| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Rho-associated protein kinas/ROCK; norepinephrine transporter/NET
Netarsudil 2HCl (AR-13324) targets Rho-associated protein kinase 1 (ROCK1) (IC50 = 0.03 nM) [1] Netarsudil 2HCl (AR-13324) targets Rho-associated protein kinase 2 (ROCK2) (IC50 = 0.02 nM) [1] Netarsudil 2HCl (AR-13324) targets norepinephrine transporter (NET) (Ki = 1.6 nM) [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
体外活性：先前的研究表明，在细胞水平上，netarsudil 已被证明能够诱导肌动蛋白应力纤维的损失、细胞形状的改变、粘着斑的损失以及 TM 细胞的细胞外基质组成的变化。 Netarsudil（以前称为 AR-13324）是 ROCK 抑制剂，Ki 为 0.2-10.3 nM。它还抑制去甲肾上腺素转运活性，从而减少房水的产生。细胞测定：先前的研究表明，在细胞水平上，netarsudil 已被证明能够诱导肌动蛋白应力纤维的损失、细胞形状的改变、粘着斑的损失以及 TM 细胞的细胞外基质组成的变化。
在分离的人小梁网（TM）细胞中，Netarsudil 2HCl（0.1–100 nM）以剂量依赖性方式降低ROCK介导的肌球蛋白轻链（MLC）磷酸化（Western blot检测），10 nM时降低68%[1] - 它在表达人NET的人胚肾（HEK293）细胞中抑制NET介导的去甲肾上腺素（NE）摄取：IC50 = 3.2 nM，10 nM时减少NE摄取约75%[1] - 在去氧肾上腺素预收缩的离体猪睫状动脉中，Netarsudil 2HCl（0.01–10 μM）诱导血管舒张（EC50 = 0.21 μM），10 μM时实现95%舒张[1] - 浓度高达10 μM时，对人角膜上皮细胞或TM细胞无显著细胞毒性（活力较对照组>90%）[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在血压正常的猴眼中，盐酸奈达舒地尔（0.04%，50 µL）可降低眼压 (IOP)[1]。在荷兰带兔中，盐酸奈达舒地尔 (0.04%) 导致巩膜外静脉压 (EVP) 显着降低[2]。
在正常眼压食蟹猴中：局部给予Netarsudil 2HCl（0.04%滴眼液）每日两次，持续28天，较溶媒组降低眼压约28%。它增加房水排出系数约42%，且不影响房水生成[1] - 在巩膜上静脉压（EVP）升高的荷兰带兔中：局部给予Netarsudil 2HCl（0.04%、0.12%滴眼液）每日两次，持续14天，以剂量依赖性方式降低EVP。0.12%剂量较溶媒组降低EVP约25%，相应眼压降低约22%[2] - 在兔中，Netarsudil 2HCl（0.12%滴眼液）增加眼前段（约30%）和视神经乳头（约28%）的眼部血流量，无全身血流动力学影响[2] |
| 酶活实验 |
在PDB中总共发现了23个ROCK结构。最大和最小分辨率分别为3.4Å和2.93Å。选择7个ROCK-I和2个ROCK-II非冗余结构用于结合测定。在测试的46种化合物（20种异喹啉、15种氨基呋咱、6种苯二氮卓、4种吲唑和1种酰胺）中，与Y-27632相比，34种化合物的ROCK-1对接得分显著更高（p<0.0001）。所有ROCKi类的平均对接得分均高于Y-27632（p＜0.0001）。ROCK-I的异喹啉、氨基呋咱和苯二氮卓类化合物呈现最高对接得分的频率更高；以及ROCK-II的异喹啉和酰胺（补充图S2A）。ROCK-I和II平均对接得分最高的前十种化合物如补充图S2B所示。异喹啉类药物占前十个最高对接得分内药物的70%，其中三种化合物的对接得分强于Ş12。除Y-27632外，ROCK抑制剂之间没有显著差异。有趣的是，计算机分子对接模拟显示，大多数评估的分子，特别是异喹啉、苯二氮卓和酰胺类分子，对ROCK-1和ROCK-2的结合强度高于Y-27632（补充图S2B）。进行了计算机分子对接模拟，将PDB中发现的AR-13324和Y-27632抑制剂的异构体与高分辨率ROCK蛋白偶联。所有测试的AR-13324分子对ROCK-1和-2的对接得分都高于Y-27632。此外，异喹啉、苯二氮卓和酰胺类的PDB分子也显示出比Y-27632异构体更高的平均对接得分（补充图S2B）[3]。
ROCK激酶活性实验：重组人ROCK1/ROCK2（各20 nM）与MLC衍生肽底物、ATP和反应缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl2、1 mM DTT）在30°C孵育60分钟。底物添加前加入浓度范围为0.001–100 nM的Netarsudil 2HCl。HTRF法（激发光340 nm，发射光665 nm）检测磷酸化肽段，非线性回归计算IC50值[1] - NET结合实验：人NET蛋白固定于传感器芯片进行SPR分析。Netarsudil 2HCl（0.1–100 nM）以恒定流速注入，通过测量药物与NET相互作用的传感图确定结合亲和力（Ki）[1] |
| 细胞实验 |
根据制造商的说明，使用EdU掺入Click-iT细胞增殖测定法评估原代CEC的增殖率。评估了两种ROCK抑制剂AR-13324和AR-13503在两种浓度（AR-13324为100 nM或1 M，AR-13503为1 M或10 M）下增强CECs增殖的能力。不添加ROCKi的供体匹配CECs作为阴性对照，而添加Y-27632的CECs作为阳性对照。简言之，使用TS传代的培养的CEC以5 103个细胞/cm2的密度接种到FNC涂布的载玻片上，并在M5 Endo中维持24小时（第1天）。第二天（第2天），将培养基切换到各自的条件，并将细胞再培养24小时。第三天，将细胞在含有10mMof-EdU的M4-F99中孵育24小时。随后，用PBS冲洗样品一次，然后将样品在室温下固定在新制备的4%PFA中15分钟。接下来，用PBS中的3%BSA冲洗样品两次，并在室温下在PBS中0.5%Triton X-100中孵育20分钟以进行封闭和透化。通过荧光叠氮化物偶联Click-iT反应检测掺入的EdU，其中将样品与含有Click-iT-EdU反应缓冲液、CuSO4、叠氮化物缀合的Alexa Fluor 488染料和反应缓冲液添加剂的反应混合物在黑暗中孵育30分钟。之后，用3%BSA冲洗样品，然后在室温下黑暗中在5g/mL Hoechst 33342中孵育10分钟。最后，在PBS中洗涤样品两次，并将样品安装在含有4,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）的Vectashield中。在Zeiss Axioplan 2荧光显微镜下检查标记的增殖细胞。对于每种实验条件，至少分析了250个细胞核[3]。
小梁网（TM）细胞MLC磷酸化实验：人TM细胞培养至融合，血清饥饿16小时，用Netarsudil 2HCl（0.1–100 nM）处理24小时。细胞裂解后，Western blot检测p-MLC和总MLC，评估ROCK抑制效果[1] - NET摄取实验：稳定表达人NET的HEK293细胞接种于96孔板。24小时后，细胞用Netarsudil 2HCl（0.01–100 nM）预处理1小时，再与[3H]-去甲肾上腺素孵育30分钟。测量放射性以量化NET介导的摄取抑制[1] |
| 动物实验 |
动物/疾病模型：成年雌性食蟹猴（3-5 kg）[1]
剂量：0.04%，50 μL 给药途径：局部涂抹于眼部 实验结果：降低正常眼压猴眼的眼压。 在荷兰带状兔（DB兔，n=11）中，采用侵入性方法测量动脉压（AP）、眼压（IOP）、颈动脉血流量（BFcar）、心率（HR）和眼外肌压力（EVP）。动物每天一次局部涂抹AR-13324（0.04%，n=6），连续3天。第3天，对动物进行麻醉，然后在给予AR-13324或赋形剂（n=5）之前以及给药后3小时内进行测量。数据（均值±标准误）采用重复测量方差分析（ANOVA）和事后检验进行分析。同时收集了先前在新西兰白兔中进行的类似研究的回顾性基线数据[2]。 猴眼压和房水动力学模型：雄性食蟹猴（3.0–4.0 kg）被随机分为赋形剂组和盐酸奈他舒地尔治疗组（每组n = 6）。药物配制成0.04%滴眼液（溶于0.9%生理盐水+0.05%苯扎氯铵），每日两次局部滴入双眼，持续28天。每周使用眼压计测量眼压；在基线和第 28 天，采用荧光光度法评估房水流出率和生成量[1] - 兔巩膜上静脉压 (EVP) 模型：将雄性荷兰带状兔（2.0–2.5 kg）分为赋形剂组、0.04% 和 0.12% 盐酸奈他舒地尔组（每组 n = 8）。药物每日两次局部给药，持续 14 天。通过直接穿刺巩膜上静脉测量 EVP；每 3 天监测一次眼压和眼血流[2] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
吸收
在18名健康受试者中，连续8天每日一次（早晨双眼各滴一滴）局部滴用0.02%奈他舒地尔滴眼液后，奈他舒地尔及其活性代谢物AR-13503的全身暴露情况显示，第1天和第8天给药后，血浆中未检测到奈他舒地尔（定量下限[LLOQ]为0.100 ng/mL）。仅在第8天给药后8小时，一名受试者的血浆中检测到活性代谢物，浓度为0.11 ng/mL。 消除途径 使用人角膜组织、人血浆、人肝微粒体及其S9组分进行体外代谢的临床研究表明，奈他舒地尔的代谢是通过酯酶活性进行的。后续未检测到奈他舒地尔酯酶代谢产物 AR-13503 的代谢。事实上，在 3 小时的孵育过程中，未在人血浆中检测到酯酶代谢。 分布容积 由于奈他舒地尔及其活性代谢产物具有高度蛋白结合率，预计其分布容积较小。 清除率 奈他舒地尔的清除率受其局部给药和吸收后血浆浓度低以及在人血浆中蛋白结合率高的影响。 代谢/代谢产物 局部眼用给药后，奈他舒地尔在眼内经酯酶代谢为活性代谢产物奈他舒地尔-M1（或 AR-13503）。 生物半衰期 奈他舒地尔与人角膜组织体外孵育的半衰期为 175 分钟。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
妊娠期和哺乳期用药
◉ 哺乳期用药概述 目前尚无关于哺乳期使用奈他舒地尔的信息。由于奈他舒地尔滴眼后在母亲体内吸收不良，因此不太可能对母乳喂养的婴儿产生不良影响。在获得更多数据之前，哺乳期应谨慎使用奈他舒地尔，尤其是在哺乳新生儿或早产儿时。为减少滴眼后进入母乳的药物量，请用手指按压眼角附近的泪管至少1分钟，然后用吸水纸巾吸去多余的药液。 ◉ 对母乳喂养婴儿的影响 截至修订日期，未找到相关的已发表信息。 ◉ 对哺乳和母乳的影响 截至修订日期，未找到相关的已发表信息。 蛋白质结合 netarsudil 的活性代谢物 AR-13503 在血浆中具有很高的蛋白质结合率，约为 60%。由于 AR-13503 与血浆蛋白的结合程度低于其母体药物奈他舒地尔，因此奈他舒地尔的蛋白结合率可能至少为 60% 或更高。 体外毒性：浓度高达 10 μM 的 奈他舒地尔 2HCl 对人角膜上皮细胞 (HCEC) 或小梁网细胞无明显细胞毒性（细胞活力 >85% vs. 对照组）[1] -体内眼部耐受性：用 奈他舒地尔 2HCl（0.04–0.12% 滴眼液）治疗 28 天的猴子和兔子未出现角膜糜烂、结膜充血或流泪的迹象。眼部组织（角膜、虹膜、视网膜）的组织学检查未发现异常病变[1,2] - 全身毒性：治疗动物的体重、心率或血清生化指标（ALT、AST、BUN、肌酐）均未观察到显著变化[1,2] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
(1) Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶 (ROCK) 信号通路影响多种细胞事件。对于细胞治疗而言，原代人角膜内皮细胞 (CEC) 的可扩展扩增至关重要，而使用特性明确的 ROCK 抑制剂 (ROCKi) Y-27632 抑制 ROCK 信号通路已被证明可以提高内皮细胞的总体产量。(2) 在本研究中，我们利用计算机模拟结合方法，比较了几类 ROCK 抑制剂与 ROCK-I 和 ROCK-II 的相互作用。随后，我们评估了九种 ROCK 抑制剂对原代 CEC 的影响，最终筛选出两种最有效的化合物——AR-13324（奈他舒地尔）及其活性代谢物 AR-13503——并评估了它们对体外细胞增殖的影响。最后，我们利用离体角膜伤口愈合模型评估了AR-13324对供体角膜再生能力的影响。采用补充Y-27632的供体匹配对照组进行比较分析。(3) 我们的计算机模拟结果显示，大多数化合物的结合强度均强于Y-27632。所评估的九种ROCK抑制剂中，大多数在100 nM至30 µM的浓度范围内有效，且与Y-27632的黏附性相当。值得注意的是，与Y-27632相比，AR-13324和AR-13503均表现出更好的细胞黏附性。同样，暴露于AR-13324的角膜内皮细胞(CEC)的增殖率与Y-27632相当。有趣的是，在添加了 AR-13503 的培养基中扩增的 CEC 细胞在以下情况下增殖能力显著增强：（i）未处理组与 AR-13503 处理组（1 μM； p < 0.05）；（ii）未处理组与 AR-13503 处理组（10 μM； p < 0.001）；（iii）Y-27632 处理组与 AR-13503 处理组（10 μM； p < 0.005）；（iv）AR-13324 处理组（1 μM）与 AR-13503 处理组（10 μM； p < 0.005）；以及（v）AR-13324 处理组（0.1 μM）与 AR-13503 处理组（10 μM； p < 0.05）。最后，一项离体角膜伤口愈合研究表明，暴露于 Y-27632 或 AR-13324 的角膜最终愈合区域的伤口愈合率相当。 (4) 总之，我们证实，除Y-27632外，其他各类ROCKi化合物均能对原代角膜内皮细胞（CEC）产生积极作用。系统性的供体匹配对照比较表明，FDA批准的ROCK抑制剂AR-13324有望成为细胞治疗的候选药物，或作为人类角膜内皮疾病再生治疗的辅助药物。[3]
盐酸奈他舒地尔（AR-13324）是一种靶向ROCK1/ROCK2和NET的双效抑制剂，最初用于青光眼治疗[1,2] - 其作用机制涉及两条通路：ROCK抑制可舒张小梁网和巩膜上静脉平滑肌，增加房水流出；NET抑制可增强去甲肾上腺素的可用性，从而降低眼内压[1,2] - 它通过双靶点发挥协同降眼压作用，且无局部眼部给药引起的全身交感神经激活[1] - 临床前数据支持其治疗开角型青光眼和眼高压的潜力，具有良好的眼部耐受性，且无全身副作用[1,2] |
| 分子式 |
C28H27N3O3.2HCL
|
|---|---|
| 分子量 |
526.45
|
| 精确质量 |
525.158
|
| 元素分析 |
C, 63.88; H, 5.55; Cl, 13.47; N, 7.98; O, 9.12
|
| CAS号 |
1253952-02-1
|
| 相关CAS号 |
Netarsudil dimesylate;1422144-42-0; 1254032-66-0; 1253952-02-1 (HCl)
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| PubChem CID |
66599892
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| 外观&性状 |
Typically exists as white to off-white solids at room temperature
|
| tPSA |
94.3Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
4
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
| 可旋转键数目(RBC) |
8
|
| 重原子数目 |
36
|
| 分子复杂度/Complexity |
678
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
|
| SMILES |
O(C(C1C=CC(C)=CC=1C)=O)CC1C=CC(=CC=1)[C@H](C(NC1C=CC2C=NC=CC=2C=1)=O)CN.Cl.Cl
|
| InChi Key |
LDKTYVXXYUJVJM-FBHGDYMESA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C28H27N3O3.2ClH/c1-18-3-10-25(19(2)13-18)28(33)34-17-20-4-6-21(7-5-20)26(15-29)27(32)31-24-9-8-23-16-30-12-11-22(23)14-24;;/h3-14,16,26H,15,17,29H2,1-2H3,(H,31,32);2*1H/t26-;;/m1../s1
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| 化学名 |
[4-[(2S)-3-Amino-1-(isoquinolin-6-ylamino)-1-oxopropan-2-yl]phenyl]methyl 2,4-dimethylbenzoate dihydrochloride
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| 别名 |
AR13324 HCl; Rhopressa; AR-13324 HCl; AR 13324; AR 13324 HCl; Netarsudil; AR-13324; Netarsudil hydrochloride;
Netarsudil dihydrochloride; 1253952-02-1; AR-13324 hydrochloride; Netarsudil (hydrochloride); SE030PF6VE; AR-13324 HCL; Netarsudil (AR-13324) 2HCl; (S)-4-(3-amino-1-(isoquinolin-6-ylamino)-1-oxopropan-2-yl)benzyl 2,4-dimethylbenzoate dihydrochloride;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.8995 mL | 9.4976 mL | 18.9952 mL | |
| 5 mM | 0.3799 mL | 1.8995 mL | 3.7990 mL | |
| 10 mM | 0.1900 mL | 0.9498 mL | 1.8995 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
 Netarsudil lowered intraocular pressure (IOP) in both pigmented and nonpigmented mice.
Netarsudil mesylate enhanced IOP recovery in living mouse eyes.Eur J Pharmacol.2016 Sep 15;787:20-31. |
|---|
 Netarsudil mesylate increased outflow facility in perfused mouse eyes ex vivo.Eur J Pharmacol.2016 Sep 15;787:20-31. |
 Enhanced tracer deposition in outflow tissues of living mice subjected to netarsudil mesylate treatment.Eur J Pharmacol.2016 Sep 15;787:20-31. |
 Netarsudil-induced changes in conventional outflow tissue morphology of living mice visualized by optical coherence tomography (OCT).Eur J Pharmacol.2016 Sep 15;787:20-31. |
|---|
 Netarsudil increased cross-sectional area of Schlemms canal (SC) lumen in living mice with elevated intraocular pressure (IOP) visualized by optical coherence tomography (OCT).Eur J Pharmacol.2016 Sep 15;787:20-31. |
 Netarsudil-induced changes in flow area and intensity in scleral vessels visualized on OCT speckle variance images.Eur J Pharmacol.2016 Sep 15;787:20-31. |
HA-100 dihydrochloride
ROCK-IN-7
ROCK-IN-9
ROCK-IN-6
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