| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
Acyl-coenzyme A: cholesterol O-acyltransferase 1 (ACAT1) [1].
EC₅₀: 9 nM (for human ACAT1) [1]. EC₅₀: 368 nM (for human ACAT2) [1]. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
当 Nevanimibe（PD-132301；ATR101；3 nM-30 μM）和胆固醇共孵育时，毒性以剂量依赖性方式急剧上升。 24 小时后，当胆固醇浓度为 60 μg/mL 时，3 nM Nevanimibe 的存活率降低了 60%。当胆固醇存在时，所有浓度的 Nevanimibe (3 nM–30 μM) 都会引起细胞毒性，然而，当胆固醇存在但未经 Nevanimibe 处理时，细胞活力不受影响 [1]。
在基于细胞的荧光胆固醇酯化实验中，Nevanimibe 对人 ACAT1 的抑制具有强效和选择性，EC₅₀ 为 9 nM，而对人 ACAT2 的 EC₅₀ 为 368 nM，显示对 ACAT1 约 40 倍的选择性 [1]。 在人 H295R 肾上腺皮质癌细胞中，Nevanimibe (9 nM) 与外源性胆固醇 (45 μg/mL) 共同处理 5 小时后，细胞内游离胆固醇水平增加约 70%，胆固醇酯形成减少，与 ACAT1 抑制一致。游离胆固醇与胆固醇酯的比例从单独胆固醇处理的 1.4:1 变为 5:1。细胞内总胆固醇含量无变化 [1]。 在 H295R 细胞中，Nevanimibe (30 nM) 与胆固醇 (45 μg/mL) 共同处理 5-16 小时，诱导细胞凋亡，表现为 caspase-3/7 活性增加（约 3 倍）和 TUNEL 阳性细胞增加。在无外源性胆固醇的情况下，Nevanimibe 浓度高达 3 μM 时无毒性；仅 30 μM 浓度在 24 小时后降低约 40% 的细胞活力 [1]。 外源性胆固醇 (45-60 μg/mL) 的加入显著增强了 H295R 细胞对 Nevanimibe 的敏感性，3 nM ATR-101 与 60 μg/mL 胆固醇共同处理 24 小时后细胞活力降低约 60% [1]。 胆固醇转运抑制剂 U18666A (100 nM) 可阻止 Nevanimibe (30 nM) 诱导的 caspase-3/7 活化，表明胆固醇向内质网的转运是细胞毒性所必需的 [1]。 Nevanimibe 在 H295R 细胞中诱导未折叠蛋白反应。在处理 5 小时（30 nM ATR-101 + 45 μg/mL 胆固醇）后，观察到以下现象：XBP-1 mRNA 剪接、PERK 磷酸化（Western blot 上显示迁移变慢）以及 CHOP mRNA 表达增加（约 2.5 倍）[1]。 内质网钙释放抑制剂（Xestospongin C, 10 μM；2-APB, 100 μM）、线粒体钙摄取抑制剂（Ruthenium Red, 15 μM）和线粒体膜通透性抑制剂（Cyclosporin A, 10 μM）均能阻断 Nevanimibe 诱导的 H295R 细胞 caspase-3/7 活化 [1]。 Nevanimibe (30 nM + 胆固醇) 降低线粒体膜电位（TMRE 荧光较对照降低约 50%），该效应可被 Cyclosporin A 逆转 [1]。 通过 shRNA 敲低 HAC15 肾上腺皮质细胞中的 ACAT1 表达（ACAT1 表达降低 80%）可模拟 Nevanimibe 的效应：在外源性胆固醇 (60 μg/mL) 存在下，游离胆固醇增加（游离胆固醇:胆固醇酯比例约为 4:1，对照为 1:1），24 和 72 小时后细胞活力降低，caspase-3/7 活性增加（约 3-4 倍）。这些效应可被 U18666A、Ruthenium Red 和 Cyclosporin A 阻断 [1]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
犬研究（药效学和毒性）：三只雄性比格犬口服 Nevanimibe，每日一次，先以 3 mg/kg/天给药 7 天，随后以 30 mg/kg/天再给药 7 天。治疗 14 天后，肾上腺组织学检查显示皮质萎缩、空泡化、变性/坏死以及单核细胞浸润，主要影响束状带。每个代表性视野中约 60% 的皮质细胞 TUNEL 染色阳性，表明存在持续性凋亡。肾上腺髓质未见异常 [1]。
甾体激素合成抑制：在同一批犬中，与基线相比，ACTH 刺激的皮质醇水平在 3 mg/kg/天给药 7 天后降低 62%，在 30 mg/kg/天给药 14 天后降低 71%。ACTH 刺激的皮质酮、17-羟基孕酮、11-脱氧皮质醇和 11-脱氧皮质酮水平也显著降低。治疗 14 天后，ACTH 刺激前的肾上腺雄激素（雄烯二酮、DHEA-S）水平显著降低 [1]。 肾上腺胆固醇含量：治疗犬的肾上腺中胆固醇酯含量（191 μg/mg 蛋白）较未治疗犬（606 μg/mg 蛋白）显著降低，与 ACAT1 抑制一致。游离胆固醇水平无变化（37 vs. 38 μg/mg 蛋白）[1]。 |
| 酶活实验 |
ACAT1/ACAT2 荧光细胞实验：将缺乏内源性 ACAT 活性的中国仓鼠卵巢细胞（AC29）转染表达人 ACAT1 或 ACAT2 的构建体。测量荧光胆固醇类似物（22-[N-(7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑-4-基)氨基]-23,24-二去甲-5-胆烯-3-醇）的酯化程度。将细胞与递增浓度的 Nevanimibe 孵育，测定酯化程度以计算 EC₅₀ 值 [1]。
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| 细胞实验 |
细胞毒性测定[1]
细胞类型： H295R 和 HAC Clone 15 (HAC15) 人类 ACC 细胞系 测试浓度： 3 nM-30 μM 孵育持续时间：24小时（hrs） 实验结果：3 nM-3 μM无毒，而30 μM处理在24小时（hrs）内减少（小时））内存存活率提高约 40%。 细胞毒性实验 (MTT)：将 H295R 细胞接种于 96 孔板，在有或无外源性胆固醇（胆固醇-甲基-β-环糊精复合物）存在下用 Nevanimibe 处理 24 小时。加入 MTT（终浓度 0.5 mg/mL）孵育 2 小时。用 DMSO 提取甲臜染料，在 570 nm 处读取吸光度 [1]。 结晶紫染色：细胞处理同上，用 4% 多聚甲醛固定，用含 10% 乙醇的 0.4% 结晶紫染色，用 1% SDS 溶解后，在 570 nm 处读取吸光度 [1]。 Caspase-3/7 实验：细胞处理 5 小时后，使用基于发光的试剂盒测量 caspase-3/7 活性。加入检测试剂后，用发光检测仪测量发光值 [1]。 TUNEL 染色：细胞在腔室玻片上处理 16 小时，使用荧光 TUNEL 系统进行染色。细胞用 DAPI 复染，并采集图像 [1]。 线粒体膜电位测量：细胞处理 5 小时后，加入 TMRE（终浓度 2 μM）孵育 15 分钟。在酶标仪上测量活细胞的 TMRE 荧光 [1]。 游离和酯化胆固醇测量：细胞处理 5 小时后，用己烷/异丙醇（3:2）提取脂质，使用荧光测定法测量游离和总胆固醇。酯化胆固醇通过总胆固醇减去游离胆固醇计算 [1]。 定量 RT-PCR：提取 RNA，逆转录，使用 SYBR Green PCR 定量 CHOP mRNA 表达，并归一化至 GAPDH。使用跨剪接位点的引物通过 PCR 检测 XBP-1 剪接 [1]。 Western blotting：使用抗 PERK 抗体通过免疫印迹检测 PERK 磷酸化。活化的 PERK 通过迁移率上移来识别 [1]。 ACAT1 敲低：使用靶向 SOAT1（人 ACAT1）的慢病毒 shRNA 转导 HAC15 细胞。用嘌呤霉素筛选稳定敲低的细胞，并通过 qPCR 确认 ACAT1 表达（降低 80%）[1]。 |
| 动物实验 |
犬类毒理学和药效学研究：三只雄性比格犬（体重约 10-12 公斤）每日口服一次奈凡尼米贝，剂量为 3 毫克/公斤/天，持续 7 天，随后剂量增加至 30 毫克/公斤/天，再持续 7 天。该化合物配制于 0.5% 羟丙基甲基纤维素中，给药体积为 5 毫升/公斤。在第-3、1、3、7、8、10和14天，分别于ACTH刺激（5 μg/kg，静脉注射）前和刺激后1小时采集血样，用于血清皮质醇和类固醇分析。第14天，处死动物，并采集肾上腺组织进行组织学检查（H&E染色和TUNEL染色）以及游离胆固醇和酯化胆固醇分析[1]。
犬组织分布研究：三只雌性比格犬（约19月龄，7-10 kg）每日口服一次奈凡尼米贝，剂量为3 mg/kg/天，连续7天，溶于0.5%羟丙甲纤维素溶液（5 mL/kg）。最后一天，于给药后4小时采集血样，随后处死动物。收集组织（肾上腺、肾脏、肝脏、骨骼肌、皮下脂肪、卵巢和脑脊液）以通过 LC-MS/MS 测定 ATR-101 含量 [1]。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Nevanimibe 正在临床试验 NCT03053271（ATR-101 治疗内源性库欣综合征的研究）中进行研究。
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| 分子式 |
C28H41N3O
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|---|---|
| 分子量 |
435.64464
|
| 精确质量 |
435.325
|
| 元素分析 |
C, 76.92; H, 9.32; N, 9.97; O, 3.79
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| CAS号 |
133825-80-6
|
| 相关CAS号 |
Nevanimibe hydrochloride;133825-81-7
|
| PubChem CID |
131679
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| 外观&性状 |
Typically exists as White to off-white solid at room temperature
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| 密度 |
1.062g/cm3
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| 沸点 |
528.1ºC at 760mmHg
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| 闪点 |
273.2ºC
|
| 蒸汽压 |
3.05E-11mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.58
|
| LogP |
6.905
|
| tPSA |
47.86
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
2
|
| 可旋转键数目(RBC) |
7
|
| 重原子数目 |
31
|
| 分子复杂度/Complexity |
543
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
O=C(NCC1(C2=CC=C(N(C)C)C=C2)CCCC1)NC3=C(C(C)C)C=CC=C3C(C)C
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| InChi Key |
PKKNCEXEVUFFFI-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C27H39N3O/c1-19(2)23-10-9-11-24(20(3)4)25(23)29-26(31)28-18-27(16-7-8-17-27)21-12-14-22(15-13-21)30(5)6/h9-15,19-20H,7-8,16-18H2,1-6H3,(H2,28,29,31)
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| 化学名 |
1-[[1-[4-(dimethylamino)phenyl]cyclopentyl]methyl]-3-[2,6-di(propan-2-yl)phenyl]urea
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| 别名 |
Nevanimibe; 133825-80-6; ATR-101 free base; PD-132301; nevanimiba;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 25 mg/mL (59.3 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2955 mL | 11.4774 mL | 22.9547 mL | |
| 5 mM | 0.4591 mL | 2.2955 mL | 4.5909 mL | |
| 10 mM | 0.2295 mL | 1.1477 mL | 2.2955 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
匹伐加宾
磷酸氢化可的松
BAY-784
Gly-PEG3-endo-BCN
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