Synthetic mineralocorticoid; Mineralocorticoid Receptor (MR) (EC50 = 0.8 nM for zebrafish MR-mediated transcriptional activity) [1]

- 斑马鱼细胞中的转录激活：醋酸氟氢可的松（FLU）在斑马鱼胚胎成纤维细胞（ZF4细胞）中诱导MR依赖性荧光素酶报告基因活性，EC50为0.8 nM。MR拮抗剂螺内酯可阻断该活性，证实其MR特异性[1]
- 基因表达调控：在ZF4细胞中，FLU（10 nM）通过qPCR检测显示，斑马鱼糖皮质激素应答基因gilz（糖皮质激素诱导亮氨酸拉链）的表达上调4.2倍[1]
- 制剂稳定性：醋酸氟氢可的松胶囊和滴定粉末在25°C/60%相对湿度下储存6个月，保留>95%的效价，HPLC未检测到显著降解产物[3]

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醋酸氟屈可的松是一种用于治疗肾上腺功能不全的药物，可以以商业上无法获得的剂量开给住院或门诊的儿科患者。对于这些患者，目前10µg氟屈可的松胶囊是由预先配制的滴定粉末（研磨粉）配制而成的。进行了氟屈可的松稳定性研究，以确保有效期超过使用日期。首先，验证了一种稳定性指示醋酸氟屈可的松给药方法。然后制成10µg醋酸氟氢可的松胶囊和1%醋酸氟氢可的松滴定粉末（粉末研制物）。最后，进行了稳定性研究。醋酸氟屈可的松滴定粉末（粉末研制物）在受控环境温度下避光稳定一年，而10µg醋酸氟屈可的松胶囊稳定六个月。一年后，即使氟屈可的松含量保持一致，也注意到产品降解的增加。我们的工作使我们能够确定醋酸氟屈可的松滴定粉（研磨粉）与三种最常用的胶囊配制赋形剂的使用日期后六个月。我们还证实了胶囊的六个月理论稳定性[3]。

- 斑马鱼发育影响：斑马鱼胚胎从受精后4小时（hpf）至120 hpf暴露于FLU（0.1–100 nM），产生剂量依赖性效应，包括： - 心率增加（10 nM时增加15–20%） - 体长缩短（100 nM时缩短5–10%） - 下丘脑-垂体-肾上腺（HPI）轴中应激应答基因（crh、pomc）表达改变[1]
- 在地理萎缩患者中的安全性：在1B期试验中，12名患者口服FLU（0.1 mg/天，持续28天）耐受性良好。未报告严重不良事件，平均血压保持稳定（收缩压：基线125±8 mmHg vs. 第28天127±7 mmHg）[2]
合成皮质类固醇可能对鱼类构成环境风险。在这里，我们描述了成年斑马鱼（8个月大）在暴露于浓度在0.006至42μg/L之间的常用皮质类固醇醋酸氟氢可的松（FLU）21天后的多终点反应。没有观察到显著的生殖影响，而生理效应，包括血浆葡萄糖水平和血白细胞数量，即使在42 ng/L的浓度下也发生了显著变化。卵巢参数和下丘脑-垂体-性腺-肝轴的转录分析显示，影响可以忽略不计。在斑马鱼的大脑中观察到昼夜节律网络的显著变化。包括per1a和nr1d1在内的几个生物标志物基因的转录物显示出强烈的转录变化，这些变化发生在6和42 ng/L FLU的环境相关浓度下。重要的是，F1胚胎的发育和行为发生了显著变化。即使在6和42 ng/L的浓度下，F1胚胎的心跳、孵化成功率和游泳行为都有所增加。所有这些影响都通过暴露于刺五加胚胎得到了进一步证实。在刺五加胚胎中，参与糖异生、免疫反应和昼夜节律的生物标志物基因的显著转录变化证实了成年鱼的观察结果。孵化成功率、心跳和游泳活动在81 ng/L及以上时增加，与F1胚胎一样。这些结果为理解皮质类固醇的潜在环境风险提供了新的见解[1]。

- MR转录激活实验：转染斑马鱼MR表达质粒和受糖皮质激素应答元件（GRE）调控的荧光素酶报告基因的ZF4细胞，经FLU（0.01–100 nM）处理24小时后，检测荧光素酶活性，从剂量-反应曲线计算EC50[1]

- ZF4细胞基因表达分析：ZF4细胞经FLU（0.1–100 nM）处理6小时后，提取总RNA并逆转录，通过qPCR定量gilz mRNA水平，表达量以管家基因β-actin归一化[1]
- 细胞活力实验：ZF4细胞暴露于FLU（0.1–1000 nM）72小时，MTT法检测显示所有浓度下细胞存活率>90%[1]

成年斑马鱼暴露实验[1]
\n从300升养殖缸中选取8月龄成年斑马鱼，随机放入盛有充分曝气的10升不锈钢水箱中。水温由自动水浴加热装置控制，并在整个实验过程中保持在27 ± 1 °C。实验设置包括溶剂对照组（0.01% DMSO）和浓度递增的氟氢可的松醋酸酯（FLU）组，浓度分别为0.01、0.1、1、10和100 μg/L。每个处理组设置三个重复，每个重复包含5对雌鱼和5对雄鱼作为繁殖对。由于流通系统的实际限制，采用0.01% DMSO作为溶剂对照组；如前所述，在此浓度下，DMSO对成年斑马鱼和胚胎发育在不同类固醇激素刺激下的影响可以忽略不计。选择低浓度的氟氢可的松醋酸酯 (FLU)是为了反映环境中的实际剂量，而选择高浓度则是为了达到药理学上的相关性，这是基于已报道的地塞米松、泼尼松龙和二丙酸倍氯米松的生殖和生理效应而确定的。\n

\n本实验根据经合组织测试指南 (TG) 229/230 进行，并略作修改。详细步骤已在之前的研究中描述。简而言之，经过五天的适应期后，实验开始前进行为期 14 天的预暴露期，以确定每个水箱（和产卵组）的基线繁殖率，随后进行 2 天的平衡期，之后开始化学给药，最后按照经合组织测试指南的建议进行 21 天的氟氢可的松醋酸酯 (FLU)暴露。整个实验采用流通式系统，确保每12小时完全更换一次重构水。实验持续监测水温（27 ± 1 °C）、pH值（6.7–7.2）、溶解氧浓度（>70%）、硝酸盐（通常≤10 mg/L）和亚硝酸盐（通常为0 mg/L），以确保水质。光周期为14小时光照/10小时黑暗。在整个暴露期间，按照OECD TG的建议记录鱼类的死亡率和外观异常情况。未观察到与化合物相关的任何不良反应。每天投喂两次TetraMin薄片饲料以及冷冻丰年虾（A. salina）、白蚊幼虫和大型蚤（Daphnia magna）的混合物。在整个实验期间收集并计数鱼卵。\n

\n在暴露的最后5天，每天上午9点左右（ZT2）收集鱼卵，转移到盛有充分曝气的复原鱼水的培养皿中，并在体视显微镜（蔡司，DV4）下检查以确定受精成功率。从每个水箱中随机选取约50-100个受精卵，转移到盛有适量复原鱼水的新培养皿中。然后将培养皿放入鱼卵孵化器（荷兰Flohr Instruments公司），保持恒温（27℃）、湿度（50%）和光周期（14:10小时光照/黑暗）。每24小时移除死卵并完全更换培养皿中的水。为了确定F1代的跨代效应，我们测量了胚胎在24小时时的收缩率、36小时时的心跳、24、48、72、96和120小时时的孵化成功率以及120小时时的游泳行为。\n

\n暴露结束后，用KoiMed Sleep（1.5–3 mL/L水）麻醉鱼。解剖前，从每个重复组中随机选取3条雌鱼和3条雄鱼（每个处理组的雌雄各9条），测量其湿重（mg）和体长（cm），用于计算肥满度。然后立即解剖每个重复组中的2条雌鱼和2条雄鱼。将两条鱼的脑（包括垂体在内的全脑）、肝脏和性腺混合，转移至RNAlater中，并储存在−80 °C下，用于后续的RNA提取。由于组织体积小且提取效率不一，因此需要混合组织。在混合样本前，对每条鱼的卵巢进行称重，以评估性腺指数（GSI = 性腺重量 (g)/体重 (g) × 100）。此外，通过尾部切除术从每个重复组的两条雌鱼和两条雄鱼（均已麻醉）中采集血液样本。血浆葡萄糖水平和不同类型白细胞的数量测定方法如下所述。由于采集的血液量有限，未分析血浆卵黄蛋白原。由于性腺组织病理学检查对性腺重量、GSI 和下丘脑-垂体-性腺轴基因表达的影响可忽略不计，因此未进行性腺组织病理学检查。考虑到采样持续时间是导致转录反应出现人为误差的关键因素，因为内源性基因昼夜节律振荡会影响采样时间，因此一个由九名合作者组成的团队将采样时间限制在 2 小时内。鱼类样本的处理顺序为：对照组、低浓度组至高浓度组。\n

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\n\n胚胎暴露[1]
\n采用先前描述的几种孕激素暴露方法，单独进行胚胎暴露实验。简而言之，受精后2-3小时（hpf），将每个重复组（每个处理组4个重复）的100个囊胚期胚胎随机放入装有100 mL重构鱼水的150 mL带盖玻璃烧杯中，温度保持在27 ± 1 °C。实验包括四个氟氢可的松醋酸酯（FLU）剂量组，标称浓度分别为0.1、1、10和100 μg/L，以及一个溶剂对照组。采用24小时半静态处理。每24小时评估致死和亚致死效应，并移除死亡胚胎。每天用含有适当浓度氟氢可的松醋酸酯 (FLU) 的全新鱼缸水完全更换水体。分别在胚胎和幼体胚胎中测量收缩率、心跳、孵化率和游泳行为，方法与成年鱼暴露组 F1 代胚胎的测量方法相同。在受精后 120 小时 (hpf)，将 15 个幼体胚胎混合，并保存在 RNAlater 中，以备后续分子分析。\n

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\n\n- 斑马鱼胚胎暴露：将野生型斑马鱼胚胎在胚胎培养基中暴露于不同浓度的 FLU (0.1–100 nM)，从受精后 4 小时 (hpf) 到 120 小时 (hpf)。每日监测发育终点（心率、体长、孵化率）。在受精后120小时（hpf），收集胚胎进行qPCR基因表达分析[1]
\n- 人体1B期临床试验：患有地图状萎缩的患者接受口服氟达拉非（0.1 mg/天）治疗28天。安全性评估包括体格检查、生命体征、临床化学检查和不良事件监测。在基线和第28天进行眼科检查（视力、眼底照相）[2]
\n

斑马鱼毒性：100 nM 的氟达拉滨 (FLU) 导致斑马鱼胚胎在受精后 120 小时死亡率增加 15%，孵化率降低 20%（与对照组相比）[1]
- 人体安全性：在 1B 期试验中，氟达拉滨 (0.1 mg/天) 未引起血清电解质的临床显著变化（钠：基线 140±2 mmol/L，第 28 天 141±2 mmol/L；钾：4.2±0.3 mmol/L，第 28 天 4.1±0.2 mmol/L）。未观察到体液潴留或高血压的迹象[2]

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225609 大鼠口服 LD50 >1 gm/kg 药品研究。医疗用品研究。, 18(666), 1987
225609 小鼠腹膜内 LD50 240 mg/kg Iyakuhin Kenkyu。医疗用品研究，18（666），1987

[1]. Corticosteroid Fludrocortisone Acetate Targets Multiple End Points in Zebrafish (Danio rerio) at Low Concentrations. Environ Sci Technol. 2016 Sep 20;50(18):10245-54.
[2]]. Phase 1B study of the safety and tolerability of the mineralocorticoid fludrocortisone acetate in patients with geographical atrophy. BMJ Open Ophthalmol. 2022 Jul 1;7(1):e001032.
[3]. Stability Studies of Fludrocortisone Acetate Capsules and Fludrocortisone Acetate Titrated Powders (Powder Triturates). Int J Pharm Compd. 2022 Mar-Apr;26(2):150-154.

氟氢可的松醋酸酯是氟氢可的松伯羟基与乙酸缩合的产物。它是一种合成皮质类固醇，其糖皮质激素活性约为氢化可的松的10倍，而其盐皮质激素活性则超过氢化可的松的100倍。它用于部分替代治疗艾迪生病引起的原发性和继发性肾上腺皮质功能不全，以及治疗失盐性肾上腺增生症。它是一种11β-羟基类固醇、3-氧代-Δ⁴类固醇、17α-羟基类固醇、醋酸酯、盐皮质激素、20-氧代类固醇、氟化类固醇和叔α-羟基酮。它在功能上与氟氢可的松相关。
醋酸氟氢可的松是一种合成的氟化皮质类固醇的醋酸盐，具有抗炎和抗过敏活性。作为糖皮质激素受体激动剂，氟氢可的松与细胞质受体结合，转位至细胞核，随后启动糖皮质激素反应基因（如脂皮质素）的转录，从而抑制磷脂酶A2 (PLA2)。PLA2活性的抑制可阻止花生四烯酸的释放，花生四烯酸是前列腺素和白三烯等二十碳酸类物质的前体；二十碳酸类物质是促炎反应机制中的重要介质。作为一种盐皮质激素受体激动剂，该药物可刺激肾脏远曲小管和集合管对钠离子（Na+）的重吸收和水分潴留，以及钾离子（K+）和氢离子（H+）的分泌。
另见：氟氢可的松（具有活性成分）。

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目的：评估单次玻璃体内注射1 mg/0.1 mL和2 mg/0.1 mL醋酸氟氢可的松（FCA）治疗继发于年龄相关性黄斑变性的地图状萎缩（GA）患者的安全性和耐受性。方法和分析：这项1b期研究是一项分为两部分的剂量递增前瞻性研究。第一部分纳入一名受试者，接受1 mg/0.1 mL的治疗，并监测长达28天，之后由安全性审查委员会进行评估。随后，两名受试者接受了相同剂量的治疗。第二部分研究纳入一名受试者，给予 2 mg/0.1 mL 剂量，并监测至 28 天。随后，又有五名受试者接受了相同剂量的 FCA。所有受试者在基线后均接受了 6 个月的随访。每次访视均进行全面的眼科评估，包括地图状萎缩面积 (GA)、最佳矫正视力 (BCVA)、低照度最佳矫正视力 (LL-BCVA) 和眼压 (IOP)。从首次给予 FCA 至研究结束访视期间，均记录不良事件 (AE)。结果显示，在九名受试者中，无论采用 1 mg/0.1 mL 还是 2 mg/0.1 mL 剂量进行玻璃体内注射 FCA，均未观察到严重不良事件（眼部或全身）。未发现眼压升高或白内障发生的证据。在随访期间，研究眼的 BCVA 和 LL-BCVA 均未发生显著变化（p 值分别为 0.28 和 0.38）。研究期间，平均GA面积在6个月内增加（0.5 mm²，p=0.003），对侧眼（0.62 mm²，p=0.02）也增加。双眼间差异无统计学意义（p=0.64），且处于人群正常值的下限。结论：玻璃体内注射FCA临床安全且耐受性良好，不会升高眼压。[2]

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- 作用机制：醋酸氟氢可的松是一种强效的盐皮质激素受体激动剂，可调节斑马鱼和哺乳动物的电解质平衡和应激反应基因表达[1]
- 制剂稳定性：在40°C/75%相对湿度下储存3个月的FLU胶囊和滴定粉剂，降解率<5%，表明其在加速条件下具有良好的稳定性[3]
- 临床应用潜力：1B期临床试验支持进一步评估FLU治疗地图状萎缩的疗效，0.1 mg/天的剂量在短期使用中显示出可接受的安全性[2]

C23H31FO6

422.49

422.21

C, 65.39; H, 7.40; F, 4.50; O, 22.72

514-36-3

Fludrocortisone acetate;514-36-3; 127-31-1 (free); 339-01-5 (hemisuccinate)

225609

White to off-white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

575.1±50.0 °C at 760 mmHg

233-234°C

301.6±30.1 °C

0.0±3.6 mmHg at 25°C

1.564

2.32

100.9

2

7

4

30

838

7

CC(=O)OCC(=O)[C@]1(CC[C@@H]2[C@@]1(C[C@@H]([C@]3([C@H]2CCC4=CC(=O)CC[C@@]43C)F)O)C)O

SYWHXTATXSMDSB-GSLJADNHSA-N

InChI=1S/C23H31FO6/c1-13(25)30-12-19(28)22(29)9-7-16-17-5-4-14-10-15(26)6-8-20(14,2)23(17,24)18(27)11-21(16,22)3/h10,16-18,27,29H,4-9,11-12H2,1-3H3/t16-,17-,18-,20-,21-,22-,23-/m0/s1

2-((8S,9R,10S,11S,13S,14S,17R)-9-fluoro-11,17-dihydroxy-10,13-dimethyl-3-oxo-2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl)-2-oxoethyl acetate

U-4845; U4845; 9α-fluoro Hydrocortisone Acetate; NSC 15186; FLUDROCORTISONE ACETATE; 514-36-3; Scherofluron; Florinef acetate; Alflorone acetate; Cortineff; Fludrocortisone 21-acetate; Cortef-F; U 4845; Fludrocortisone Acetate; NSC-15186; NSC15186

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~50 mg/mL (~118.35 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。