COH000

别名: COH000; COH-000; COH 000; (1R,4S)-二甲基1-((R)-1-(苯基氨基)-2-(对甲苯基)乙基)-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2,5-二烯-2,3-二羧酸
目录号: V32650 纯度: ≥98%
COH000 是一种泛素样 1-激活酶(SUMO 激活酶)(E1) 的变构、共价和不可逆(共价)抑制剂,体外 SUMO 化的 IC50 为 0.2 μM。
COH000 CAS号: 1534358-79-6
产品类别: E1 Activating
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
Other Sizes
点击了解更多
  • 与全球5000+客户建立关系
  • 覆盖全球主要大学、医院、科研院所、生物/制药公司等
  • 产品被大量CNS顶刊文章引用
InvivoChem产品被CNS等顶刊论文引用
产品描述
COH000 是一种泛素样 1-激活酶(SUMO 激活酶)(E1) 的变构、共价和不可逆(共价)抑制剂,体外 SUMO 化的 IC50 为 0.2 μM。
生物活性&实验参考方法
靶点
SUMO-activating enzyme(IC50= 0.2 μM)
More than 500 times more selective for SUMOylation than ubiquitylation is COH000. Without immediately competing with ATP or SUMO1 binding, COH000 inhibits SUMO adenylation. Because of its incredibly slow off-rate, COH000 is likely covalently bound to the enzyme[1].
体外研究 (In Vitro)
COH000 对 SUMO 化的选择性比泛素化高 500 倍以上。 COH000 不会立即与 ATP 或 SUMO1 结合竞争,而是抑制 SUMO 腺苷酸化。由于其解离速率极其缓慢,COH000 很可能与酶共价结合[1]。
在生化实验中,COH000 抑制SUMO化的平均IC50约为0.2 µM。它对SUMO化的选择性超过对泛素化的500倍,因为在浓度高达100 µM时它不抑制泛素化。[1]
COH000 特异性抑制SUMO-E1硫酯复合物的形成以及SUMO E1催化中的ATP依赖性腺苷化步骤。这种抑制作用对ATP和SUMO1是非竞争性的。[1]
COH000 对SUMO E1的抑制是不可逆且时间依赖性的,符合共价机制。动力学分析得出KI为0.64 µM,kinact为0.14 min⁻¹。[1]
质谱分析证实COH000 特异性地与SAE2(UBA2)的Cys30形成共价加合物。催化性Cys173未被修饰。[1]
将SAE2中的Cys30突变为Ser(C30S)消除了COH000 的抑制作用,证实了Cys30是关键的结合位点。[1]
COH000 的结合诱导了SUMO E1的构象变化,这通过其热变性曲线(熔解温度升高)的改变得到证明。[1]
在细胞中,COH000 处理导致SAE2降解增加,可能是通过增强泛素-蛋白酶体介导的降解,脉冲追踪实验和蛋白酶体抑制后SAE2泛素化增加证实了这一点。[1]
体内研究 (In Vivo)
在血浆酯酶缺陷的SCID小鼠(Es1e/SCID)中建立的HCT-116结直肠癌异种移植模型中,与载体对照组相比,皮下瘤周注射COH000(10 mg/kg,每日一次,持续14天)显著抑制了肿瘤生长。[1]
来自COH000 治疗小鼠的肿瘤组织显示SAE2蛋白和c-Myc蛋白水平降低,细胞凋亡增加(通过TUNEL染色检测),以及miR-34b水平升高。[1]
在来源于患者来源异种移植(PDX)组织的原发性结直肠癌细胞中,COH000 处理降低了c-Myc蛋白水平(在基线c-Myc高的样本中),并降低了癌细胞活力,同时诱导了凋亡。[1]
酶活实验
SUMO化检测(AlphaScreen): 进行生化实验以检测SUMO1与RanGAP1的结合物形成。测定混合物含有SAE(E1)、Ubc9(E2)、GST-SUMO和His6-RanGAP1,置于缓冲液(50 mM Tris-HCl pH 7.4, 0.3 mM DTT, 10 mM MgCl2, 0.005% Tween-20)中并加入ATP。孵育后,加入镍螯合物受体珠和谷胱甘肽供体珠,使用AlphaScreen技术进行检测。通过发光信号的降低来测量化合物的抑制效果。[1]
ATP:PPi交换实验: 该实验专门测量SUMO E1催化中的腺苷化步骤。SUMO E1与化合物预孵育。反应通过加入含有ATP和[³²P]标记的焦磷酸(PPi)的混合物启动。通过将新形成的[³²P]-ATP吸附到活性炭树脂上,然后洗涤并进行闪烁计数,来测量标记PPi转化为ATP的量,从而反映腺苷化活性。[1]
共价修饰的LC-MS/MS分析: 将预先用或不用COH000 抑制的SUMO E1蛋白进行在线胃蛋白酶消化。产生的肽段通过液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)进行分析。针对SUMO E1序列搜索数据,并允许在半胱氨酸残基上存在对应于COH000 添加(+419.1733 Da)的潜在修饰质量,以识别特定的共价修饰位点。[1]
时间依赖性抑制动力学: 将SUMO E1与不同浓度的COH000 预孵育不同时间。然后使用均相时间分辨荧光(HTRF)法检测Ubc9•SUMO-1硫酯的形成来测量残余酶活性。将不同抑制剂浓度下观察到的失活速率(kobs)作图,并拟合双曲线方程以推导抑制常数(KI)和最大失活速率(kinact)。[1]
细胞实验
细胞SUMO化抑制: 用COH000 在培养基中处理细胞(如HCT-116)18小时。然后裂解细胞,并使用抗SUMO-1和抗SUMO-2/3抗体通过Western blot评估总体SUMO化水平。[1]
细胞中选择性E1抑制: 为了评估选择性,监测了E2硫酯中间体的形成。用COH000 处理的细胞被裂解,通过Western blot分析裂解液中SUMO•Ubc9、泛素•Ubc5和NEDD8•Ubc12硫酯复合物的水平。[1]
细胞热位移分析(CETSA): 用COH000 或载体处理HCT-116细胞2小时。然后在热循环仪中将细胞在不同温度(42–56°C)下加热。加热后裂解细胞,并通过Western blot定量可溶性部分中残留的热稳定性SAE2蛋白量。热稳定性增加表明靶标结合。[1]
细胞凋亡实验(Annexin V染色): 用COH000 或载体处理HCT-116细胞(亲本、过表达SAE2或敲低SAE2)20小时。然后收集细胞,用Annexin V-APC染色,并通过流式细胞术分析以确定凋亡细胞的百分比。[1]
细胞增殖实验(MTS): 用COH000 或其无活性类似物在指定浓度下处理细胞。72小时后,使用基于MTS的测定法按照标准方案测量细胞增殖/活力。读取吸光度以确定抑制效果。[1]
miRNA和mRNA表达分析: 用COH000 处理淋巴瘤(Raji)和结直肠癌(HCT116)细胞。提取总RNA和microRNA。使用特定的TaqMan assay通过RT-qPCR测量miR-34b水平。同样通过RT-qPCR测量c-Myc mRNA水平。通过Western blot分析c-Myc蛋白水平。[1]
动物实验
小鼠结直肠癌异种移植模型:将HCT-116细胞皮下注射到血浆酯酶缺陷型SCID小鼠(Es1e/SCID)体内。待肿瘤可触及后,将小鼠随机分配至治疗组。COH000溶解于溶剂(5% DMSO,30% Solutol,PBS)中。小鼠每日一次皮下注射COH000(10 mg/kg体重)或等体积的溶剂,连续14天。定期测量肿瘤体积。实验结束时,处死小鼠,切除肿瘤进行后续分析(免疫组化、蛋白质印迹、TUNEL、RNA提取)。[1]
药代性质 (ADME/PK)
该手稿指出,COH000含有两个酯键,因此在体内易受血浆酯酶水解。为了在疗效研究中规避这一问题,研究人员使用血浆酯酶缺陷型小鼠品系(Es1e/SCID)进行异种移植实验。[1]
参考文献

[1]. Allosteric Inhibition of Ubiquitin-like Modifications by a Class of Inhibitor of SUMO-Activating Enzyme. Cell Chem Biol. 2018 Dec 5. pii: S2451-9456(18)30386-6.

其他信息
COH000是首个SUMO激活酶(E1)的变构共价抑制剂。[1]
其作用机制涉及与一个深埋的变构位点(UBA2上的Cys30)结合,诱导构象变化,从而抑制SUMO激活的腺苷酸化步骤,并促进E1酶自身的降解。[1]
这一变构抑制机制的发现为靶向类泛素修饰提供了一种新方法,是对现有ATP竞争性抑制剂的补充。[1]
COH000在临床前模型中通过抑制SUMO化发挥抗癌活性,导致抑癌miR-34b上调、致癌c-Myc下调以及细胞凋亡诱导。这表明其具有治疗c-Myc和KRas驱动型癌症的潜力。[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C25H25NO5
分子量
419.469707250595
精确质量
419.17
元素分析
C, 71.58; H, 6.01; N, 3.34; O, 19.07
CAS号
1534358-79-6
PubChem CID
60156415
外观&性状
Light yellow to yellow solid powder
LogP
4
tPSA
73.9
氢键供体(HBD)数目
1
氢键受体(HBA)数目
6
可旋转键数目(RBC)
9
重原子数目
31
分子复杂度/Complexity
745
定义原子立体中心数目
3
SMILES
CC1=CC=C(C=C1)C[C@H]([C@]23C=C[C@H](O2)C(=C3C(=O)OC)C(=O)OC)NC4=CC=CC=C4
InChi Key
UFPINDDCTUCUSA-ABGUIGEDSA-N
InChi Code
InChI=1S/C25H25NO5/c1-16-9-11-17(12-10-16)15-20(26-18-7-5-4-6-8-18)25-14-13-19(31-25)21(23(27)29-2)22(25)24(28)30-3/h4-14,19-20,26H,15H2,1-3H3/t19?,20-,25?/m1/s1
化学名
dimethyl 1-((R)-1-(phenylamino)-2-(p-tolyl)ethyl)-7-oxabicyclo [2.2.1]hepta-2,5-diene-2,3-dicarboxylate
别名
COH000; COH-000; COH 000;
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : 35.71~50 mg/mL ( 85.13~119.19 mM )
Ethanol : ~1 mg/mL
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
View More

注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
View More

口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.3840 mL 11.9198 mL 23.8396 mL
5 mM 0.4768 mL 2.3840 mL 4.7679 mL
10 mM 0.2384 mL 1.1920 mL 2.3840 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
+
+
+

计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片
  • COH000 Is an Allosteric Covalent Inhibitor of the SUMO E1[1].Cell Chem Biol. 2018 Dec 5. pii: S2451-9456(18)30386-6.
  • COH000 Inhibits SUMOylation in Cells[1].Cell Chem Biol. 2018 Dec 5. pii: S2451-9456(18)30386-6.
  • COH000 Enhances SAE2 Degradation in Cells[1].Cell Chem Biol. 2018 Dec 5. pii: S2451-9456(18)30386-6.
相关产品
联系我们