| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Akt1 (Ki = 0.08 nM); Akt2 (Ki = 2 nM); Akt3 (Ki = 2.6 nM)
Afuresertib inhibits the kinase activity of the E17K AKT1 mutant protein with EC50 of 0.2 nM. Afuresertib has a concentration-dependent impact on the phosphorylation levels of several AKT substrates, including GSK3b, PRAS40, FOXO, and Caspase 9. Afuresertib has an overall sensitivity of 65% for hematological cell lines (EC50 1 M). In response to afuresertib, 21% of tested solid tumor cell lines have an EC50 1 M. [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
Afuresertib 抑制 E17K AKT1 突变蛋白的激酶活性，EC50 为 0.2 nM。 Afuresertib 对多种 AKT 底物（包括 GSK3b、PRAS40、FOXO 和 Caspase 9）的磷酸化水平具有浓度依赖性影响。Afuresertib 对血液细胞系的总体敏感性为 65% (EC50 1 M)。针对 afuresertib，21% 的测试实体瘤细胞系的 EC50 为 1 M。 [1]
GSK2110183 对290种人类癌细胞系表现出强效的抗增殖活性，在携带PIK3CA突变或PTEN缺失的细胞系中敏感性更高。 在BT474乳腺癌细胞（PIK3CA K111N, ERBB2+）中，GSK2110183处理1小时后，能剂量依赖性地降低AKT底物GSK3β（Ser9/21）、PRAS40（Thr246）、FOXO（Thr24/32）和Caspase 9（Ser196）的磷酸化水平，同时诱导AKT在Ser473和Thr308位点的反馈性高磷酸化。 在LNCaP前列腺癌细胞（PTEN缺失）中，GSK2110183同样抑制上述AKT底物的磷酸化。 GSK2110183 在BT474或LNCaP细胞中处理1小时，不影响MEK1/2（Ser217/221）或ERK1/2（Tyr204）的磷酸化，表明其对AKT通路的选择性抑制。 在MDA-MB-468细胞进行的FOXO3A-GFP核转位实验中，GSK2110183诱导FOXO3A核转位的EC₅₀为53 nM。 BT474细胞经GSK2110183处理24小时后的细胞周期分析显示，1 µM浓度引起G1期阻滞，10 µM浓度导致亚G1期细胞比例增加（提示细胞死亡）。 LNCaP细胞的细胞周期分析显示亚G1期细胞比例呈剂量依赖性增加。 GSK2110183 对血液恶性肿瘤细胞系（特别是B细胞和T细胞来源的ALL、NHL和CLL）以及乳腺癌和肺癌来源的实体瘤细胞系显示出更强的抗增殖效力。 携带KRAS或BRAF激活突变的细胞系通常对GSK2110183敏感性较低。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
每天 10、30 或 100 mg/kg 的 Afuresertib (po) 剂量可在 BT474 乳腺肿瘤异种移植小鼠中引起 8%、37% 或 61% TGI。在具有 SKOV3 卵巢肿瘤异种移植物的小鼠中，用 10、30 和 100 mg/kg 的 afuresertib 治疗分别导致 23%、37% 和 97% TGI。 [1]
在携带BT474乳腺肿瘤异种移植瘤的雌性SCID小鼠中，每日口服给药GSK2110183 10、30和100 mg/kg，持续21天，与溶剂对照组相比，肿瘤生长抑制率（TGI）分别为8%、37%和61%。 在携带SKOV3卵巢肿瘤异种移植瘤的雌性无胸腺裸鼠中，每日口服给药GSK2110183 10、30和100 mg/kg，持续21天，TGI分别为23%、37%和97%。[1] |
| 酶活实验 |
激酶测定[1]
如前所述，测量了化合物对AKT酶的效力。由于GSK2110183和GSK2141795是AKT 3种亚型的高效抑制剂，因此最初使用滤膜结合试验在低酶浓度（0.1 nM AKT1、0.7 nM AKT2和0.2 nM AKT3）下测定抑制剂的真实效力（Ki*），然后用进展曲线分析进行确认。在过滤器结合试验中，将酶加抑制剂的预混合物孵育1小时，然后加入GSKα肽（Ac-KKGRARTSSFAEPG酰胺）和[γ33P]ATP中。2小时后终止反应，将放射性标记的AKT肽产物捕获在磷酸纤维素滤板中。进度曲线分析利用Sox-AKT潮汐底物（Ac-ARKRERAYSF-d-Pro-Sax-Gly-NH2）对产物形成进行连续实时荧光检测。[1] 对GSK2110183和GSK2141795进行了多种激酶检测。最初，在所有可用的激酶测定中，这些化合物在0.5和10µM下进行了测试，并对一组对0.5µM表现出强烈抑制作用的酶进行了完整的IC50曲线跟踪，而这些酶的内部测定是不可用的。 使用滤膜结合法测定GSK2110183对AKT酶的抑制效力。将酶与抑制剂的预混物孵育1小时，然后加入GSK3α肽底物和[γ³³P]ATP。反应2小时后终止，放射性标记的磷酸化肽产物被捕获在磷酸纤维素滤板上进行定量。 还使用Sox-AKT-tide底物，通过连续实时荧光检测产物形成进行了进程曲线分析。 GSK2110183 在0.5 µM和10 µM浓度下针对一组多样化的激酶（261种）进行了测试。对在0.5 µM浓度下抑制率>50%的激酶生成了完整的IC₅₀曲线。[1] |
| 细胞实验 |
细胞凋亡测定[2]
如前所述，通过进行AxV-FITC/PI双染色的FACS分析来评估细胞凋亡。简言之，将ACC‐MESO̴4和MSTO211H细胞接种在6孔板（细胞密度，1×105个细胞/孔）中，并在37°C下孵育24小时。接下来，用指定浓度的afuresertib孵育细胞，然后在室温下用AxV-FITC和PI（10μg/mL）孵育15分钟。通过使用FACSCantoII进行FACS来测定荧光强度。 细胞周期分析[2] 如前所述，通过进行基于PI染色的FACS分析来评估细胞周期。将ACC‐MESO-4和MSTO-211H细胞接种在六孔培养板（细胞密度，1×105个细胞/孔）中，孵育24小时。接下来，将细胞与指定浓度的afuresertib孵育24 h。对于FACS分析，在血清处理24小时后使用胰蛋白酶分离细胞，并在冰冷的70%乙醇中固定过夜。固定后，用RNase A（100μg/mL）处理细胞，并用PI（10μg/mL）染色。使用FlowJo软件测量细胞周期亚G1、G1、S和G2-M期细胞的百分比。 使用CellTiter Glo进行为期3天的增殖试验，以测量化合物在0-30μM下的生长抑制作用。与未处理的（DMSO）对照组相比，测量细胞生长速率。在Assay Client应用程序中，使用4或6参数拟合算法从抑制曲线计算EC50值。 对于磷酸化GSK3β ELISA，将细胞以25,000细胞/孔接种于96孔板过夜，然后用GSK2110183或DMSO处理1小时。裂解细胞，将裂解液转移至包被有抗GSK3β抗体的ELISA板中。过夜孵育后，洗涤板子，加入兔抗磷酸化GSK3β（Ser9）抗体，使用HRP标记的二抗和TMB底物显色，在450 nm测量吸光度。 使用类似的ELISA方法和商用试剂盒检测磷酸化PRAS40（Thr246）。 对于细胞增殖实验，培养各种肿瘤细胞系并用GSK2110183梯度浓度处理3天。使用CellTiter-Glo发光法测定细胞活力，并计算EC₅₀值。 对于蛋白质印迹分析，用GSK2110183处理的细胞在含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液中裂解。等量蛋白通过SDS-PAGE分离，转印至PVDF膜，与特异性一抗孵育过夜。膜与IRDye标记的二抗孵育，使用红外成像系统成像。 对于细胞周期分析，GSK2110183处理24小时的细胞经碘化丙啶染色后，通过流式细胞术分析。 对于FOXO3A-GFP核转位实验，用GSK2110183处理稳定表达FOXO3A-GFP的MDA-MB-468细胞1小时，并使用高内涵成像仪分析。[1] |
| 动物实验 |
携带 SKOV3 或 BT474 肿瘤的雌性无胸腺裸鼠和 SCID 小鼠
100 mg/kg 口服 携带 SKOV3 或 BT474 肿瘤的雌性无胸腺裸鼠和 SCID 小鼠[1] 100 mg/kg 口服 体内异种移植实验[1] 将细胞（SKOV3、CAPAN-2 和 HPAC）或肿瘤碎片（BT474）皮下注射到 6-8 周龄的雌性无胸腺裸鼠（SKOV3）和 SCID 小鼠（其他所有小鼠）体内，诱导肿瘤形成。当肿瘤体积达到 120 至 300 mm³ 时，根据肿瘤体积将小鼠随机分组，每组 n = 7-10 只小鼠。每日通过灌胃给予不同剂量的 GSK2110183 和 GSK2141795。在联合用药实验中，GSK1120212 也通过灌胃法每日给药。每周测量两次肿瘤体积和体重，肿瘤体积使用游标卡尺测量，并使用以下公式计算：肿瘤体积 (mm³) = (长度 × 宽度)²/2。结果以给药结束时的抑制率表示 = 100 × [1 - 药物治疗组平均生长量 / 载体对照组平均生长量]。[1] 体内剂量反应药效学分析[1] 携带 BT474 肿瘤异种移植瘤的 SCID 小鼠在末次给药后 2 小时收集组织前，每天分别接受载体、GSK2110183 或 GSK2141795 治疗 7 天。根据上述方法，使用磷酸化 PRAS40 ELISA 分析蛋白裂解物。采用乙腈蛋白沉淀法分析组织和血液中测试化合物的浓度，然后使用高效液相色谱-串联质谱法（HPLC/MS/MS）进行分析，电离方式为正离子大气压化学电离或Turbo离子喷雾电离。化合物的最低检测限为10 ng/mL，检测范围在100倍至1000倍的药物浓度范围内呈线性关系。 对于体内异种移植疗效研究，通过皮下注射癌细胞或肿瘤碎片，在雌性nu/nu CD-1或SCID小鼠体内建立肿瘤模型。当肿瘤体积达到 120–300 mm³ 时，将小鼠随机分组（n=7-10）。 GSK2110183 配制于 20% 聚乙二醇 (PEG) 400 / 1% 二甲基亚砜 (DMSO) 溶液中，每日通过灌胃给予指定剂量（例如，10、30、100 mg/kg），持续 21 天。 每周两次使用游标卡尺测量肿瘤体积，并监测小鼠体重。[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
GSK2110183 具有很高的血浆蛋白结合率（在人和啮齿动物血浆中均 >95%）。
在荷 BT474 肿瘤小鼠中，单次口服 100 mg/kg 剂量后，血药浓度约为 3–4 µM (Cmax) 时，可抑制肿瘤中约 60% 的磷酸化 PRAS40，且抑制作用可持续 24 小时。 肿瘤中 GSK2110183 的暴露量始终高于血药浓度（≥3 倍）。 时间进程实验表明，给药后 48 小时，磷酸化 PRAS40 的抑制作用恢复至基线水平。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
小鼠单次口服100 mg/kg剂量的GSK2110183后，血糖（给药后2小时峰值约为211 mg/dL）和血浆胰岛素（给药后4小时峰值约为105.6 ng/mL）均出现短暂升高。给药后8小时，各项指标恢复正常。
在为期21天的疗效研究中，小鼠体重仅出现轻微下降（1-3%），并在研究过程中逐渐恢复。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
肿瘤细胞会激活多种细胞信号通路，其中AKT是多种恶性肿瘤中被激活的关键激酶之一。GSK2110183和GSK2141795是口服生物利用度高、效力强的AKT激酶抑制剂，目前已进入人体临床研究阶段。这两种化合物均为选择性的ATP竞争性AKT1、2和3抑制剂。用这两种化合物处理的细胞显示AKT下游多个底物的磷酸化水平降低。这两种化合物均具有理想的药理学特性，每日口服给药可持续抑制AKT活性，并在多种不同组织来源的小鼠肿瘤模型中抑制肿瘤生长。与先前报道的ATP竞争性AKT激酶抑制剂相比，GSK2110183和GSK2141795具有更高的激酶选择性，因此对葡萄糖稳态的影响更小。在多种细胞系增殖筛选中，AKT抑制剂在AKT通路激活（通过PI3K/PTEN突变或缺失）的细胞系中显示出更高的效力，而MAPK通路（KRAS/BRAF）激活突变的细胞系对AKT抑制的敏感性较低。在KRAS驱动的胰腺癌小鼠模型中的进一步研究证实，AKT抑制剂GSK2141795与MEK抑制剂（GSK2110212；曲美替尼）联合使用可增强抗肿瘤作用，并伴有磷酸化S6水平的显著降低。综上所述，这些结果支持对AKT抑制剂在癌症治疗中进行临床评估，尤其是在与MEK抑制剂联合使用时。[1]
GSK2110183（Afuresertib）是一种口服生物利用度高的ATP竞争性泛AKT激酶抑制剂，目前已进入人体临床研究阶段。 它抑制AKT1 E17K激活突变体，这使其区别于结合PH结构域的变构AKT抑制剂。 与早期AKT抑制剂（如GSK690693）相比，该化合物显示出更高的激酶选择性，这与对葡萄糖稳态影响的降低有关。 临床前数据支持对GSK2110183进行临床评估。[1] |
| 分子式 |
C₁₈H₁₆CL₂F₂N₄OS
|
|---|---|
| 分子量 |
445.31
|
| 精确质量 |
444.039
|
| 元素分析 |
C, 48.55; H, 3.62; Cl, 15.92; F, 8.53; N, 12.58; O, 3.59; S, 7.20
|
| CAS号 |
1047634-63-8
|
| 相关CAS号 |
GSK2110183 analog 1 hydrochloride;2070009-64-0; 1047644-62-1 ; 1047645-82-8 (HCl); 1047634-63-8 (Afuresertib-F free base)
|
| PubChem CID |
57826797
|
| 外观&性状 |
Solid powder
|
| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
535.1±50.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
277.4±30.1 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.4 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.674
|
| LogP |
3.29
|
| tPSA |
101Ų
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
28
|
| 分子复杂度/Complexity |
552
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
|
| SMILES |
ClC1=C(C2=C(C([H])=NN2C([H])([H])[H])Cl)C([H])=C(C(N([H])[C@]([H])(C([H])([H])N([H])[H])C([H])([H])C2C([H])=C([H])C(=C(C=2[H])F)F)=O)S1
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| InChi Key |
AHDFWNJLFALBJP-JTQLQIEISA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C18H16Cl2F2N4OS/c1-26-16(12(19)8-24-26)11-6-15(28-17(11)20)18(27)25-10(7-23)4-9-2-3-13(21)14(22)5-9/h2-3,5-6,8,10H,4,7,23H2,1H3,(H,25,27)/t10-/m0/s1
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| 化学名 |
N-[(2S)-1-amino-3-(3,4-difluorophenyl)propan-2-yl]-5-chloro-4-(4-chloro-2-methylpyrazol-3-yl)thiophene-2-carboxamide
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| 别名 |
Afuresertib-F; Afuresertib-F free base; GSK-2110183-analog; GSK 2110183-analog; GSK2110183-analog
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2456 mL | 11.2281 mL | 22.4563 mL | |
| 5 mM | 0.4491 mL | 2.2456 mL | 4.4913 mL | |
| 10 mM | 0.2246 mL | 1.1228 mL | 2.2456 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Status | Interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT01531894 | Completed | Drug: GSK2110183 (afuresertib) |
Cancer | Novartis Pharmaceuticals | February 8, 2012 | Phase 2 |
| NCT01428492 | Completed | Drug: GSK2110183 Drug: Bortezomib |
Multiple Myeloma | Novartis | December 2011 | Phase 1 |
| NCT01476137 | Completed | Drug: GSK1120212 Drug: GSK2110183 |
Cancer | GlaxoSmithKline | October 26, 2011 | Phase 1 |
| NCT00881946 | Completed | Drug: GSK21110183 | Hematologic Malignancies | Accenture | July 2009 | Phase 1 Phase 2 |
| NCT01395004 | Completed | Drug: GSK2110183 | Langerhans Cell Histiocytosis | GlaxoSmithKline | November 2011 | Phase 2 |
|
D-myo-Inositol-1,3,4,5,6-pentaphosphate ammonium salt
Biotin-AKT3 Recombinant Human Active Protein Kinase
Biotin-AKT2 Recombinant Human Active Protein Kinase
AKT1 E17K Recombinant Human Active Protein Kinase
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