| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
SUMO-activating enzyme(IC50= 0.2 μM)
More than 500 times more selective for SUMOylation than ubiquitylation is COH000. Without immediately competing with ATP or SUMO1 binding, COH000 inhibits SUMO adenylation. Because of its incredibly slow off-rate, COH000 is likely covalently bound to the enzyme[1]. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
COH000 对 SUMO 化的选择性比泛素化高 500 倍以上。 COH000 不会立即与 ATP 或 SUMO1 结合竞争，而是抑制 SUMO 腺苷酸化。由于其解离速率极其缓慢，COH000 很可能与酶共价结合[1]。
在生化实验中，COH000 抑制SUMO化的平均IC50约为0.2 µM。它对SUMO化的选择性超过对泛素化的500倍，因为在浓度高达100 µM时它不抑制泛素化。[1] COH000 特异性抑制SUMO-E1硫酯复合物的形成以及SUMO E1催化中的ATP依赖性腺苷化步骤。这种抑制作用对ATP和SUMO1是非竞争性的。[1] COH000 对SUMO E1的抑制是不可逆且时间依赖性的，符合共价机制。动力学分析得出KI为0.64 µM，kinact为0.14 min⁻¹。[1] 质谱分析证实COH000 特异性地与SAE2（UBA2）的Cys30形成共价加合物。催化性Cys173未被修饰。[1] 将SAE2中的Cys30突变为Ser（C30S）消除了COH000 的抑制作用，证实了Cys30是关键的结合位点。[1] COH000 的结合诱导了SUMO E1的构象变化，这通过其热变性曲线（熔解温度升高）的改变得到证明。[1] 在细胞中，COH000 处理导致SAE2降解增加，可能是通过增强泛素-蛋白酶体介导的降解，脉冲追踪实验和蛋白酶体抑制后SAE2泛素化增加证实了这一点。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在血浆酯酶缺陷的SCID小鼠（Es1e/SCID）中建立的HCT-116结直肠癌异种移植模型中，与载体对照组相比，皮下瘤周注射COH000（10 mg/kg，每日一次，持续14天）显著抑制了肿瘤生长。[1]
来自COH000 治疗小鼠的肿瘤组织显示SAE2蛋白和c-Myc蛋白水平降低，细胞凋亡增加（通过TUNEL染色检测），以及miR-34b水平升高。[1] 在来源于患者来源异种移植（PDX）组织的原发性结直肠癌细胞中，COH000 处理降低了c-Myc蛋白水平（在基线c-Myc高的样本中），并降低了癌细胞活力，同时诱导了凋亡。[1] |
| 酶活实验 |
SUMO化检测（AlphaScreen）： 进行生化实验以检测SUMO1与RanGAP1的结合物形成。测定混合物含有SAE（E1）、Ubc9（E2）、GST-SUMO和His6-RanGAP1，置于缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.4, 0.3 mM DTT, 10 mM MgCl2, 0.005% Tween-20）中并加入ATP。孵育后，加入镍螯合物受体珠和谷胱甘肽供体珠，使用AlphaScreen技术进行检测。通过发光信号的降低来测量化合物的抑制效果。[1]
ATP:PPi交换实验： 该实验专门测量SUMO E1催化中的腺苷化步骤。SUMO E1与化合物预孵育。反应通过加入含有ATP和[³²P]标记的焦磷酸（PPi）的混合物启动。通过将新形成的[³²P]-ATP吸附到活性炭树脂上，然后洗涤并进行闪烁计数，来测量标记PPi转化为ATP的量，从而反映腺苷化活性。[1] 共价修饰的LC-MS/MS分析： 将预先用或不用COH000 抑制的SUMO E1蛋白进行在线胃蛋白酶消化。产生的肽段通过液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）进行分析。针对SUMO E1序列搜索数据，并允许在半胱氨酸残基上存在对应于COH000 添加（+419.1733 Da）的潜在修饰质量，以识别特定的共价修饰位点。[1] 时间依赖性抑制动力学： 将SUMO E1与不同浓度的COH000 预孵育不同时间。然后使用均相时间分辨荧光（HTRF）法检测Ubc9•SUMO-1硫酯的形成来测量残余酶活性。将不同抑制剂浓度下观察到的失活速率（kobs）作图，并拟合双曲线方程以推导抑制常数（KI）和最大失活速率（kinact）。[1] |
| 细胞实验 |
细胞SUMO化抑制： 用COH000 在培养基中处理细胞（如HCT-116）18小时。然后裂解细胞，并使用抗SUMO-1和抗SUMO-2/3抗体通过Western blot评估总体SUMO化水平。[1]
细胞中选择性E1抑制： 为了评估选择性，监测了E2硫酯中间体的形成。用COH000 处理的细胞被裂解，通过Western blot分析裂解液中SUMO•Ubc9、泛素•Ubc5和NEDD8•Ubc12硫酯复合物的水平。[1] 细胞热位移分析（CETSA）： 用COH000 或载体处理HCT-116细胞2小时。然后在热循环仪中将细胞在不同温度（42–56°C）下加热。加热后裂解细胞，并通过Western blot定量可溶性部分中残留的热稳定性SAE2蛋白量。热稳定性增加表明靶标结合。[1] 细胞凋亡实验（Annexin V染色）： 用COH000 或载体处理HCT-116细胞（亲本、过表达SAE2或敲低SAE2）20小时。然后收集细胞，用Annexin V-APC染色，并通过流式细胞术分析以确定凋亡细胞的百分比。[1] 细胞增殖实验（MTS）： 用COH000 或其无活性类似物在指定浓度下处理细胞。72小时后，使用基于MTS的测定法按照标准方案测量细胞增殖/活力。读取吸光度以确定抑制效果。[1] miRNA和mRNA表达分析： 用COH000 处理淋巴瘤（Raji）和结直肠癌（HCT116）细胞。提取总RNA和microRNA。使用特定的TaqMan assay通过RT-qPCR测量miR-34b水平。同样通过RT-qPCR测量c-Myc mRNA水平。通过Western blot分析c-Myc蛋白水平。[1] |
| 动物实验 |
Colorectal Cancer Xenograft Model in Mice: HCT-116 cells were subcutaneously injected into plasma esterase-deficient SCID mice (Es1e/SCID). Once tumors became palpable, mice were randomly assigned to treatment groups. COH000 was dissolved in a vehicle (5% DMSO, 30% solutol in PBS). Mice received subcutaneous peritumoral injections of COH000 (10 mg/kg body weight) or an equal volume of vehicle, once daily for 14 days. Tumor volume was measured regularly. At the endpoint, mice were euthanized, and tumors were excised for further analysis (IHC, Western blot, TUNEL, RNA extraction). [1]
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| 药代性质 (ADME/PK) |
The manuscript notes that COH000 contains two ester bonds, making it susceptible to hydrolysis by plasma esterases in vivo. To circumvent this for efficacy studies, a plasma esterase-deficient mouse strain (Es1e/SCID) was used for the xenograft experiments. [1]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
COH000 represents the first-in-class allosteric, covalent inhibitor of the SUMO-activating enzyme (E1). [1]
Its mechanism involves binding to a buried allosteric site (Cys30 on UBA2), inducing a conformational change that inhibits the adenylation step of SUMO activation and also promotes degradation of the E1 enzyme itself. [1] The discovery of this allosteric inhibitory mechanism provides a novel approach to target ubiquitin-like modifications, complementary to existing ATP-competitive inhibitors. [1] COH000 demonstrates anti-cancer activity in preclinical models by inhibiting SUMOylation, leading to upregulation of tumor-suppressive miR-34b, downregulation of oncogenic c-Myc, and induction of apoptosis. This suggests potential for treating c-Myc and KRas-driven cancers. [1] |
| 分子式 |
C25H25NO5
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|---|---|
| 分子量 |
419.469707250595
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| 精确质量 |
419.17
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| 元素分析 |
C, 71.58; H, 6.01; N, 3.34; O, 19.07
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| CAS号 |
1534358-79-6
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| PubChem CID |
60156415
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| LogP |
4
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| tPSA |
73.9
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
9
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| 重原子数目 |
31
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| 分子复杂度/Complexity |
745
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| 定义原子立体中心数目 |
3
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| SMILES |
CC1=CC=C(C=C1)C[C@H]([C@]23C=C[C@H](O2)C(=C3C(=O)OC)C(=O)OC)NC4=CC=CC=C4
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| InChi Key |
UFPINDDCTUCUSA-ABGUIGEDSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C25H25NO5/c1-16-9-11-17(12-10-16)15-20(26-18-7-5-4-6-8-18)25-14-13-19(31-25)21(23(27)29-2)22(25)24(28)30-3/h4-14,19-20,26H,15H2,1-3H3/t19?,20-,25?/m1/s1
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| 化学名 |
dimethyl 1-((R)-1-(phenylamino)-2-(p-tolyl)ethyl)-7-oxabicyclo [2.2.1]hepta-2,5-diene-2,3-dicarboxylate
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| 别名 |
COH000; COH-000; COH 000;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : 35.71~50 mg/mL ( 85.13~119.19 mM )
Ethanol : ~1 mg/mL |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3840 mL | 11.9198 mL | 23.8396 mL | |
| 5 mM | 0.4768 mL | 2.3840 mL | 4.7679 mL | |
| 10 mM | 0.2384 mL | 1.1920 mL | 2.3840 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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