| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
SUMO-activating enzyme(IC50= 0.2 μM)
More than 500 times more selective for SUMOylation than ubiquitylation is COH000. Without immediately competing with ATP or SUMO1 binding, COH000 inhibits SUMO adenylation. Because of its incredibly slow off-rate, COH000 is likely covalently bound to the enzyme[1]. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
COH000 对 SUMO 化的选择性比泛素化高 500 倍以上。 COH000 不会立即与 ATP 或 SUMO1 结合竞争,而是抑制 SUMO 腺苷酸化。由于其解离速率极其缓慢,COH000 很可能与酶共价结合[1]。
在生化实验中,COH000 抑制SUMO化的平均IC50约为0.2 µM。它对SUMO化的选择性超过对泛素化的500倍,因为在浓度高达100 µM时它不抑制泛素化。[1] COH000 特异性抑制SUMO-E1硫酯复合物的形成以及SUMO E1催化中的ATP依赖性腺苷化步骤。这种抑制作用对ATP和SUMO1是非竞争性的。[1] COH000 对SUMO E1的抑制是不可逆且时间依赖性的,符合共价机制。动力学分析得出KI为0.64 µM,kinact为0.14 min⁻¹。[1] 质谱分析证实COH000 特异性地与SAE2(UBA2)的Cys30形成共价加合物。催化性Cys173未被修饰。[1] 将SAE2中的Cys30突变为Ser(C30S)消除了COH000 的抑制作用,证实了Cys30是关键的结合位点。[1] COH000 的结合诱导了SUMO E1的构象变化,这通过其热变性曲线(熔解温度升高)的改变得到证明。[1] 在细胞中,COH000 处理导致SAE2降解增加,可能是通过增强泛素-蛋白酶体介导的降解,脉冲追踪实验和蛋白酶体抑制后SAE2泛素化增加证实了这一点。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在血浆酯酶缺陷的SCID小鼠(Es1e/SCID)中建立的HCT-116结直肠癌异种移植模型中,与载体对照组相比,皮下瘤周注射COH000(10 mg/kg,每日一次,持续14天)显著抑制了肿瘤生长。[1]
来自COH000 治疗小鼠的肿瘤组织显示SAE2蛋白和c-Myc蛋白水平降低,细胞凋亡增加(通过TUNEL染色检测),以及miR-34b水平升高。[1] 在来源于患者来源异种移植(PDX)组织的原发性结直肠癌细胞中,COH000 处理降低了c-Myc蛋白水平(在基线c-Myc高的样本中),并降低了癌细胞活力,同时诱导了凋亡。[1] |
| 酶活实验 |
SUMO化检测(AlphaScreen): 进行生化实验以检测SUMO1与RanGAP1的结合物形成。测定混合物含有SAE(E1)、Ubc9(E2)、GST-SUMO和His6-RanGAP1,置于缓冲液(50 mM Tris-HCl pH 7.4, 0.3 mM DTT, 10 mM MgCl2, 0.005% Tween-20)中并加入ATP。孵育后,加入镍螯合物受体珠和谷胱甘肽供体珠,使用AlphaScreen技术进行检测。通过发光信号的降低来测量化合物的抑制效果。[1]
ATP:PPi交换实验: 该实验专门测量SUMO E1催化中的腺苷化步骤。SUMO E1与化合物预孵育。反应通过加入含有ATP和[³²P]标记的焦磷酸(PPi)的混合物启动。通过将新形成的[³²P]-ATP吸附到活性炭树脂上,然后洗涤并进行闪烁计数,来测量标记PPi转化为ATP的量,从而反映腺苷化活性。[1] 共价修饰的LC-MS/MS分析: 将预先用或不用COH000 抑制的SUMO E1蛋白进行在线胃蛋白酶消化。产生的肽段通过液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)进行分析。针对SUMO E1序列搜索数据,并允许在半胱氨酸残基上存在对应于COH000 添加(+419.1733 Da)的潜在修饰质量,以识别特定的共价修饰位点。[1] 时间依赖性抑制动力学: 将SUMO E1与不同浓度的COH000 预孵育不同时间。然后使用均相时间分辨荧光(HTRF)法检测Ubc9•SUMO-1硫酯的形成来测量残余酶活性。将不同抑制剂浓度下观察到的失活速率(kobs)作图,并拟合双曲线方程以推导抑制常数(KI)和最大失活速率(kinact)。[1] |
| 细胞实验 |
细胞SUMO化抑制: 用COH000 在培养基中处理细胞(如HCT-116)18小时。然后裂解细胞,并使用抗SUMO-1和抗SUMO-2/3抗体通过Western blot评估总体SUMO化水平。[1]
细胞中选择性E1抑制: 为了评估选择性,监测了E2硫酯中间体的形成。用COH000 处理的细胞被裂解,通过Western blot分析裂解液中SUMO•Ubc9、泛素•Ubc5和NEDD8•Ubc12硫酯复合物的水平。[1] 细胞热位移分析(CETSA): 用COH000 或载体处理HCT-116细胞2小时。然后在热循环仪中将细胞在不同温度(42–56°C)下加热。加热后裂解细胞,并通过Western blot定量可溶性部分中残留的热稳定性SAE2蛋白量。热稳定性增加表明靶标结合。[1] 细胞凋亡实验(Annexin V染色): 用COH000 或载体处理HCT-116细胞(亲本、过表达SAE2或敲低SAE2)20小时。然后收集细胞,用Annexin V-APC染色,并通过流式细胞术分析以确定凋亡细胞的百分比。[1] 细胞增殖实验(MTS): 用COH000 或其无活性类似物在指定浓度下处理细胞。72小时后,使用基于MTS的测定法按照标准方案测量细胞增殖/活力。读取吸光度以确定抑制效果。[1] miRNA和mRNA表达分析: 用COH000 处理淋巴瘤(Raji)和结直肠癌(HCT116)细胞。提取总RNA和microRNA。使用特定的TaqMan assay通过RT-qPCR测量miR-34b水平。同样通过RT-qPCR测量c-Myc mRNA水平。通过Western blot分析c-Myc蛋白水平。[1] |
| 动物实验 |
小鼠结直肠癌异种移植模型:将HCT-116细胞皮下注射到血浆酯酶缺陷型SCID小鼠(Es1e/SCID)体内。待肿瘤可触及后,将小鼠随机分配至治疗组。COH000溶解于溶剂(5% DMSO,30% Solutol,PBS)中。小鼠每日一次皮下注射COH000(10 mg/kg体重)或等体积的溶剂,连续14天。定期测量肿瘤体积。实验结束时,处死小鼠,切除肿瘤进行后续分析(免疫组化、蛋白质印迹、TUNEL、RNA提取)。[1]
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| 药代性质 (ADME/PK) |
该手稿指出,COH000含有两个酯键,因此在体内易受血浆酯酶水解。为了在疗效研究中规避这一问题,研究人员使用血浆酯酶缺陷型小鼠品系(Es1e/SCID)进行异种移植实验。[1]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
COH000是首个SUMO激活酶(E1)的变构共价抑制剂。[1]
其作用机制涉及与一个深埋的变构位点(UBA2上的Cys30)结合,诱导构象变化,从而抑制SUMO激活的腺苷酸化步骤,并促进E1酶自身的降解。[1] 这一变构抑制机制的发现为靶向类泛素修饰提供了一种新方法,是对现有ATP竞争性抑制剂的补充。[1] COH000在临床前模型中通过抑制SUMO化发挥抗癌活性,导致抑癌miR-34b上调、致癌c-Myc下调以及细胞凋亡诱导。这表明其具有治疗c-Myc和KRas驱动型癌症的潜力。[1] |
| 分子式 |
C25H25NO5
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|---|---|
| 分子量 |
419.469707250595
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| 精确质量 |
419.17
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| 元素分析 |
C, 71.58; H, 6.01; N, 3.34; O, 19.07
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| CAS号 |
1534358-79-6
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| PubChem CID |
60156415
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| LogP |
4
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| tPSA |
73.9
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
9
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| 重原子数目 |
31
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| 分子复杂度/Complexity |
745
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| 定义原子立体中心数目 |
3
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| SMILES |
CC1=CC=C(C=C1)C[C@H]([C@]23C=C[C@H](O2)C(=C3C(=O)OC)C(=O)OC)NC4=CC=CC=C4
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| InChi Key |
UFPINDDCTUCUSA-ABGUIGEDSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C25H25NO5/c1-16-9-11-17(12-10-16)15-20(26-18-7-5-4-6-8-18)25-14-13-19(31-25)21(23(27)29-2)22(25)24(28)30-3/h4-14,19-20,26H,15H2,1-3H3/t19?,20-,25?/m1/s1
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| 化学名 |
dimethyl 1-((R)-1-(phenylamino)-2-(p-tolyl)ethyl)-7-oxabicyclo [2.2.1]hepta-2,5-diene-2,3-dicarboxylate
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| 别名 |
COH000; COH-000; COH 000;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : 35.71~50 mg/mL ( 85.13~119.19 mM )
Ethanol : ~1 mg/mL |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3840 mL | 11.9198 mL | 23.8396 mL | |
| 5 mM | 0.4768 mL | 2.3840 mL | 4.7679 mL | |
| 10 mM | 0.2384 mL | 1.1920 mL | 2.3840 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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