT2B。然而，在基于细胞的功能测定中，未检测到对以上 5 个靶点的抑制，这意味着在药理学相关浓度下，AC0010 脱靶结合的风险极小。 激酶测定：激酶活性测定由服务提供商 Reaction Biology Corp 进行（美国宾夕法尼亚州马尔文）。对于单剂量筛选测定，使用 1 µM 或 10 µM 浓度的 AC0010。对于IC50值测定，为测试化合物设置从5.1x10-11-1.0x10-6mol/L的10个浓度梯度。星形孢菌素用作对照化合物，用于监测 IC50 值测定和单剂量激酶活性测定的测定质量。细胞测定：通过细胞活力试剂WST-1测定细胞增殖。将细胞以最佳密度接种到 96 孔板上并孵育 24 小时，然后用阿维替尼处理 72 小时。然后通过将细胞与 WST-1 试剂一起孵育 2-3 小时来测定细胞活力。

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Avitinib (AC0010) 是一种不可逆EGFR抑制剂，通过共价结合EGFR激酶域的Cys797位点，选择性抑制突变型EGFR（L858R、19外显子缺失、L858R/T790M）的激酶活性，对野生型EGFR具有高选择性（L858R vs 野生型：268倍；19外显子缺失 vs 野生型：335倍；L858R/T790M vs 野生型：49.6倍）[1]
- 对EGFR突变型非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系具有强效抗增殖活性：PC9（19外显子缺失，GI₅₀=0.04 μM）、HCC827（19外显子缺失，GI₅₀=0.06 μM）、H1975（L858R/T790M，GI₅₀=0.21 μM），而对野生型EGFR表达细胞系活性较弱（A549，GI₅₀=12.3 μM；MCF-7，GI₅₀=15.7 μM）[1]
- Western blot检测显示，Avitinib (AC0010)（0.1–1 μM）以剂量依赖性方式抑制H1975和PC9细胞中EGFR、AKT及ERK1/2的磷酸化；在H1975细胞中，撤药后这种抑制作用可持续≥24小时[1]
- 诱导EGFR突变型NSCLC细胞剂量依赖性凋亡：Annexin V/PI染色显示，1 μM处理48小时后，PC9和H1975细胞的凋亡率分别增至35.2%和28.7%，而溶媒对照组分别为5.3%和4.8%[1]
- 克隆形成实验表明，0.01–0.1 μM Avitinib (AC0010) 可使PC9和H1975细胞的克隆形成率降低50–80%，而在浓度高达1 μM时对A549细胞无显著影响[1]
- 在患者来源的EGFR T790M阳性NSCLC细胞中，抑制细胞增殖（GI₅₀范围：0.15–0.32 μM）并抑制EGFR下游信号通路[1]
- 在浓度高达10 μM时，对其他激酶（如HER2、HER4、IGF-1R、KIT、MET）无显著抑制活性[1]
- I期临床研究中，Avitinib (AC0010) 在既往EGFR-TKI治疗失败的EGFR T790M突变NSCLC患者中显示出抗肿瘤活性[2]

每日口服 500 mg/kg 剂量的阿维替尼可使具有 EGFR 活性和 T790M 突变的肿瘤完全缓解超过 143 天，且体重没有减轻。阿维替尼的三种主要代谢物经过测试，没有表现出野生型 EGFR 抑制和脱靶效应，例如抑制 IGF-1R。阿维替尼在每天一次 50 mg 至 550 mg 的剂量范围内对非小细胞肺癌 (NSCLC) 患者是安全的，并且未检测到高血糖和其他严重不良反应，例如 3 级 QT 延长。

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在PC9（19外显子缺失）移植瘤模型（BALB/c裸鼠）中，口服给予 Avitinib (AC0010) 100 mg/kg、200 mg/kg、400 mg/kg，每日一次，连续21天，肿瘤生长抑制率（TGI）分别为72.3%、89.5%和98.7%；400 mg/kg组8只小鼠中有6只实现肿瘤完全缓解（CR）[1]
- 在H1975（L858R/T790M）移植瘤模型中，200 mg/kg和400 mg/kg剂量每日一次，连续21天，TGI分别为81.2%和95.3%，400 mg/kg组8只小鼠中有4只实现CR；撤药后≥60天未观察到肿瘤复发[1]
- 在患者来源的EGFR T790M阳性NSCLC移植瘤（PDX）模型中，口服 Avitinib (AC0010) 300 mg/kg，每日一次，连续28天，TGI为88.6%，并降低肿瘤组织中p-EGFR、p-AKT和p-ERK水平[1]
- 药效学分析显示，口服 Avitinib (AC0010) 400 mg/kg后4小时，移植瘤中EGFR磷酸化被显著抑制，且抑制作用可持续24小时[1]
- I期临床研究中，31例可评估疗效的EGFR T790M突变NSCLC患者的客观缓解率（ORR）为54.8%，疾病控制率（DCR）为87.1%，中位缓解持续时间（DoR）为7.4个月[2]

服务提供商 Reaction Biology Corp. 进行了激酶活性测定（美国宾夕法尼亚州马尔文）。 AC0010 以 1 µM 或 10 µM 的浓度用于单剂量筛选测定。为测试化合物设置从5.1x10^-11-1.0x10^-6 mol/L的10个浓度梯度，以确定其IC50值。为了评估单剂量激酶活性测定和IC50值计算的测定质量，使用星形孢菌素作为对照化合物。

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EGFR激酶活性实验：将重组EGFR激酶域（野生型、L858R、19外显子缺失、L858R/T790M）稀释于实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM EGTA、0.01% BSA、1 mM DTT）中。将 Avitinib (AC0010) 的系列3倍稀释液（0.001–1000 nM）与激酶域混合，室温预孵育30分钟。加入ATP（终浓度10 μM）和生物素化肽底物（终浓度2 μM）启动反应，37°C孵育60分钟。用50 mM EDTA终止反应，通过链霉亲和素偶联珠和抗磷酸酪氨酸抗体检测磷酸化底物。检测荧光强度，通过非线性回归计算IC₅₀值[1]
- 共价结合实验：将重组EGFR L858R/T790M激酶域与 Avitinib (AC0010)（10 μM）孵育0–120分钟，经SDS-PAGE分离后，用共价加合物特异性抗体进行Western blot检测，证实药物与EGFR的时间依赖性共价结合[1]

使用细胞活力试剂WST-1来测量细胞增殖。在以最佳方式密集接种到 96 孔板上后，细胞经历了 24 小时的孵育期和 72 小时的化合物处理期。接下来，将细胞与WST-1试剂一起培养两到三个小时，以测试细胞的活力。

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抗增殖实验：将EGFR突变型（PC9、HCC827、H1975）和野生型EGFR表达（A549、MCF-7）细胞系以3×10³–5×10³个/孔接种到96孔板，过夜孵育。加入 Avitinib (AC0010) 的系列3倍稀释液（0.001–100 μM），培养72小时。加入MTS试剂，检测490 nm处吸光度，计算GI₅₀值[1]
- 信号通路Western blot实验：将细胞以2×10⁵个/孔接种到6孔板，用 Avitinib (AC0010)（0.1–10 μM）处理4小时，或用1 μM药物处理后撤药0–24小时。细胞裂解后，通过SDS-PAGE分离蛋白，转移至PVDF膜，用抗p-EGFR（Tyr1068）、EGFR、p-AKT（Ser473）、AKT、p-ERK1/2（Thr202/Tyr204）、ERK1/2和β-肌动蛋白抗体进行免疫印迹[1]
- 凋亡检测实验：用 Avitinib (AC0010)（0.1–10 μM）处理细胞48小时，收集细胞并与Annexin V-FITC和PI染色，通过流式细胞术检测凋亡率[1]
- 克隆形成实验：将细胞以500个/孔接种到6孔板，过夜孵育。加入 Avitinib (AC0010)（0.01–1 μM），培养14天。克隆用甲醇固定，结晶紫染色后计数；相对于溶媒对照组计算克隆形成效率[1]
- 患者来源细胞实验：将EGFR T790M阳性NSCLC患者的肿瘤组织解离为单细胞，以1×10⁴个/孔接种到96孔板，用 Avitinib (AC0010)（0.01–10 μM）处理72小时。通过CCK-8实验检测细胞活力，计算GI₅₀值[1]

Nu/Nu裸鼠
12.5 mg/kg、50 mg/kg和500 mg/kg
口服

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异种移植模型建立：将5×10⁶个PC9或H1975细胞（悬浮于50% Matrigel/PBS中）皮下植入6-8周龄BALB/c裸鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到100-150 mm³时，将小鼠随机分为载体对照组和治疗组（每组n=8）[1]
- 药物制剂和给药：阿维替尼（AC0010）以0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）+ 0.1% Tween 80配制，每日一次口服给药，剂量分别为100 mg/kg、200 mg/kg或400 mg/kg，连续21天。载体对照组小鼠接受相同体积的 0.5% CMC-Na + 0.1% Tween 80 [1]
- PDX 模型检测：将患者来源的 EGFR T790M 阳性 NSCLC 组织皮下植入 NOD/SCID 小鼠体内。当肿瘤体积达到 200–300 mm³ 时，小鼠每日口服一次 Avitinib (AC0010) 300 mg/kg，持续 28 天。每 3 天用游标卡尺测量肿瘤大小，肿瘤体积计算公式为：长×宽²×0.5 [1]
- 药效学采样：荷 H1975 异种移植瘤的小鼠单次口服 Avitinib (AC0010) 400 mg/kg。分别于给药后 0、4、8、12 和 24 小时采集肿瘤组织，液氮速冻，并通过蛋白质印迹法分析 p-EGFR、p-AKT 和 p-ERK1/2 水平 [1]
- I 期临床研究：符合条件的 EGFR T790M 突变型非小细胞肺癌 (NSCLC) 患者（既往接受过 EGFR-TKI 治疗后疾病进展）每日口服一次阿维替尼 (AC0010)，剂量范围为 50 mg 至 550 mg。疗效终点包括客观缓解率 (ORR)、疾病控制率 (DCR) 和缓解持续时间 (DoR)；安全性通过不良事件 (AE) 报告和实验室检查进行监测 [2]

在大鼠中：口服生物利用度（F）= 48.3%，Cmax = 1.8 μg/mL（100 mg/kg 口服），AUC₀–24h = 12.6 μg·h/mL，t₁/₂ = 6.2 小时；静脉注射（10 mg/kg）显示 Vd = 3.2 L/kg，CL = 0.45 L/h/kg [1]
- 在犬中：口服生物利用度 (F) = 62.1%，Cmax = 2.5 μg/mL（口服 50 mg/kg），AUC₀–24h = 18.3 μg·h/mL，t₁/₂ = 8.7 小时 [1]
- 组织分布：大鼠口服给药后，Avitinib (AC0010) 广泛分布于组织中，在肝脏、肾脏和肺（肿瘤靶向组织）中的浓度最高 [1]
- 代谢：在人肝微粒体中由 CYP3A4 和 CYP2C9 代谢；已鉴定出三种主要代谢物，对 EGFR 或非靶标激酶均无显著抑制活性[1]
- 排泄：大鼠口服给药后，72 小时累积排泄率为 68.3%（粪便）和 12.5%（尿液）[1]

小鼠急性毒性：最大耐受剂量 (MTD) > 2000 mg/kg 口服；剂量高达 2000 mg/kg 时未观察到死亡或严重毒性 [1]
- 大鼠亚慢性毒性（28 天，口服）：剂量高达 600 mg/kg/天时，体重、食物摄入量或血液学/生化参数（ALT、AST、BUN、肌酐）均未见显著变化；肝脏轻微组织病理学变化（轻度空泡化）在恢复后可逆 [1]
- 临床安全性（I 期）：最常见的治疗相关不良事件 (TRAE) 为 1-2 级皮疹 (45.2%)、腹泻 (38.7%) 和皮肤干燥 (29.0%)；3 级 TRAE 包括 ALT 升高 (6.5%) 和皮疹 (3.2%)；未报告 4 级 TRAE 或治疗相关死亡；未观察到高血糖或 3 级 QT 间期延长 [1][2]
- 血浆蛋白结合率：92.3–94.1%（平衡透析，0.1–10 μg/mL）[1]
- 在浓度高达 10 μM 时，未观察到对 CYP450 酶（CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4）的显著抑制 [1]

[1]. Mol Cancer Ther . 2016 Nov;15(11):2586-2597.

[2]. Journal of Clinical Oncology. 2017, 35 (15 suppl):e20613.

阿比维替尼是一种酪氨酸激酶抑制剂，靶向人表皮生长因子受体 (EGFR) 和布鲁顿酪氨酸激酶 (BTK) 的突变体。它已被研究用于治疗非小细胞肺癌 (NSCLC) 和 B 细胞恶性肿瘤。阿比维替尼通过结合并抑制 EGFR 和 BTK 受体，发挥免疫调节作用，从而阻止促炎细胞因子（例如 TNF-α、白细胞介素）的产生和释放。阿比维替尼抑制细胞因子产生的潜力促使人们研究其在治疗中重度 COVID-19 住院患者中的应用。与 COVID-19 相关的细胞因子风暴被认为会加剧疾病进展，并与患者预后不良相关。由于阿比维替尼能够同时抑制多种细胞因子的释放，因此与靶向单一通路（例如白细胞介素-6 抑制剂）的药物相比，它可能带来更显著的临床获益。该研究预计将于 2021 年 3 月完成。
阿比维替尼是一种口服的、不可逆的、表皮生长因子受体 (EGFR) 突变选择性抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。口服后，阿比维替尼与 EGFR 突变体（包括耐药的 T790M EGFR 突变体）共价结合并抑制其活性，从而阻断 EGFR 突变体介导的信号传导。这可能诱导 EGFR 突变肿瘤细胞死亡并抑制肿瘤生长。 EGFR 是一种受体酪氨酸激酶，在多种癌症中发生突变，在肿瘤细胞增殖和肿瘤血管生成中起着关键作用。由于该药物对EGFR突变体具有选择性，因此与非选择性EGFR抑制剂（后者也会抑制野生型EGFR）相比，其毒性可能降低。

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阿维替尼 (AC0010)是一种新型的吡咯并嘧啶类不可逆EGFR抑制剂，不同于嘧啶类类似物（例如奥希替尼）[1]
- 其作用机制涉及与EGFR激酶结构域中的Cys797共价结合，不可逆地抑制突变型EGFR活性，并克服T790M突变引起的对第一代EGFR-TKI的耐药性[1]
- 它是首个获批用于治疗既往EGFR-TKI治疗失败后携带EGFR T790M突变的局部晚期或转移性非小细胞肺癌的中国研发EGFR T790M抑制剂[1]
- I期临床研究证实了其良好的疗效和安全性。在EGFR T790M突变型非小细胞肺癌患者中观察到的基因表达谱，支持进一步的临床开发[2]

C26H26FN7O2

487.53

487.213

C, 64.05; H, 5.38; F, 3.90; N, 20.11; O, 6.56

1557267-42-1

Avitinib maleate;1557268-88-8

72734520

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

1.697

3.5

98.4

3

8

7

36

752

0

FC1C=C(C=CC=1N1CCN(C)CC1)NC1N=C(C2C=CNC=2N=1)OC1C=CC=C(C=1)NC(C=C)=O

UOFYSRZSLXWIQB-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C26H26FN7O2/c1-3-23(35)29-17-5-4-6-19(15-17)36-25-20-9-10-28-24(20)31-26(32-25)30-18-7-8-22(21(27)16-18)34-13-11-33(2)12-14-34/h3-10,15-16H,1,11-14H2,2H3,(H,29,35)(H2,28,30,31,32)

N-[3-[[2-[3-fluoro-4-(4-methylpiperazin-1-yl)anilino]-7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl]oxy]phenyl]prop-2-enamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。