| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
Anticancer
Wnt/beta‑catenin signaling pathway, microsomal prostaglandin E synthase‑1 (mPGES‑1), and potentially other targets. The compound is a structural analog of celecoxib but does not inhibit COX‑2. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
塞来昔布和2,5-二甲基塞来昔布（DM-塞来昔布）抑制人结肠癌细胞系HCT-116的增殖并诱导其凋亡。[1]
首先，我们研究了塞来昔布和DM-塞来昔布对表达野生型APC和β-catenin突变体的人结肠癌细胞系HCT-116增殖和凋亡的影响。两种化合物均以剂量依赖的方式抑制HCT-116细胞的增殖（图1a）。正如我们之前报道的，塞来昔布可诱导细胞凋亡，这通过caspase-3活性测定来评估。如图1(b)所示，DM-塞来昔布也能显著提高caspase-3活性。 塞来昔布和DM-塞来昔布加速HCT-116细胞中TCF7L2的降解[1] 我们之前报道过，塞来昔布可诱导HCT-116细胞中Wnt/β-catenin信号通路的关键转录因子TCF7L2的降解。如图2(a,b)所示，塞来昔布和DM-塞来昔布均以剂量和时间依赖的方式抑制TCF7L2的表达。由于50 μM DM-塞来昔布的效果与100 μM塞来昔布几乎相当，因此我们在后续实验中主要使用了这两个浓度。接下来，我们研究了蛋白酶体抑制剂MG132对塞来昔布或DM-塞来昔布诱导的TCF7L2减少的影响。细胞用 10 μM MG132 处理 1 小时，或不处理，然后在有或无 100 μM 塞来昔布或 50 μM DM-塞来昔布的条件下孵育 6 小时。如图 2(c) 所示，MG132 预处理显著减弱了塞来昔布和 DM-塞来昔布的作用，表明这两种化合物均加速了 TCF7L2 的蛋白酶体依赖性降解。 塞来昔布和 DM-塞来昔布抑制 HCT-116 细胞中 TCF 依赖性转录[1] 由于塞来昔布和 DM-塞来昔布诱导 HCT-116 细胞中 TCF7L2 降解，我们使用 TOPflash 检测法检测了塞来昔布和 DM-塞来昔布对 TCF 依赖性转录活性的影响。塞来昔布强烈抑制了TOPflash活性，而对FOPflash（阴性对照）活性无影响，这与我们之前的研究结果一致。2,5-二甲基塞来昔布也表现出类似的反应（图3a）。这些结果表明，塞来昔布及其衍生物DM-塞来昔布均通过TCF7L2降解抑制Wnt/β-catenin信号通路靶基因的转录活性。 塞来昔布和DM-塞来昔布对DLD-1细胞的影响[1] 接下来，我们检测了塞来昔布和DM-塞来昔布是否能够抑制表达野生型β-catenin和APC突变体的DLD-1细胞的增殖。两种化合物均以剂量依赖的方式显著抑制了细胞增殖（图4a），与在HCT-116细胞中观察到的结果相似。此外，与它们对 HCT-116 细胞的作用类似，这两种化合物均显著降低了 DLD-1 细胞中 TCF7L2、细胞周期蛋白 D1 和 survivin 的表达水平（图 4b）。 在无细胞实验中，2,5-二甲基塞来昔布不抑制COX-2（IC50 > 100 uM）。它能抑制HeLa细胞中mPGES-1的活性，IC50为15.6 uM（通过PGE2生成量测定）。它抑制Wnt/β-catenin信号通路，导致细胞增殖相关靶基因（如cyclin D1和c-Myc）的转录减少。Wnt抑制的确切IC50值未提供。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
塞来昔布和2,5-二甲基塞来昔布（DM-塞来昔布）对Mutyh–/–小鼠氧化应激诱导癌症的影响[1]
我们随后进行了体内实验。首先，我们检测了口服给药后，塞来昔布和DM-塞来昔布的血浆浓度是否达到足以对肿瘤细胞产生抗增殖作用的水平。我们使用高效液相色谱（HPLC）系统测定了野生型C57BL/6J小鼠体内的药物浓度。塞来昔布的浓度在给药后2小时达到最大值（45.3 ± 6.3 μg/mL；n = 3）；DM-塞来昔布的浓度更快达到最大值（110.7 ± 14.3 μg/mL；n = 3），在给药后1小时内即可达到（图5）。由于体外抗增殖试验（图 1a、4a）计算得到的塞来昔布和 DM-塞来昔布的 EC50 值分别约为 15–19 μg/mL 和 12–16 μg/mL，我们推测这些化合物的血浆浓度可能足以在体内诱导抗增殖作用。[1] 为了研究塞来昔布和 2,5-二甲基塞来昔布 (DM-塞来昔布) 的体内作用，我们使用了 MUTYH 缺陷小鼠 (Mutyh-/-)。MUTYH 是一种能够阻止氧化应激诱导的 DNA 损伤形成的酶。MUTYH 缺陷与人类结直肠腺瘤和癌的发生有关。我们此前报道过，与正常小鼠相比，Mutyh −/− 小鼠小肠中氧化应激诱导癌的发生率显著增加29, 35, 36。用强氧化剂 0.2% KBrO3 处理 12 周后，Mutyh −/− 小鼠体内出现了大量肠道癌。为了评估这两种化合物对这些癌的影响，我们给 Mutyh −/− 小鼠口服塞来昔布、DM-塞来昔布或溶剂对照，持续 4 周。塞来昔布或 DM-塞来昔布治疗显著减少了肠道癌的数量（图 6），对于直径 >1.0 mm 的大癌，这种效果更为显著（图 6b）。 [1] 我们还研究了长期使用塞来昔布和2,5-二甲基塞来昔布（DM-塞来昔布）是否会对动物的总体状况产生不良影响。为此，我们测量了小鼠的体重和外周血细胞计数，并观察了它们的总体外观和活动情况。塞来昔布或DM-塞来昔布治疗均未影响小鼠的外观、活动、白细胞计数、血小板计数或体重。塞来昔布或DM-塞来昔布治疗后，红细胞计数和血红蛋白浓度有升高的趋势，但这些变化不具有统计学意义（表1）。 体内研究表明，2,5-二甲基塞来昔布在临床前模型中能够抑制肿瘤生长。作为一种抗衰老药物，它可能对衰老和年龄相关疾病具有有益作用。目前的研究主要集中于探索塞来昔布类似物不依赖于COX-2的抗肿瘤机制，特别是Wnt/β-catenin信号通路抑制的作用。 |
| 酶活实验 |
塞来昔布和2,5-二甲基塞来昔布（DM-塞来昔布）血浆浓度的测定[1]
在指定时间点通过心脏穿刺采集小鼠血液样本，并在500g下离心15分钟分离血浆。采用反相高效液相色谱法（HPLC）测定塞来昔布和DM-塞来昔布的血浆浓度，方法如前所述34，并稍作修改。简而言之，将含有500 ng咖啡因作为内标的血浆样本（200 μL）与200 μL氯仿混合。混合后，将溶液在13000g下离心5分钟，然后分离有机相并蒸发。将所得残余物溶解于80 μL流动相（甲醇：水=72:28，v/v）中，然后取50 μL注入色谱柱进行分离。运行时间为10分钟，流速为1.0 mL/min。使用工作波长为254 nm的紫外检测器对样品进行测量。通过绘制塞来昔布或DM-塞来昔布的峰面积与内标峰面积的比值来制备校准曲线。 一种评估 mPGES-1 抑制的通用无细胞方案：采用 PGE2 生成测定法。将表达 mPGES-1 的 HeLa 细胞微粒体与 PGH2（mPGES-1 的底物）在不同浓度的 2,5-二甲基塞来昔布（0.1-100 uM）存在下孵育。终止反应后，使用 ELISA 试剂盒测定生成的 PGE2 量。计算 mPGES-1 抑制的 IC50 值。对于 Wnt 抑制，在无细胞裂解液中使用 TCF/LEF 报告基因进行荧光素酶报告基因检测。 |
| 细胞实验 |
细胞增殖实验[1]
将HCT-116或DLD-1细胞接种于24孔板（5 × 10⁴ 个细胞/孔），并用不同浓度的塞来昔布或2,5-二甲基塞来昔布（DM-塞来昔布）处理指定时间。加入胰蛋白酶/EDTA消化收集细胞，并使用自动细胞计数仪（TC10；Bio-Rad，东京，日本）进行计数。 Caspase-3活性测定[1] 使用半胱氨酸蛋白酶蛋白32/caspase-3比色法蛋白酶测定试剂盒，按照制造商说明测定Caspase-3活性。 Western blot分析[1] 将样品进行12% SDS-PAGE电泳分离，然后使用半干转印系统（12 V，1 h）将蛋白质转移至PVDF膜上。与一抗和二抗孵育后，检测目标蛋白，并使用显色剂进行显色。使用 ImageJ 软件进行密度分析。 荧光素酶报告基因检测[1] 使用 TOPFlash（TCF 报告质粒）和 FOPFlash（TOPflash 阴性对照）。使用 Lipofectamine Plus 试剂将荧光素酶报告质粒和 pRL-SV40（Renilla 荧光素酶表达质粒，作为转染效率对照）共转染至细胞。24 小时后，用塞来昔布或 DM-塞来昔布刺激细胞指定时间。使用发光仪测定荧光素酶活性，并以 Renilla 荧光素酶活性进行标准化。 2,5-二甲基塞来昔布的一般细胞实验方案：将HeLa细胞（用于mPGES-1）或Wnt依赖性癌细胞系（例如HCT116、SW480）接种于96孔板中。用2,5-二甲基塞来昔布的系列稀释液（1、5、10、25、50、100 uM）处理细胞48-72小时。采用MTT法检测细胞活力。采用ELISA法检测培养上清液中的PGE2水平。对于Wnt抑制实验，将细胞转染TCF/LEF荧光素酶报告基因（SuperTOPFlash），并用该化合物处理，然后检测荧光素酶活性。采用qRT-PCR法检测Wnt靶基因（cyclin D1、c-Myc）的表达。 |
| 动物实验 |
肠道肿瘤模型：采用先前报道的方法29, 35, 36在Mutyh-/-小鼠中诱导肠道肿瘤（腺瘤和癌）。简而言之，将浓度为2 g/L的KBrO3水溶液灌胃给4周龄小鼠，持续12周。16周龄时，将小鼠随机分为五组（雄性：雌性=1:1）。试验组小鼠每周5天口服给予悬浮于0.25%甲基纤维素溶液中的指定剂量的塞来昔布或DM-塞来昔布，持续4周。对照组小鼠仅给予溶剂（甲基纤维素）。每周监测小鼠体重。20周龄时，处死所有小鼠，采集血液和肠道样本。使用Celltac-α MEK-6358（日本光电，东京）测定血细胞计数。将肠组织固定于4%甲醛溶液中，并在显微镜下仔细观察肿瘤。使用ImageJ软件分析肿瘤图像。对于免疫组织化学分析，从甲醛固定的肠组织中切除直径为1.0–2.0 mm、距幽门远端3.0–5.0 cm的肿瘤。将样本包埋于石蜡中，并进行免疫组织化学染色。简而言之，将切片与抗TCF7L2抗体（1:1000稀释）、抗cyclin D1抗体（1:100稀释）或抗survivin抗体（1:100稀释）于4℃孵育过夜，随后与二抗（Histofine；Nichirei，东京，日本）孵育1小时。最后，使用Biozero显微镜（Keyence，大阪，日本）分析切片。对于蛋白质印迹分析，切除后立即将黏膜条带（距幽门底部2厘米处）在Laemmli氏样品缓冲液中匀浆。取等量的蛋白质进行电泳和蛋白质印迹分析。
2,5-二甲基塞来昔布的一般动物实验方案：将Wnt依赖性癌细胞（例如HCT116结肠癌细胞）皮下植入雌性裸鼠体内。当肿瘤体积达到约150 mm³时，将小鼠随机分组（每组n=8）。将2,5-二甲基塞来昔布配制成合适的溶剂（例如0.5%甲基纤维素或10% DMSO、40% PEG300、5% Tween-80、45%生理盐水），并以25、50和100 mg/kg的剂量，每日一次灌胃给药，持续21天。每周测量两次肿瘤体积。研究结束时，收集肿瘤组织进行免疫组化（β-catenin、cyclin D1、Ki-67）、蛋白质印迹（cyclin D1、c-Myc）和TUNEL染色。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
2,5-二甲基塞来昔布的通用药代动力学方案：雄性Sprague-Dawley大鼠分别经口灌胃（PO，10 mg/kg）和静脉注射（IV，2 mg/kg）给药。24小时内采集血样。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）定量血浆药物浓度。计算药代动力学参数（Cmax、Tmax、AUC、t1/2、清除率、分布容积和口服生物利用度）。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
2,5-二甲基塞来昔布的一般毒性方案：对大鼠进行为期 28 天的重复给药口服毒性研究，剂量分别为 10、30 和 100 mg/kg/天。评估参数包括临床症状、体重、食物消耗量、血液学（CBC）、血清化学（ALT、AST、BUN、肌酐）以及主要器官（胃、肠、肝、肾）的组织病理学。
|
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
我们此前报道过，选择性COX-2抑制剂塞来昔布可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路显著抑制人结肠癌细胞的增殖。2,5-二甲基塞来昔布（DM-塞来昔布）是塞来昔布的类似物，不抑制COX-2，也被报道具有抗肿瘤活性。本研究旨在阐明DM-塞来昔布是否抑制结肠癌生长及其作用机制。首先，我们比较了DM-塞来昔布和塞来昔布对人结肠癌细胞系HCT-116和DLD-1的影响。结果表明，2,5-二甲基塞来昔布抑制细胞增殖和T细胞因子7样蛋白2（TCF7-L2）表达的强度与塞来昔布几乎相同。 2,5-二甲基塞来昔布也能抑制T细胞因子依赖性转录活性，并抑制Wnt/β-catenin靶基因产物cyclin D1和survivin的表达。随后，我们利用Mutyh-/-小鼠模型（该模型中氧化应激可诱导多发性结直肠癌）比较了塞来昔布和DM-塞来昔布的体内作用。口服塞来昔布和DM-塞来昔布后，血清浓度升高至足以抑制癌细胞增殖的水平。重复使用塞来昔布和DM-塞来昔布可显著减少肿瘤的数量和大小，且未观察到毒性。这些结果表明，塞来昔布衍生物抗癌作用的核心机制是抑制Wnt/β-catenin信号通路，而非抑制COX-2，并且DM-塞来昔布可能比塞来昔布更适合作为新型抗癌药物的先导化合物。 [1]
我们的结果表明，塞来昔布和DM-塞来昔布均能抑制HCT-116细胞的增殖并诱导其凋亡，且该作用与它们对COX-2的影响无关。因此，体外和体内实验结果清楚地表明，COX-2抑制并非塞来昔布发挥抗肿瘤作用的必要条件，塞来昔布和DM-塞来昔布即使在Wnt/β-catenin信号通路被激活的情况下也能抑制肿瘤生长，因为它们直接抑制了TCF7L2介导的转录。虽然体外实验显示DM-塞来昔布的效力略高于塞来昔布，而体内实验显示塞来昔布的效力略高于DM-塞来昔布，但在相同浓度下，两种药物的作用并无显著差异，除了体外对细胞周期蛋白D1表达的影响（图3b）。因此，塞来昔布和DM-塞来昔布之间的结构差异可能不会显著影响这些药物通过降解TCF7L2来抑制Wnt/β-catenin信号通路的能力。需要进一步研究来阐明这些药物诱导TCF7L2降解的机制。[1] 2,5-二甲基塞来昔布的分子式为C18H16F3N3O2S，分子量为395.4 g/mol。该化合物为白色固体，纯度>99%（HPLC）。它也称为2,5-二甲基塞来昔布或4-[5-(2,5-二甲基苯基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]苯磺酰胺。它可溶于DMSO、甲醇或二氯甲烷。 |
| 分子式 |
C18H16F3N3O2S
|
|---|---|
| 分子量 |
395.40
|
| 精确质量 |
395.091
|
| 元素分析 |
C, 54.68; H, 4.08; F, 14.41; N, 10.63; O, 8.09; S, 8.11
|
| CAS号 |
457639-26-8
|
| 相关CAS号 |
169590-42-5
|
| PubChem CID |
11545682
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
516.7±60.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
266.3±32.9 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.3 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.600
|
| LogP |
4.67
|
| tPSA |
86.36
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
27
|
| 分子复杂度/Complexity |
614
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
CC1=CC(=C(C)C=C1)C2=CC(=NN2C3=CC=C(C=C3)S(=O)(=O)N)C(F)(F)F
|
| InChi Key |
NTFOSUUWGCDXEF-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C18H16F3N3O2S/c1-11-3-4-12(2)15(9-11)16-10-17(18(19,20)21)23-24(16)13-5-7-14(8-6-13)27(22,25)26/h3-10H,1-2H3,(H2,22,25,26)
|
| 化学名 |
4-[5-(2,5-dimethylphenyl)-3-(trifluoromethyl)pyrazol-1-yl]benzenesulfonamide
|
| 别名 |
457639-26-8; 2,5-Dimethyl Celecoxib; 2,5-dimethylcelecoxib; 2,5-dimethyl-celecoxib; 4-(5-(2,5-Dimethylphenyl)-3-(trifluoromethyl)-1H-pyrazol-1-yl)benzenesulfonamide; Dimethyl Celecoxib; 2,5-DimethylCelecoxib-d4; 4-[5-(2,5-dimethylphenyl)-3-(trifluoromethyl)pyrazol-1-yl]benzenesulfonamide;
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.5291 mL | 12.6454 mL | 25.2908 mL | |
| 5 mM | 0.5058 mL | 2.5291 mL | 5.0582 mL | |
| 10 mM | 0.2529 mL | 1.2645 mL | 2.5291 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
