Rho-associated protein kinas/ROCK; norepinephrine transporter/NET
Rho kinase; norepinephrine transporter [1]
Rho kinase; norepinephrine transporter [2]

体外活性：先前的研究表明，在细胞水平上，netarsudil 已被证明能够诱导肌动蛋白应力纤维的损失、细胞形状的改变、粘着斑的损失以及 TM 细胞的细胞外基质组成的变化。 Netarsudil（以前称为 AR-13324）是 ROCK 抑制剂，Ki 为 0.2-10.3 nM。它还抑制去甲肾上腺素转运活性，从而减少房水的产生。细胞测定：先前的研究表明，在细胞水平上，netarsudil 已被证明能够诱导肌动蛋白应力纤维的损失、细胞形状的改变、粘着斑的损失以及 TM 细胞的细胞外基质组成的变化。

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对去核小鼠眼球进行体外灌注实验，使用甲磺酸奈他舒地尔（100 nM）处理后，与溶媒（0.001% DMSO）组相比，房水流出系数显著增加。C57BL/6小鼠（n=8）中，药物处理组的流出系数平均增幅具有统计学意义（P=0.006）；CD1小鼠（n=6）中，同样观察到显著的流出系数增加（P=0.025）。在药物或溶媒灌注45-60分钟后，通过9个连续的压力梯度测定流速（Q）与压力（P）的关系，进而计算流出系数 [1]
以恒定压力（15 mmHg）对去核人眼球进行体外灌注，使用0.3 μM 奈他舒地尔-M1（活性代谢产物）处理3小时后，与基线相比，房水流出系数（C）显著增加51%（P<0.01），与配对溶媒对照组相比显著增加102%（P<0.01）。同时，施莱姆管（SC）内壁（IW）和巩膜外静脉（ESVs）的有效滤过长度百分比（PEFL）显著增加（分别为P<0.05和P<0.01）。在药物处理组眼中，巩膜外静脉的PEFL显著高于内壁（P<0.01），且与流出系数的百分比变化呈正相关（R²=0.58，P=0.01）。此外，与对照组相比，巩膜外静脉的横截面积（P<0.01）和邻管结缔组织（JCT）厚度（P<0.05）均显著增加 [2]

动物功效研究发现，奈塔舒地尔的局部治疗能够影响小鼠常规流出道的近端部分（小梁网和施累姆斯管）和远端部分（巩膜内血管）。

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青光眼造成的视力损害目前影响着全球7000万人。虽然可以通过有效降低眼压来减缓或停止疾病的进展，但目前的医学治疗往往是不够的。幸运的是，针对导致高眼压的病变常规流出组织的三种新疗法已进入人体试验的最后阶段。rho激酶抑制剂已被证明特别有效，并可添加到当前的治疗中。不幸的是，监测流出液组织健康状况及其对常规流出液治疗反应的非接触式技术在临床上尚不可用。利用光学相干层析成像（OCT）和新型分割软件，我们首次展示了药物对活体眼睛常规流出组织的影响。外用奈沙地尔（原AR-13324）是一种rho激酶/去甲肾上腺素转运蛋白抑制剂，影响小鼠常规流出道的近端（小梁网和施莱姆管）和远端（束内血管）。因此，流出组织灌注增加可以通过OCT可靠地分辨为netarsudil治疗后小梁网变宽和Schlemm管横截面积显著增加。这些变化与流出设施增加、流出血管斑点变异强度增加、常规流出组织中示踪剂沉积增加和眼压降低同时发生。这是第一次使用实时成像技术来显示药物对常规流出组织的实时作用，特别是奈沙地尔在小鼠眼睛中的作用机制。这里的进步为开发用于监测青光眼治疗的临床友好型OCT平台铺平了道路。[1]

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配对人眼（n = 5）分别灌注0.3 μM netarsuil - m1或恒压（15 mm Hg）载药溶液。3小时后，在灌注介质中加入荧光微球，在灌注固定前追踪流出模式。通过测量示踪剂在小梁网（TM）、锁膜外静脉（ESVs）和施莱姆管内壁（IW）的分布长度，计算有效滤过长度百分比（PEFL）。通过共聚焦、光学和电子显微镜观察小梁流出通道的形态学变化。结果：与基线（51%,P < 0.01）和配对对照（102%,P < 0.01）相比，灌注netarsudil-M1显著增加了C， IW （P < 0.05）和esv （P < 0.01）的PEFL均显著增加。在治疗组中，esv组PEFL明显高于IW组（P < 0.01），且与esv横截面积增加相关（P < 0.01）。esv有效滤过长度百分比与C变化百分比呈正相关（R2 = 0.58, P = 0.01）。与对照组相比，治疗组的眼关节旁结缔组织（JCT）厚度显著增加（P < 0.05）。[2]

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向10周龄C57小鼠和6-14周龄CD1小鼠（每组5只）的右眼局部给予10 μl 0.04%甲磺酸奈他舒地尔，与安慰剂（CF324-01）处理组相比，显著降低了眼内压（IOP）（不同品系的P值分别为P<0.05或P<0.01） [1]
向活体小鼠（n=8）的对侧眼玻璃体内预加载100 nM甲磺酸奈他舒地尔，在人工将眼内压升高至40 mmHg后，药物处理组的眼内压恢复能力增强。表征压力衰减速率的常数α与溶媒（0.001% DMSO）处理组相比显著增加（P<0.01） [1]
对活体C57小鼠进行局部奈他舒地尔处理后，通过光学相干断层扫描（OCT）成像观察到，处理后45分钟小梁网（TM）增宽，施莱姆管（SC）横截面积显著增加。同时，流出血管的散斑方差强度增加，传统流出组织中的示踪剂沉积增强，眼内压降低 [1]
在眼内压升高的活体小鼠中，局部给予奈他舒地尔（10 μl 0.04%）后，当眼内压被控制在10、15和30 mmHg时，施莱姆管腔的横截面积增加（P<0.05或P<0.01）。OCT成像显示，C57和CD1小鼠（n=11）的施莱姆管面积相对于基线（处理前10 mmHg）发生显著变化 [1]
对C57和CD1小鼠进行局部奈他舒地尔处理后，通过OCT散斑方差图像分析发现，参与房水流出的巩膜血管的横截面积和散斑方差强度在处理后30-60分钟增加（P<0.05） [1]

在PDB中总共发现了23个ROCK结构。最大和最小分辨率分别为3.4Å和2.93Å。选择7个ROCK-I和2个ROCK-II非冗余结构用于结合测定。在测试的46种化合物（20种异喹啉、15种氨基呋咱、6种苯二氮卓、4种吲唑和1种酰胺）中，与Y-27632相比，34种化合物的ROCK-1对接得分显著更高（p<0.0001）。所有ROCKi类的平均对接得分均高于Y-27632（p＜0.0001）。ROCK-I的异喹啉、氨基呋咱和苯二氮卓类化合物呈现最高对接得分的频率更高；以及ROCK-II的异喹啉和酰胺（补充图S2A）。ROCK-I和II平均对接得分最高的前十种化合物如补充图S2B所示。异喹啉类药物占前十个最高对接得分内药物的70%，其中三种化合物的对接得分强于Ş12。除Y-27632外，ROCK抑制剂之间没有显著差异。有趣的是，计算机分子对接模拟显示，大多数评估的分子，特别是异喹啉、苯二氮卓和酰胺类分子，对ROCK-1和ROCK-2的结合强度高于Y-27632（补充图S2B）。进行了计算机分子对接模拟，将PDB中发现的AR-13324和Y-27632抑制剂的异构体与高分辨率ROCK蛋白偶联。所有测试的AR-13324分子对ROCK-1和-2的对接得分都高于Y-27632。此外，异喹啉、苯二氮卓和酰胺类的PDB分子也显示出比Y-27632异构体更高的平均对接得分（补充图S2B）[3]。

根据制造商的说明，使用EdU掺入Click-iT细胞增殖测定法评估原代CEC的增殖率。评估了两种ROCK抑制剂AR-13324和AR-13503在两种浓度（AR-13324为100 nM或1 M，AR-13503为1 M或10 M）下增强CECs增殖的能力。不添加ROCKi的供体匹配CECs作为阴性对照，而添加Y-27632的CECs作为阳性对照。简言之，使用TS传代的培养的CEC以5 103个细胞/cm2的密度接种到FNC涂布的载玻片上，并在M5 Endo中维持24小时（第1天）。第二天（第2天），将培养基切换到各自的条件，并将细胞再培养24小时。第三天，将细胞在含有10mMof-EdU的M4-F99中孵育24小时。随后，用PBS冲洗样品一次，然后将样品在室温下固定在新制备的4%PFA中15分钟。接下来，用PBS中的3%BSA冲洗样品两次，并在室温下在PBS中0.5%Triton X-100中孵育20分钟以进行封闭和透化。通过荧光叠氮化物偶联Click-iT反应检测掺入的EdU，其中将样品与含有Click-iT-EdU反应缓冲液、CuSO4、叠氮化物缀合的Alexa Fluor 488染料和反应缓冲液添加剂的反应混合物在黑暗中孵育30分钟。之后，用3%BSA冲洗样品，然后在室温下黑暗中在5g/mL Hoechst 33342中孵育10分钟。最后，在PBS中洗涤样品两次，并将样品安装在含有4,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）的Vectashield中。在Zeiss Axioplan 2荧光显微镜下检查标记的增殖细胞。对于每种实验条件，至少分析了250个细胞核[3]。

局部应用
\n眼压升高的小鼠\n目前，全球有7000万人受青光眼引起的视力障碍影响。虽然有效降低眼压可以延缓或阻止疾病进展，但目前的药物治疗往往效果不佳。幸运的是，三种针对导致眼压升高的病变常规房水流出组织的新型疗法正处于人体试验的最后阶段。Rho激酶抑制剂已被证明特别有效，并能与现有疗法协同作用。然而，目前临床上尚无非接触式技术可以监测房水流出组织的健康状况及其对常规房水流出疗法的反应。我们利用光学相干断层扫描（OCT）成像和新型分割软件，首次展示了药物对活体眼内常规房水流出组织的影响。局部应用奈他舒地尔（曾用名AR-13324）是一种Rho激酶/去甲肾上腺素转运体抑制剂，可影响小鼠常规房水流出道的近端（小梁网和施莱姆氏管）和远端（巩膜内血管）。因此，通过光学相干断层扫描（OCT）可以可靠地观察到，奈他舒地尔治疗后，房水流出组织的灌注增加表现为小梁网扩张和施莱姆氏管横截面积显著增大。这些变化与房水流出率增加、房水流出血管散斑方差强度增加、常规房水流出组织中示踪剂沉积增加以及眼内压降低同时发生。这是首篇利用活体成像技术实时展示药物对常规房水流出组织的影响，并阐明奈他舒地尔在小鼠眼内作用机制的报告。此处的研究进展为开发适用于临床的OCT平台以监测青光眼治疗铺平了道路。[1]

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\n将成对的人眼（n = 5）分别灌注0.3 μM netarsudil-M1或载体溶液，灌注压力恒定（15 mmHg）。3小时后，向灌注液中加入荧光微球，以追踪灌注固定前的房水流出模式。通过全局成像和共聚焦成像，测量小梁网（TM）、巩膜外静脉（ESV）和施莱姆氏管内壁（IW）中示踪剂分布的长度，计算有效滤过长度百分比（PEFL）。采用共聚焦显微镜、光学显微镜和电子显微镜研究了小梁网流出通路的形态学变化。结果：与基线（51%，P < 0.01）和配对对照组（102%，P < 0.01）相比，netarsudil-M1灌注显著增加了C值，并显著增加了IW（P < 0.05）和ESV（P < 0.01）中的PEFL。在治疗眼中，ESV中的PEFL显著高于IW（P < 0.01），并且与ESV横截面积的增加相关（P < 0.01）。ESV中的有效滤过长度百分比与C值的百分比变化呈正相关（R² = 0.58，P = 0.01）。与对照组相比，治疗组眼部的管旁结缔组织（JCT）厚度显著增加（P < 0.05）。[2]

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\n为了评估小鼠的眼压降低情况：将10周龄的C57小鼠和6-14周龄的CD1小鼠按年龄和性别分为若干组（每组5只小鼠）。每个品系的小鼠分为两组：一组右眼局部滴注10 μl 0.04%的奈他舒地尔甲磺酸盐，另一组右眼滴注10 μl安慰剂（CF324-01）眼药水。给药前测量双眼眼压，并使用 Mann-Whitney U 检验比较各组间的眼压变化值 [1]。
\n对于活体小鼠的眼压恢复评估：将载体（0.001% DMSO）或 100 nM 的甲磺酸奈他舒地尔预先装入灌注针，并插入活体小鼠对侧眼的眼内。双眼在 15 mmHg 眼压下维持 30 分钟，以使药物/载体进入眼内，然后将眼压人为升高至 40 mmHg 并维持 5 分钟。关闭储液罐，并使用压力传感器监测眼压随时间的变化。采用学生t检验（n=8）计算并比较各组间的速率常数α[1]
\n小鼠离体房水流出率测定：将C57BL/6（n=8）和CD1（n=6）小鼠的成对去核眼球通过微针灌注甲磺酸奈他舒地尔或载体（0.001% DMSO）45-60分钟。随后，眼球依次经历9个压力阶跃，并使用iPerfusion系统测量流速（Q）与压力（P）的关系，以计算房水流出率。采用配对加权t检验分析房水流出率的百分比变化[1]
\n小鼠示踪剂沉积评估：将荧光微珠加载到含有或不含甲磺酸奈他舒地尔的微针中。将C57和CD1小鼠（每组n=5）的成对眼球的前房进行插管，并以0.167 μl/min的恒定流速灌注1小时。小鼠继续饲养1小时后处死，并将前节平铺固定，通过落射荧光显微镜进行观察。对常规房水流出区域的荧光强度、宽度和面积进行定量分析，并使用学生t检验进行比较[1]。
\n对于小鼠常规房水流出组织的OCT成像：将活体C57小鼠局部滴用奈他舒地尔或安慰剂。在治疗前和治疗后45分钟采集虹膜角膜角200次B扫描的平均OCT图像。使用Schlemm II软件分割巩膜下层（SC），并使用Schlemm III软件分析散斑方差图像，以量化SC面积、巩膜血管的散斑方差强度和小梁网（TM）宽度（每组n=5）。采用学生t检验进行统计分析[1]
\n对于眼压升高小鼠的角膜缘OCT成像：C57和CD1小鼠（n=11）分别接受局部应用奈他舒地尔或安慰剂治疗。在治疗前和治疗后30-60分钟，将玻璃针插入前房，依次控制眼压为10、15和30 mmHg。在相同位置采集虹膜角膜角的OCT图像，并使用Schlemm II软件量化角膜缘横截面积，以基线值（治疗前10 mmHg）为基准进行表示。采用Mann-Whitney U检验进行统计比较[1]
\n对于人眼离体灌注：将成对的人眼（n=5）在恒定压力（15 mmHg）下灌注0.3 μM奈他舒地尔-M1或载体溶液3小时。在灌注固定前，向灌注液中添加荧光微球以追踪流出模式。采用全局和共聚焦成像计算小梁网 (TM)、小梁网囊 (ESV) 和脊髓 (SC) 内壁 (IW) 的灌注效率 (PEFL)。通过共聚焦显微镜、光学显微镜和电子显微镜研究形态学变化。测量流出率随时间的变化，并量化包括小梁网囊横截面积和小梁网囊壁厚度在内的参数，并在各组之间进行比较 [2]

吸收、分布和排泄
在18名健康受试者中，连续8天每日一次（早晨双眼各滴一滴）局部滴用0.02%奈他舒地尔滴眼液后，奈他舒地尔及其活性代谢物AR-13503的全身暴露情况显示，第1天和第8天给药后，血浆中未检测到奈他舒地尔（定量下限[LLOQ]为0.100 ng/mL）。仅在第8天给药后8小时，一名受试者的血浆中检测到活性代谢物，浓度为0.11 ng/mL。
使用人角膜组织、人血浆、人肝微粒体及其S9组分进行体外代谢的临床研究表明，奈他舒地尔的代谢是通过酯酶活性进行的。未检测到奈他舒地尔酯酶代谢物 AR-13503 的后续代谢。事实上，在3小时的孵育过程中，未检测到人血浆中的酯酶代谢。
由于奈他舒地尔及其活性代谢物具有高度蛋白结合率，预计其分布容积较小。
奈他舒地尔的清除率受其局部给药和吸收后血浆浓度低以及在人血浆中蛋白结合率高的影响。

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代谢/代谢物
局部眼用给药后，奈他舒地尔在眼内经酯酶代谢为活性代谢物奈他舒地尔-M1（或AR-13503）。

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生物半衰期
奈他舒地尔与人角膜组织体外孵育的半衰期为175分钟。

妊娠期和哺乳期用药
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无关于哺乳期使用奈他舒地尔的信息。由于奈他舒地尔滴眼后在母亲体内吸收不良，因此不太可能对母乳喂养的婴儿产生不良影响。在获得更多数据之前，哺乳期应谨慎使用奈他舒地尔，尤其是在哺乳新生儿或早产儿时。为减少使用眼药水后进入母乳的药物量，请按压眼角泪管至少 1 分钟，然后用吸水纸巾擦去多余的药液。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对哺乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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蛋白结合
奈他舒地尔的活性代谢物 AR-13503 在血浆中具有很高的蛋白结合率，约为 60%。由于 AR-13503 与血浆蛋白的结合程度低于其母体药物奈他舒地尔，因此奈他舒地尔的蛋白结合率可能至少为 60% 或更高。

[1]. Eur J Pharmacol.2016 Sep 15;787:20-31.
[2]. Invest Ophthalmol Vis Sci.2016 Nov1;57(14):6197-6209.
[3]. Cells . 2023 May 3;12(9):1307.

药效学
房水通过两条途径流出眼球：1）传统的小梁网途径和2）非传统的葡萄膜巩膜途径。虽然已有研究表明，由于各种病理原因，传统的小梁网途径是房水流出的主要途径，但目前大多数用于治疗青光眼的药物都针对葡萄膜巩膜途径，而对病变的小梁网途径不予治疗，任其进行性恶化和功能障碍。 Netarsudil 是一种新型青光眼药物，它既是 Rho 激酶抑制剂，又是去甲肾上腺素转运体 (NAT) 抑制剂，能够特异性地靶向并抑制传统小梁通路中的 Rho 激酶和 NAT。而许多同类药物的治疗重点在于细胞和肌肉组织的重塑。

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Netarsudil（原名 AR-13324）是一种 Rho 激酶和去甲肾上腺素转运体的双重抑制剂，目前正在开发用于治疗青光眼和眼高压[1][2]。
在活体小鼠眼中，netarsudil 可影响传统房水流出道的近端（小梁网和 Schlemm 管）和远端（巩膜内血管），通过扩张小梁网和增加巩膜内血管横截面积来增加房水流出组织的灌注，从而提高房水流出率，增强房水流出血管的散斑变异强度。眼压降低[1]
在人眼中，netarsudil 的作用机制涉及 JCT 的急性扩张和 ESV 的扩张，导致房水流出通过更大的 IW 和 ESV 区域重新分布，从而增加房水流出率[2]
这是首篇利用实时成像（OCT）技术展示 netarsudil 对活体眼内常规房水流出组织实时药物作用的报告，为开发用于监测青光眼治疗的临床友好型 OCT 平台铺平了道路[1]

C28H27N3O3

453.54

453.205

C, 74.15; H, 6.00; N, 9.27; O, 10.58

1254032-66-0

1422144-42-0 (mesylate);1254032-66-0;1253952-02-1 (HCl);

66599893

White to off-white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

711.9±60.0 °C at 760 mmHg

384.3±32.9 °C

0.0±2.3 mmHg at 25°C

1.667

3.53

94.3Ų

2

5

8

34

678

1

O(C(C1C=CC(C)=CC=1C)=O)CC1C=CC(=CC=1)[C@H](C(NC1C=CC2C=NC=CC=2C=1)=O)CN

OURRXQUGYQRVML-AREMUKBSSA-N

InChI=1S/C28H27N3O3/c1-18-3-10-25(19(2)13-18)28(33)34-17-20-4-6-21(7-5-20)26(15-29)27(32)31-24-9-8-23-16-30-12-11-22(23)14-24/h3-14,16,26H,15,17,29H2,1-2H3,(H,31,32)/t26-/m1/s1

Benzoic acid, 2,4-dimethyl-, (4-((1S)-1-(aminomethyl)-2-(6-isoquinolinylamino)-2-oxoethyl)phenyl)methyl ester

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。