Topoisomerase I ( IC50 = 0.31 μM ); Camptothecins

Dxd（ADC 的 Exatecan 衍生物）是一种有效的 DNA 拓扑异构酶 I 抑制剂，用作与 HER2 靶向 ADC (DS-8201a) 的缀合药物，IC50 为 0.31 μM。 Dxd 的 IC50 范围为 1.43 nM 至 4.07 nM，对 KPL-4、NCI-N87、SK-BR-3 和 MDA-MB-468 人类癌细胞系具有细胞毒性；然而，对照 IgG-ADC（其中 Dxd 为有效负载）对四种细胞系（表达 HER2）没有表现出抑制作用。 DS-8201a（有效负载为 Dxd）的 IC50 值分别为 26.8、25.4 和 6.7 ng/mL，对 HER2 阳性 KPL-4、NCI-N87 和 SK-BR-3 细胞系表现出显着抑制作用，但 MDA-MB-468 没有观察到这种抑制作用（IC50，>10,000 ng/mL）[1]。

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DS-8201a的结构如图1A所示。DS-8201a是一种靶向HER2的ADC，由抗HER2抗体和拓扑异构酶I抑制剂DX-8951的衍生物（DXd）组成，它们通过马来酰亚胺-甘油基-苯丙氨酸-甘油基（GGFG）肽接头结合在一起。在用还原剂三（2-羧乙基）膦盐酸盐（TCEP HCl）还原链间二硫键后，接头有效载荷通过半胱氨酸残基与抗体偶联。由于四肽被溶酶体酶（如组织蛋白酶B和L）分解，这些酶在肿瘤细胞中高度表达（30-34），因此推测DS-8201a被溶酶体酶切割并释放出DXd，在与HER2受体结合并内化于肿瘤细胞后，它会特异性地攻击肿瘤细胞中的靶分子。通过使用RPC，DS-8201a的DAR被确定为约8，这是传统链间半胱氨酸偶联的理论最大载药量。因此，在HIC图中观察到均匀的药物分布（图1B）。我们证实，通过拓扑异构酶I介导的DNA松弛试验（图1C）测量，DXd在拓扑异酶I的抑制活性方面比SN-38和DX-8951f更有效。

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DS-8201a对癌症细胞生长的抑制作用[1]
将DS-8201a对癌症细胞生长的抑制活性与体外结合DXd的抗HER2 Ab和对照IgG–ADC对各种人类癌症细胞系的抑制活性进行比较。首先通过流式细胞术分析评估细胞系KPL-4、NCI-N87、SK-BR-3和MDA-MB-468细胞表面HER2的表达（图2A）。KPL-4、NCI-N87和SK-BR-3的相对MFI分别为95.7、101.6和56.2，表明HER2在细胞表面上明确表达，而MDA-MB-468的相对MFI为1.0，表明MDA-MB-465中没有表达。DS-8201a对HER2阳性KPL-4、NCI-N87和SK-BR-3具有显著的细胞生长抑制活性，IC50值分别为26.8、25.4和6.7 ng/mL，而对MDA-MB-468没有这种抑制作用，IC50值>10000 ng/mL（图2B）。尽管抗HER2抗体对NCI-N87和SK-BR-3显示出细胞生长抑制活性，但这些活性比DS-8201a弱得多；NCI-N87和SK-BR-3的IC50值分别为204.2和65.9 ng/mL（图2B）。此外，对照IgG ADC在四种细胞系中的任何一种都没有显示出细胞生长抑制活性（图2B），尽管所有四种细胞株都对有效载荷敏感，DXd（IC50:1.43 nmol/L-4.07 nmol/L）。这些结果表明，药物与抗HER2抗体结合显著增强了DS-8201a的细胞生长抑制活性，并且DS-8201a对HER2阳性细胞系表现出靶向特异性生长抑制作用。

DS-8201a（Dxd 为有效负载，10 mg/kg，静脉注射）在具有 HER2 IHC 1+/FISH 阴性表达的 HER2 低表达 ST565 和 ST313 模型以及具有 KPL4 的 HER2 阳性模型中表现出有效的抗肿瘤活性、JIMT-1 和 Capan-1[1]。

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体内抗肿瘤活性[1]
在HER2阳性NCI-N87异种移植物模型中评估DS-8201a的体内抗肿瘤活性。DS-8201a以剂量依赖的方式诱导肿瘤生长抑制，单次剂量超过1mg/kg时肿瘤消退，而不会诱导小鼠的一般状况或体重变化出现任何异常（图2C）。在同一模型中，4 mg/kg的抗HER2抗体给药部分抑制了肿瘤生长，表明在第21天与对照组相比，肿瘤生长抑制率（TGI）为31%（图2D）。另一方面，DS-8201a明显显示出更有效的抗肿瘤疗效，表明在相同的4 mg/kg剂量下，TGI为99%，因此在体内和体外模型中都观察到药物偶联的疗效增强（图2D）。此外，DS-8201a的体内疗效取决于其HER2结合，因为对照IgG-ADC没有抑制肿瘤生长（图2D）。

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DS-8201a在低HER2表达肿瘤中的抗肿瘤活性[1]
T-DM1已被批准用于HER2阳性转移性癌症患者，根据当前指南（45），其定义为HER2 IHC 3+或IHC 2+/FISH阳性，并且在FISH阴性、HER2 1+和2+人群中，HER2靶向治疗的临床需求仍有待满足。因此，在具有不同HER2表达水平的各种小鼠异种移植物模型中评估了DS-8201a的抗肿瘤活性；KPL-4（强阳性）、JIMT-1（中度阳性）、Capan-1（弱阳性）和GCIY（阴性）（图4A和B）。还评估了具有与DS-8201a相同的药物接头和约一半DAR（DAR 3.4）的抗-HER2 ADC，以研究DAR对抗肿瘤活性的影响。虽然T-DM1仅对KPL4模型有效，但DS-8201a对所有具有KPL4、JIMT-1和Capan-1的HER2阳性模型有效。两种ADC在GCIY模型中均无效。抗HER2 ADC（DAR 3.4）抑制了所有HER2阳性模型的肿瘤生长，其疗效是HER2表达依赖性的。在HER2弱阳性Capan-1模型中，DS-8201a的疗效明显强于抗HER2 ADC（DAR 3.4）。这些结果表明，高DAR ADC DS-8201a能够将足够的有效载荷量递送到癌症细胞中，表明即使在低HER2水平下也具有细胞毒性。在HER2强阳性模型的情况下，即使是低DAR ADC也能够为细胞死亡提供足够的有效载荷。DS-8201a对HER2水平较高的肿瘤有效，因为其DAR约为8。为了在HER2低表达模型中确认DS-8201a的HER2特异性，在HER2高CFPAC-1模型中进行了竞争性抑制研究（图4C）。DS-8201a的疗效被抗HER2抗体的先前治疗所抵消，对照IgG ADC在比DS-8201a高3倍的剂量下没有抑制肿瘤生长。从这些结果中，证实了DS-8201a在HER2低表达模型中的HER2特异性。

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与PDX模型中的T-DM1的比较[1]
除了基于细胞系的异种移植物模型外，还进行了几次PDX评估，以更精确地评估临床效益。在癌症PDX模型中，NIBIO G016，DS-8201a表现出强大的抗肿瘤活性，并伴有肿瘤消退，但T-DM1没有（图5A）。由于该模型中的HER2状态为IHC 3+/FISH+，因此假设DS-8201a和T-DM1之间抗肿瘤疗效的差异是基于有效载荷的不同敏感性，这是由于每种有效载荷的作用机制不同。在癌症PDX模型中，尽管DS-8201a和T-DM1在HER2 IHC 2+/FISH阳性ST225模型中均有效，但在第21天，用DS-8201a治疗的5只小鼠中有3只观察到肿瘤完全消退，而不是T-DM1（图5B）。此外，DS-8201a在HER2 IHC 1+/FISH阴性表达的HER2低表达ST565和ST313模型中显示出抗肿瘤活性（图5C和D），但T-DM1没有。这一结果表明了与基于细胞系的异种移植物模型（如Capan-1和CFPAC-1）类似的趋势（图4B和C）。因此，在具有几种HER2表达水平的所有4种模型中，DS-8201a显示出比T-DM1更有效的抗肿瘤活性。这些结果表明，DS-8201a与T-DM1具有可区分的潜力，T-DM1在T-DM1不敏感和HER2低表达的肿瘤中显示出有效性，这是由于结合药物的不同作用机制和DS-8201a的高DAR造成的。

拓扑异构酶I抑制试验[1]
SN-38、DX-8951f和DX-8951衍生物（DXd）是在内部合成的。根据之前的报告，SN-38、DX-8951f和DXd对人拓扑异构酶I的抑制活性是通过拓扑异酶I介导的DNA松弛试验进行评估的。简而言之，重组人拓扑异构酶I与每种药物一起孵育5分钟。然后，加入超螺旋DNA pBR322，在25°C下孵育60分钟。在琼脂糖凝胶上电泳混合物后，用CCD成像仪测量超螺旋DNA的量。

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DS-8201a在血浆中的体外稳定性[1]
在小鼠、大鼠、猴子和人血浆中评估了DS-8201a在37°C下以10μg/mL的浓度在21天内释放DXd的速率。

96 孔板每孔接种 1,000 个细胞。孵育一晚后添加 Dxd。六天后，使用 CellTiter-Glo 发光细胞活力测定法评估细胞活力。为了鉴定每个细胞系中的 HER2 表达，将 FITC 小鼠 IgG1、κ 同型对照或抗 HER2/neu FITC 在冰上孵育 30 分钟。洗涤后，使用 FACSCalibur 分析标记的细胞。完成相对平均荧光强度（rMFI）的计算[1]。

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细胞毒性试验[1]
将细胞以每孔1000个细胞的速度接种到96孔板上。孵育过夜后，加入每种稀释物质。根据制造商的说明，在6天后使用CellTiter Glo发光细胞存活率测定法评估细胞存活率。为了检测每个细胞系中的HER2表达，将细胞与FITC小鼠IgG1、κ同种型对照或抗HER2/neu FITC在冰上孵育30分钟，用FACSCalibur分析标记的细胞。相对平均荧光强度（rMFI）通过以下方程式计算：

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ELISA[1]
对于结合试验，免疫板在包被缓冲液中用2.5μg/mL His标记的HER2-ECD蛋白包被，并在4°C下保持过夜。洗涤后，将板封闭，并将每种连续稀释的物质加入孔中。在37°C下孵育1.5小时后，清洗平板，并在37°C下用HRP偶联的抗人IgG二抗孵育1小时。洗涤后，加入TMB溶液，用微孔板读数器测量每个孔中的A450。为了检测磷酸化Akt（pAkt），将SK-BR-3细胞在96孔板中预孵育4天，然后与每种物质孵育24小时。孵育后，根据制造商的说明，裂解细胞，并使用PathScan Phospho-Akt1（Ser473）夹心ELISA试剂盒和PathScan total-Akt1夹心ELISA试剂袋检测细胞间pAkt和总Akt。通过将处理过的归一化pAkt值除以未处理的归一化pAk值来计算每个样品孔的相对pAkt。

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ADCC评估[1]
使用来源于供体的人外周血单核细胞（PBMC）作为效应细胞，SK-BR-3细胞作为靶细胞，评估抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC）活性。效应细胞（2×105个细胞）和51Cr标记的靶细胞（1×104个细胞）与每种物质一起孵育，指示效应：靶（E:T）比为20:1。孵育4小时后，通过培养上清液中的放射性测量ADCC活性。

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免疫印迹[1]
用每种物质处理KPL-4细胞。24、48或72小时后，收获细胞并用含有Halt蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物的M-PER裂解缓冲液裂解。 通过SDS-PAGE对样品进行装载和分离，并将其印迹到聚偏二氟乙烯膜上。将膜封闭，并用抗磷酸化Chk1（Ser345；133D3）兔单克隆抗体、抗Chk1（2G1D5）小鼠单克隆抗体、反切割PARP（Asp214）抗体、抗β-肌动蛋白（8H10D10）小鼠mAb、抗磷酸化组蛋白H2A探测过夜。X（Ser139）抗体和抗组蛋白H2A。4°C下的X抗体。然后，用SNAP皮内洗涤膜并用荧光标记的二抗孵育10分钟。使用Odyssey成像系统检测荧光信号。

小鼠：简而言之，将每种细胞悬液或肿瘤碎片皮下注射到特定病原体清除（SPF）雌性裸鼠体内。从第0天开始给药，待肿瘤生长至合适大小后，根据肿瘤体积将荷瘤小鼠随机分为治疗组和对照组。小鼠接受DS-8201a静脉注射（1或10 mg/kg，iv；Dxd为有效载荷）。计算肿瘤生长抑制率（TGI，%）[1]。

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细胞系和患者来源的异种移植研究[1]
详细的研究步骤见补充材料。简而言之，将每种细胞悬液或肿瘤碎片皮下接种到特定病原体清除（SPF）雌性裸鼠体内。待肿瘤生长至合适大小后，根据肿瘤体积将荷瘤小鼠随机分为治疗组和对照组，并从第0天开始给药。每种物质均通过静脉注射给药。肿瘤生长抑制率（TGI，%）根据以下公式计算：

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DS-8201a 在食蟹猴体内的药代动力学[1]
采用经验证的配体结合试验测定血浆中 DS-8201a 和总抗体的浓度；定量下限为 0.100 μg/mL。采用经验证的液相色谱-串联质谱 (LC/MS-MS) 方法测定血浆中 DXd 的浓度；定量下限为 0.100 ng/mL。将 DS-8201a 以 3.0 mg/kg 的剂量静脉注射给雄性食蟹猴。给药后 672 小时内测量血浆中 DS-8201a、总抗体和 DXd 的浓度。

食蟹猴体内的药代动力学[1]
单次静脉注射DS-8201a后，血浆中DS-8201a浓度呈指数下降。DS-8201a和总抗体的稳态分布容积（Vss）接近血浆容积（数据未显示）。DS-8201a和总抗体的药代动力学特征未见明显差异，表明DS-8201a的肽连接子即使在DAR 8时在血浆中也保持稳定（图2E）。仅在有限的时间点检测到低水平的DXd（图2E）。

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体外血浆稳定性[1]
在小鼠、大鼠、猴和人血浆中，DS-8201a 释放 DXd 的速率在第 21 天为 1.2% 至 3.9%（图 2F），与其他抗体偶联药物（ADC）如 T-DM1、SGN-35（Brentuximab vedotin）和inotuzumab ozogamicin 的释放速率相当或更低（35–37）。这些结果表明 DS-8201a 在血浆中稳定。

DS-8201a 的安全性概况 [1]
在食蟹猴（DS-8201a 的交叉反应物种）和大鼠（抗原非结合物种；表 1）中进行了重复静脉给药（每 3 周一次，共 3 次）研究。在大鼠研究中，剂量高达 197 mg/kg（最大剂量）时，未发现死亡或危及生命的毒性。因此，动物严重毒性剂量 10% (STD10) 被认为 >197 mg/kg。在猴子研究中，一只雌性猴子在最高剂量 78.8 mg/kg 下于第 26 天因濒死而被实施安乐死。濒死的原因似乎是该动物状况恶化，包括体重和食物摄入量下降，以及骨髓毒性和肠道毒性。补充表S1显示了存活猴子肠道、骨髓和肺脏的显微镜检查结果。胃肠道毒性和骨髓毒性是拓扑异构酶I抑制剂临床应用中典型的剂量限制因素。DS-8201a对肠道的影响非常轻微，在剂量高达78.8 mg/kg时，所有动物均未出现明显的严重变化。骨髓毒性仅在78.8 mg/kg剂量下出现，并伴有网织红细胞比率下降。在10 mg/kg和30 mg/kg剂量下，猴子的白细胞和红细胞计数均未见异常。重复给予DS-8201a，在78.8 mg/kg剂量下，猴子出现中度肺毒性；在≥30 mg/kg剂量下，经过6周恢复期后，肺毒性表现为轻微或极轻微。根据上述研究结果的死亡率和严重程度，猴子的最高非严重毒性剂量（HNSTD）被认为是30 mg/kg。在与临床方案相对应的重复给药后，大鼠对DS-8201a的耐受性良好，剂量高达197 mg/kg；猴子对DS-8201a的耐受性良好，剂量高达30 mg/kg。其非临床安全性数据符合人体试验的要求。

[1]. DS-8201a, A Novel HER2-Targeting ADC with a Novel DNA Topoisomerase I Inhibitor, Demonstrates a Promising Antitumor Efficacy with Differentiation from T-DM1. Clin Cancer Res. 2016 Oct 15;22(20):5097-5108.

目的：本研究开发了一种新型抗肿瘤候选药物——抗HER2抗体药物偶联物DS-8201a，该偶联物包含一种新型拓扑异构酶I抑制剂，并对其临床前药理学特性进行了评估。[1]
实验设计：本研究在多种HER2阳性细胞系和患者来源的异种移植（PDX）模型中，评估了DS-8201a的体外和体内药理活性，并与T-DM1进行了比较。同时，还评估了其作用机制。此外，还评估了DS-8201a在食蟹猴体内的药代动力学以及在大鼠和食蟹猴体内的安全性。[1]
结果：DS-8201a表现出HER2表达依赖性的细胞生长抑制活性，并且在HER2阳性胃癌NCI-N87模型中，单次给药剂量超过1 mg/kg即可诱导肿瘤消退。 DS-8201a 与 HER2 的结合活性和 ADCC 活性与未偶联的抗 HER2 抗体相当。DS-8201a 还显示出对 Akt 磷酸化的抑制活性。DS-8201a 可诱导 Chk1 和组蛋白 H2A.X（DNA 损伤标志物）的磷酸化。DS-8201a 的药代动力学和安全性良好，在食蟹猴中，最高非严重毒性剂量为 30 mg/kg，表明 DS-8201a 在人体中具有良好的耐受性。DS-8201a 在 HER2 高表达且对 T-DM1 不敏感的 PDX 模型中有效。DS-8201a（而非 T-DM1）对多种 HER2 低表达的乳腺癌 PDX 模型显示出抗肿瘤疗效。 [1]
结论：DS-8201a 在多种 HER2 阳性模型中均表现出强效的抗肿瘤活性，且具有良好的药代动力学和安全性。结果表明，DS-8201a 有望成为一种有价值的治疗药物，对 T-DM1 不敏感的 HER2 阳性癌症和 HER2 低表达癌症具有巨大的治疗潜力。Clin Cancer Res; 22(20); 5097-108. ©2016 AACR.

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目前市售和临床开发中的大多数抗体偶联药物 (ADC) 都含有微管蛋白聚合抑制剂，例如 T-DM1 和 SGN-35（Brentuximab vedotin；参考文献 13）。我们合成了一种新型 ADC，该 ADC 含有拓扑异构酶 I 抑制剂，其作用机制与微管蛋白聚合抑制剂不同，并采用了一种新型的自裂解连接系统，该系统使用氨基亚甲基 (AM) 基团。尽管其他应用于SGN-35（Brentuximab vedotin）和多种抗体药物偶联物（ADC）的可裂解连接子系统能够释放含氨基的有效载荷，但这种AM自裂解连接子系统能够从DS-8201a中释放含羟基的DXd。此外，这种新型连接子-有效载荷系统能够降低ADC的疏水性，并有助于提高其药物抗体比（DAR）。T-DM1采用赖氨酸偶联和不可裂解系统，与DS-8201a的系统截然不同。DS-8201a在体外和体内均显示出强大的HER2特异性疗效，并且通过药物偶联，其曲妥珠单抗的功能效应与T-DM1相当。此外，DS-8201a在大鼠和食蟹猴中的安全性研究表明其具有良好的耐受性。[1]

C26H24FN3O6

493.48367023468

493.16

C, 63.28; H, 4.90; F, 3.85; N, 8.52; O, 19.45

1599440-33-1

Exatecan;171335-80-1;Exatecan mesylate;169869-90-3;Dxd-d5;Exatecan mesylate dihydrate;197720-53-9

117888634

Off-white to light yellow solid powder

0

129

3

8

3

36

1080

2

CC[C@@]1(C2=C(COC1=O)C(=O)N3CC4=C5[C@H](CCC6=C5C(=CC(=C6C)F)N=C4C3=C2)NC(=O)CO)O

PLXLYXLUCNZSAA-QLXKLKPCSA-N

InChI=1S/C26H24FN3O6/c1-3-26(35)15-6-19-23-13(8-30(19)24(33)14(15)10-36-25(26)34)22-17(28-20(32)9-31)5-4-12-11(2)16(27)7-18(29-23)21(12)22/h6-7,17,31,35H,3-5,8-10H2,1-2H3,(H,28,32)/t17-,26-/m0/s1

N-[(10S,23S)-10-ethyl-18-fluoro-10-hydroxy-19-methyl-5,9-dioxo-8-oxa-4,15-diazahexacyclo[14.7.1.02,14.04,13.06,11.020,24]tetracosa-1,6(11),12,14,16,18,20(24)-heptaen-23-yl]-2-hydroxyacetamide

DX-8951 derivative; DX-8951; DX8951; 1599440-33-1; Dxd; N-[(10S,23S)-10-ethyl-18-fluoro-10-hydroxy-19-methyl-5,9-dioxo-8-oxa-4,15-diazahexacyclo[14.7.1.02,14.04,13.06,11.020,24]tetracosa-1,6(11),12,14,16,18,20(24)-heptaen-23-yl]-2-hydroxyacetamide; OQM5SD32BQ; N-((1S,9S)-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-4-methyl-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahydro-1H,12H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-1-yl)-2-hydroxyacetamide; N-((1S,9S)-9-Ethyl-5-fluoro-2,3,9,10,13,15-hexahydro-9-hydroxy-4-methyl-10,13-dioxo-1H,12H-benzo(de)pyrano(3',4':6,7)indolizino(1,2-b)quinolin-1-yl)-2-hydroxyacetamide; Acetamide, N-((1S,9S)-9-ethyl-5-fluoro-2,3,9,10,13,15-hexahydro-9-hydroxy-4-methyl-10,13-dioxo-1H,12H-benzo(de)pyrano(3',4':6,7)indolizino(1,2-b)quinolin-1-yl)-2-hydroxy-; Acetamide, N-[(1S,9S)-9-ethyl-5-fluoro-2,3,9,10,13,15-hexahydro-9-hydroxy-4-methyl-10,13-dioxo-1H,12H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-1-yl]-2-hydroxy-; Exatecan derivative; Trastuzumab Deruxtecan (DS-8201a).

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 8~40 mg/mL (16.2~81.1 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。