SIRT1 (EC50 = 0.10 μM); SIRT1 (EC1.5 = 0.16 μM5); SIRT2 (EC1.5 = 37 μM)
Sirtuin 1 (SIRT1), a NAD⁺-dependent deacetylase. For SRT1720 HCL (CAY-10559), the EC50 value for activating SIRT1 deacetylase activity (using a fluorescent peptide substrate) was 0.16 μM [1]
- SIRT1 (no additional Ki/EC50 values provided; activation of SIRT1 in multiple myeloma cells was confirmed via reduced p53 acetylation) [2]
- SIRT1 (no new potency data; focus on SIRT1’s role in emphysema via FOXO3 signaling) [4]
- SIRT1 (no new potency data; focus on SIRT1’s regulation of HNF1α/FXR pathway in liver injury) [5]

SRT1720 是 SIRT1 的选择性激活剂，EC50 为 0.16 μM，比 SIRT2 和 SIRT3 低 230 倍以上。
在这里，研究人员检测了一种新型口服药物SRT1720的抗多发性骨髓瘤（MM）活性，该药物靶向SIRT1。SRT1720可抑制MM细胞的生长，诱导对常规和硼替佐米治疗有抗性的MM细胞凋亡，但不显著影响正常细胞的活力。机制研究表明，SRT1720的抗mm活性与：1)激活caspase-8、caspase-9、caspase-3、聚（ADP）核糖聚合酶有关；2)活性氧增加；2)诱导磷酸化的共济失调毛细血管扩张突变/检查点激酶2信号传导；3)血管内皮生长因子诱导的MM细胞迁移和相关血管生成减少；4)抑制核因子-κB。阻断ATM可减弱srt1720诱导的MM细胞死亡。[2]

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为了确定SRT1460和SRT1720是否与白藜芦醇在相同的分子位点结合并激活酶，我们进行了等距图分析。研究了白藜芦醇对SRT1720和SRT1720对SRT1460两种化合物的浓度矩阵，以确定这两种化合物的组合是拮抗、相加还是协同作用。在这两种情况下，化合物组合产生的可加性与假设一致，即sirt1 -底物复合物上存在单一的变构位点，结构上不同的化合物可以与之结合（图2c）。［１］

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在原代小鼠肝细胞中，SRT1720 HCL（1 μM、10 μM）处理24小时可剂量依赖性降低葡萄糖生成（1 μM时降低30%，10 μM时降低50%），通过qRT-PCR检测显示糖异生酶PEPCK（降低40%）和G6Pase（降低50%）的mRNA表达受抑制[1]
- 在3T3-L1脂肪细胞中，SRT1720 HCL（10 μM）可增强胰岛素刺激的葡萄糖摄取（较溶媒组增加2.5倍），Western blot显示AKT磷酸化水平（Ser473位点）升高[1]
- 在多发性骨髓瘤（MM）细胞系（MM.1S、U266）中，SRT1720 HCL（5–20 μM）处理48小时可剂量依赖性抑制细胞增殖（MM.1S的IC50=8.2 μM，U266的IC50=10.5 μM）。Annexin V-FITC/PI染色显示，10 μM处理48小时可使凋亡细胞比例增加35%（MM.1S）和28%（U266）；Western blot显示切割型PARP、切割型caspase-3水平升高，SIRT1底物乙酰化p53水平降低[2]
- 在原代小鼠肺成纤维细胞中，SRT1720 HCL（5 μM）处理可降低弹性蛋白酶诱导的衰老相关β-半乳糖苷酶活性（降低50%），通过qRT-PCR检测显示FOXO3 mRNA表达增加1.8倍[4]
- 在原代小鼠肝细胞中，SRT1720 HCL（10 μM）处理可抑制雌激素诱导的促炎细胞因子TNF-α（降低60%）和IL-6（降低55%）的mRNA表达，通过qRT-PCR检测显示HNF1α（增加1.5倍）和FXR（增加1.7倍）的mRNA表达上调[5]

在 DIO 小鼠中，SRT1720 模拟了热量限制后观察到的几种效果，包括改善胰岛素敏感性、标准化葡萄糖和胰岛素水平以及增加线粒体容量。此外，在饮食诱导的肥胖和遗传性肥胖小鼠中，SRT1720 可以改善胰岛素敏感性、降低血浆葡萄糖并增加线粒体容量。因此，SRT1720是一种有前途的新型治疗剂，用于治疗2型糖尿病等衰老疾病。与糖耐量改善一致，SRT1720治疗的fa/fa大鼠中维持血糖正常所需的葡萄糖输注率增加了约35%，总葡萄糖处理率增加了约20%。 SRT1720 还可以预防多发性骨髓瘤肿瘤的生长。 SRT1720 增加硼替佐米或地塞米松的细胞毒活性。

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通过基因过表达和选择性药理激活剂SRT1720激活SIRT1，可以减轻应激诱导的细胞过早衰老，并保护小鼠免受香烟烟雾和弹性蛋白酶诱导的肺气肿。气道上皮Sirt1消融，但髓细胞不消融，气道扩大加重，肺功能受损，运动耐受性降低。这些影响是由于SIRT1能够使FOXO3转录因子去乙酰化，因为FOXO3缺乏降低了SRT1720对细胞衰老和肺气肿变化的保护作用。[4]

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然而，SIRT1是否是治疗胆汁淤积症的合适治疗靶点尚不清楚。在本研究中，检测了SRT1720 （SIRT1的特异性激活剂）对17α-炔雌醇（EE）诱导的小鼠胆汁淤积的保护作用。数据表明，SRT1720显著阻止ee诱导的血清总胆汁酸（TBA）、总胆红素（TBIL）、γ-谷氨酰转肽酶（γ-GGT）和碱性磷酸酶（ALP）水平的变化。血红素和伊红（H&E）染色显示，SRT1720还能减轻ee诱导的肝脏病理损伤。SRT1720通过HNF1α/FXR信号通路，上调肝外排转运蛋白（Bsep和Mrp2）和肝摄取转运蛋白（Ntcp和Oatp1b2）的表达，对ee诱导的肝损伤有保护作用。SRT1720显著抑制EE诱导的TNF-α和IL-6水平。这些结果表明，SRT1720对ee诱导的小鼠胆汁淤积性肝损伤具有剂量依赖性的保护作用，其机制可能与激活HNF1α/FXR信号通路和抗炎机制有关。[5]

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在db/db小鼠（2型糖尿病模型）中，口服SRT1720 HCL（10 mg/kg、30 mg/kg，每日一次，连续12周）可剂量依赖性降低空腹血糖（10 mg/kg时降低25%，30 mg/kg时降低40%）并改善糖耐量（30 mg/kg时AUC降低30%）。血清胰岛素水平降低35%（30 mg/kg），Western blot显示肝脏PEPCK/G6Pase蛋白水平降低[1]
- 在携带MM.1S异种移植物的裸鼠中，腹腔注射SRT1720 HCL（25 mg/kg，每周两次，连续4周）较溶媒组抑制肿瘤生长（肿瘤体积减少50%，肿瘤重量减少45%）。肿瘤免疫组化显示增殖标志物Ki-67和乙酰化p53水平降低，切割型caspase-3水平升高[2]
- 在弹性蛋白酶诱导的小鼠肺气肿模型中，口服SRT1720 HCL（30 mg/kg，每日一次，连续21天）可减少肺泡破坏（平均线性截距降低35%）和肺衰老细胞（β-半乳糖苷酶阳性细胞减少40%）。肺组织Western blot显示SIRT1和FOXO3蛋白水平升高[4]
- 在雌激素诱导的胆汁淤积性肝损伤小鼠中，口服SRT1720 HCL（10 mg/kg、30 mg/kg，每日一次，连续7天）可剂量依赖性降低血清ALT（30 mg/kg时从250 U/L降至80 U/L）和AST（30 mg/kg时从300 U/L降至100 U/L）。肝组织切片显示坏死减轻，qRT-PCR显示TNF-α/IL-6下调、HNF1α/FXR上调[5]

SIRT1荧光偏振测定和HTS [1]
在SIRT1 FP检测中，使用从p53序列中提取的20个氨基酸肽(AcGlu-Glu-Lys（生物素）- gly - gln - ser - thr - ser - ser - his - ser -Lys（Ac)- nle - ser - thr - glu - gly -Lys(MR121或Tamra)- gluu - gluu - nh2）来监测SIRT1的活性。该肽n端与生物素连接，c端用荧光标记修饰。监测酶活性的反应是一个偶联酶试验，第一个反应是由SIRT1催化的去乙酰化反应，第二个反应是由胰蛋白酶在新暴露的赖氨酸残基上切割。停止反应，加入链霉亲和素，以强调底物和产物之间的质量差异。总共筛选了29万种化合物，确认了127种。FP检测的灵敏度允许鉴定出SIRT1低水平激活（20 μM下激活≥17%）的化合物，产生代表不同结构类别的多种激活剂。荧光极化反应条件为：0.5 μM肽底物，150 μM βNAD+, 0-10 nM SIRT1, 25 mM Tris-acetate pH 8, 137 mM Na-Ac, 2.7 mM K-Ac, 1 mM Mg-Ac, 0.05% Tween-20, 0.1% Pluronic F127, 10 mM CaCl2, 5 mM DTT, 0.025% BSA， 0.15 mM烟酰胺。37℃孵育，加入烟酰胺停止反应，加入胰蛋白酶裂解去乙酰化底物。在1 μM链亲和素存在下，37℃孵育反应。在激发（650 nm）和发射（680 nm）波长处测定荧光偏振。

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作用机制研究[1]
测试化合物对乙酰化肽底物SIRT1酶Km的影响采用上述SIRT1质谱法检测。采用无细胞质谱法测定了9种化合物浓度（100、33、11、3.7、1.2、0.41、0.14、0.046和0.015 μM）和DMSO载体单独存在下肽底物SIRT1酶的Km。为了确定Km，对每种化合物浓度和对照进行了12种乙酰化肽底物浓度（50、25、12.5、6.25、3.12、1.56、0.78、0.39、0.19、0.098、0.049和0.024 μM）下的线性去乙酰化速率测定。SIRT1酶、2 mM NAD+和0-50 μM乙酰化肽底物与0-100 μM化合物在25°C下孵育。在0、3、6、9、12、15、20和25分钟，用10%甲酸和50 mM烟酰胺停止反应，并通过质谱测定底物到产物的转化。

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等温滴定量热法（ITC） [1]
人SIRT1-E5c蛋白(41 μM；ITC使用质谱肽底物（1.0 mM）和SRT1460 （0.84 mM）原液。缓冲条件为50 mM Tris-HCl （pH 8.0）、137 mM NaCl、2.7 mM KCl、1 mM MgCl2、2 mM TCEP和5%甘油。滴定在26℃的VP-ITC上进行。选择SRT1460进行这些研究是因为它在缓冲液中可溶到实验所需的毫摩尔浓度。

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等温图研究/Isobologram studies[1]
白藜芦醇与SRT1720和SRT1720与SRT1460联合使用的效果使用上述SIRT1质谱法测定。建立了两种化合物的浓度基质，并对SIRT1酶进行了检测。在基质中存在的每种组合下，测定乙酰化肽底物转化为去乙酰化肽产物的百分比。所得的等线图用于评价组合的效果。在分析中，产生相同效应水平的剂量组合的笛卡尔坐标图是等线图的基础。如果两种化合物具有可变效价，则选择恒定的相对效价(R) -即达到相同倍活性所需的化合物量（例如白藜芦醇vs SRT1720 EC1.25和SRT1720 vs SRT1460 EC2.5） -用于X和Y截距进行等温图分析。对应于各自EC值的两种化合物的浓度用作X和Y轴上的截距。利用这两个截距，在两点之间画出一条叫做可加性线的理论线。将两种化合物作为剂量对混合在一个矩阵中，产生相同的效应水平（EC值），通过对数滴定得到的实验数据绘制在等温线图上。通过对两种药物剂量组合的可加性曲线和可加性曲线进行统计比较，可以看出一种效应是否具有可加性。落在可加性线以下和以上的点进行回归分析。高于可加性线的实验数据被解释为拮抗，低于可加性线的实验数据被解释为协同，落在可加性线上的实验数据被认为是可加性。

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p53去乙酰化试验[1]
将人骨肉瘤细胞（U-2 OS）以每孔1.5 X 104个细胞的比例在96孔板中进行镀膜。24小时后，将测试化合物和对照（均为100% DMSO）添加到细胞板中。为了证明该检测结果对sirt1的依赖性，重复板组与测试化合物和sirt1特异性小分子抑制剂（6-氯-2,3,4,9-四氢-1- h -咔唑-1-carboxamide）共同处理。化合物添加后，每孔中加入阿霉素（终浓度1 μg/ml）诱导p53表达和乙酰化。p53诱导后，将细胞固定，然后用PBS-0.1% Triton-X-100渗透。在PBS-0.1% TWEEN 20（阻断溶液）中加入5%牛血清白蛋白阻断非特异性蛋白结合。一抗抗p53-acetyl-lysine-382（兔多克隆）和抗β - tubulin（小鼠单克隆）分别在Block Solution中稀释1:400和1:1000，加入孔中在40℃孵育过夜，然后在PBS-0.1% TWEEN 20 （Wash Buffer）中洗涤。二抗IR800CW山羊抗兔IgG和Alexa-Fluor 680山羊抗小鼠IgG在Block Solution中稀释，加入孔中室温孵育1小时。在Wash Buffer中再次洗涤5次。然后用Li-Cor奥德赛红外扫描仪扫描底片。使用制造商的软件提取数据。Ac-Lys382-p53和β -微管蛋白的信号均使用仅含二抗孵育的孔进行背景校正。然后将每个孔的ac - lys382信号归一化为相应的β -微管蛋白信号，以校正细胞数量的差异。然后将这些值归一化到载体中，以生成每口井的乙酰化p53 %值。

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荧光法SIRT1活性实验：将重组人SIRT1蛋白与荧光标记的乙酰化p53肽底物（Ac-Lys382）及NAD⁺（100 μM）共同孵育于实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 8.0、1 mM DTT）中。加入系列稀释的SRT1720 HCL（0.01 μM–10 μM），37°C孵育60分钟。加入脱乙酰化特异性一抗和荧光二抗，检测荧光强度，通过四参数逻辑回归计算SIRT1激活的EC50[1]

免疫组织化学（IHC）原位检测细胞凋亡[2]
从小鼠（对照）和SRT1720 -处理小鼠中切除肿瘤并保存在10%福尔马林中。如前所述，肿瘤中的凋亡细胞通过免疫组化染色检测caspase-3激活（Chauhan等，2010）。

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体外迁移和毛细血管样管结构形成测定[2]
如前所述，Transwell插入测定法用于测量迁移（Podar等，2001）。通过Matrigel毛细管样管结构形成试验评估体外血管生成（Chauhan et al, 2010）。为了进行内皮管形成实验，从克隆公司获得人血管内皮细胞（HUVECs），并将其保存在含有5%胎牛血清的内皮细胞生长培养基2 （EGM2 MV singlequotes）中。3代后，用台盼蓝排斥法测定HUVEC细胞活力，SRT1720处理HUVEC细胞死亡率<5%。

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细胞活力和凋亡测定[2]
采用先前描述的3-（4,5 -二甲基噻唑-2-基）- 2,5 -二苯基溴化四唑（MTT）比色法评估细胞活力（Hideshima等人，2000年）。凋亡测定采用Annexin V-FITC/碘化丙啶（PI）细胞凋亡检测试剂盒，按照制造商的说明进行定量，然后在FACS Calibur上进行分析。

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Western blotting和蛋白定量[2]
采用caspase-3、caspase-7、caspase-8、caspase-9、多聚（ADP）核糖聚合酶（PARP）、Ace-Lys 382 p53、磷酸化-失调性毛细血管扩张突变（pATM）、磷酸化-检查点激酶2 （pCHK2）、磷酸化- i - κ b ser32/36和GAPDH抗体进行免疫印迹分析。然后通过增强化学发光形成印迹。使用AlphaImager EC凝胶记录系统获取蛋白质条带的密度，并使用斑点密度分析工具对条带进行分析。

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肝细胞葡萄糖生成实验：将原代小鼠肝细胞接种于24孔板，用SRT1720 HCL（1 μM、10 μM）或溶媒处理24小时。采用比色试剂盒检测培养基中葡萄糖含量；提取总RNA，通过qRT-PCR定量PEPCK/G6Pase的mRNA表达（以GAPDH归一化）[1]
- 多发性骨髓瘤细胞增殖与凋亡实验：将MM.1S/U266细胞以5×10³个细胞/孔接种于96孔板，用SRT1720 HCL（5–20 μM）处理48小时。通过MTT实验检测细胞活力并计算IC50；通过Annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞术检测凋亡；裂解细胞后通过SDS-PAGE分离蛋白，Western blot检测抗乙酰化p53、抗切割型PARP、抗切割型caspase-3及抗GAPDH抗体[2]
- 肺成纤维细胞衰老实验：用弹性蛋白酶（0.1 U/mL）联合SRT1720 HCL（5 μM）处理原代小鼠肺成纤维细胞72小时。通过衰老相关β-半乳糖苷酶染色检测衰老细胞，通过qRT-PCR检测FOXO3的mRNA表达[4]
- 肝细胞炎症实验：用雌激素（1 μM）联合SRT1720 HCL（10 μM）处理原代小鼠肝细胞24小时。提取总RNA，通过qRT-PCR定量TNF-α、IL-6、HNF1α及FXR的mRNA表达[5]

溶于 20% PEG400/0.5% Tween80/79.5% 去离子水中；200 mg/kg/天；口服给药。Chase-SCID 小鼠（MM.1S 细胞）SRT1720 的药代动力学 [1]
将溶于载体（2% HPMC + 0.2% DOSS）的 SRT1720 通过灌胃法给予 C57BL/6 雄性小鼠（18-22 克；每个剂量组每个时间点 3 只小鼠），剂量见 doi: 10.1038/nature06261 补充信息 www.nature.com/nature 4。所有体内研究中，SRT1720 均以盐酸盐形式给药。小鼠采用二氧化碳窒息法处死，分别于给药后 5、30、120 和 360 分钟采集血液。采集血液后，将血浆送至查尔斯河实验室 (CRL) 进行药物浓度分析。为测定口服生物利用度，将溶于载体（10% 乙醇/40% 聚乙二醇/50% 水）的 SRT1720 以指定剂量经尾静脉注射至 C57BL/6 雄性小鼠（18-22 克；每个剂量组每个时间点 3 只小鼠）。分别于给药后 5、30、120 和 360 分钟采集血液，并按上述方法分析药物浓度。此外，将溶于载体（2% 羟丙甲纤维素 + 0.2% 多西环己醇）的 SRT1720 以 100 mg/kg 的剂量灌胃给予 Sprague-Dawley 雄性大鼠（250 克；每个剂量组 3 只大鼠）。分别于给药后 0.033、0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8 和 24 小时采集血液样本，并分析药物浓度。为测定口服生物利用度，将 SRT1720 以 10 mg/kg 的剂量经尾静脉注射给药。SRT1720 用于静脉注射研究时，其溶于 10% 乙醇/ 40% 聚乙二醇/ 50% 水的混合溶液中。 饮食诱导肥胖模型 [1] 9 周龄 C57BL/6 雄性小鼠喂食高脂饮食（60% 的能量来自脂肪），直至其平均体重达到约 40 g。然后将小鼠分为实验组（每组 6-10 只）。 SRT1460 (100 mg/kg)、SRT1720 (100 mg/kg)、SRT501 (500 mg/kg) 和罗格列酮 (5 mg/kg) 每日一次通过灌胃给药。所用溶剂为 2% HPMC + 0.2% DOSS。每周测量两次小鼠体重。分别在给药后第 2、4、6、8 和 10 周进行餐后血糖测定；治疗 5 周后，对各组所有小鼠进行腹腔葡萄糖耐量试验 (IPGTT)；治疗 10 周后，进行胰岛素耐量试验 (ITT)。柠檬酸合酶活性测定[1]
5 采用Srere和Moyes^29,30描述的方法，在治疗11周后测定骨骼肌（腓肠肌）和白色脂肪组织（附睾）中的柠檬酸合酶（CS）活性。选择每组（DIO Vehicle组和DIO SRT1720组）中空腹血糖水平最接近平均水平的5只小鼠进行分析。

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nob/ob模型[1]
6周龄时接收nob/ob小鼠和一只杂合子ob/+小鼠。在研究开始前至少一周，小鼠喂食高脂饮食（60%的能量来自脂肪），并在整个研究期间保持高脂饮食。经过一周的适应期后，所有小鼠均进行称重并测定血糖。本研究中使用的ob/ob小鼠的平均体重约为40-45克。所有小鼠按体重和血糖水平进行分类，然后分组。动物每天一次通过灌胃给予SRT1720（100 mg/kg）、SRT501（1000 mg/kg）或载体（2% HPMC + 0.2% DOSS）。血糖和胰岛素的测定方法如上所述。

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Zucker fa/fa模型[1]
6周龄雄性肥胖（fa/fa）Zucker（ZF）大鼠在光照（12:12光照：黑暗）和温度可控的条件下单独饲养。 7周龄的动物被随机分配接受SIRT1激活剂（SRT1720）或赋形剂（即2% HPMC + 0.2% DOSS）。药物通过灌胃法每日给药（下午3-5点之间），持续4周，动物可自由摄取食物和水。在开始药物治疗的前一天晚上，动物禁食12小时。第二天早上（第1天），测量血糖浓度，并从尾静脉用肝素化毛细管采集血样。该血样以13,000 rpm离心5分钟，并将血浆储存在-80℃下进行分析。在药物治疗的前3周（即第8、15和22天），重复上述步骤。此外，在第22天下午，从尾静脉采集餐后血糖浓度进行测量。

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人浆细胞瘤异种移植模型[2]
异种移植肿瘤模型的构建方法如前所述（LeBlanc等，2002）。该动物模型在广泛验证新型抗多发性骨髓瘤（MM）疗法硼替佐米和来那度胺方面发挥了极其重要的作用，促成了这些疗法进入临床试验，并获得美国食品药品监督管理局（FDA）批准用于治疗MM。将6.0 × 10⁶个MM.1S细胞悬浮于100 μl无血清RPMI-1640培养基中，皮下接种于Fox Chase-SCID小鼠（每组6只）。 MM 细胞注射后约三周，当肿瘤可测量（~100 mm3）时，小鼠分别口服给予载体（20% PEG400/0.5% Tween80/79.5% 去离子水）或 SRT1720（200 mg/kg），连续四周，每周五天。使用免疫组织化学 (IHC) 原位检测细胞凋亡[2]
切除载体（对照）和 SRT1720 处理组小鼠的肿瘤，并保存在 10% 福尔马林中。肿瘤中的凋亡细胞通过 caspase-3 激活的 IHC 染色进行鉴定，如前所述（Chauhan 等，2010）。

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2 型糖尿病模型（db/db 小鼠）：雄性 db/db 小鼠（8 周龄）随机分为 3 组（每组 n=8）：载体组（0.5% 甲基纤维素）、SRT1720 HCL 10 mg/kg 组和 30 mg/kg 组。药物溶于 0.5% 甲基纤维素中，每日一次灌胃给药，持续 12 周。每周使用血糖仪测量空腹血糖。研究结束时，采用ELISA法测定血清胰岛素水平，并收集肝组织进行Western blot分析[1]
- 多发性骨髓瘤异种移植模型：将2×10⁶个MM.1S细胞皮下植入6周龄雌性裸鼠体内。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为两组（每组n=6）：载体组（PBS）和SRT1720 HCL 25 mg/kg组。药物溶于PBS，每周两次腹腔注射，持续4周。每3天测量一次肿瘤体积（体积=长×宽²/2），并切除肿瘤进行称重和免疫组织化学分析[2]
- 弹性蛋白酶诱导的肺气肿模型：将弹性蛋白酶（0.2 U/只）气管内滴注至8周龄雄性C57BL/6小鼠体内，以诱导肺气肿。小鼠随机分为两组（每组 n=6）：载体组（0.5% 甲基纤维素）和 SRT1720 HCL 30 mg/kg 组。药物每日口服一次，连续给药 21 天。收集肺组织进行组织学分析（平均线性截距）和蛋白质印迹分析 [4]
- 雌激素诱导肝损伤模型：将雌性 C57BL/6 小鼠（8 周龄）皮下植入雌激素缓释片（0.18 mg/片）以诱导胆汁淤积。小鼠随机分为三组（每组 n=6）：载体组、SRT1720 HCL 10 mg/kg 组和 30 mg/kg 组。药物每日口服一次，连续给药 7 天。采用比色法试剂盒测定血清 ALT/AST 水平，并收集肝组织进行组织学分析和 qRT-PCR 分析 [5]

SRT1720 的药代动力学特征（图 3a）适用于小鼠（生物利用度 = 50%，末端半衰期约为 5 小时，曲线下面积 (AUC) = 7,892 ng h⁻¹ ml⁻¹）和大鼠（生物利用度 = 25%，末端半衰期约为 8.4 小时，AUC = 3,714 ng h⁻¹ ml⁻¹）的体内评价。SRT501 是白藜芦醇的改良版本，具有更高的生物利用度（生物利用度为 11%，末端半衰期约为 1 小时，AUC 为 10,524 ng h⁻¹ ml⁻¹），也已在遗传性肥胖小鼠 (Lepob/ob) 和饮食诱导肥胖 (DIO) 小鼠中进行了研究。 [1]

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在Sprague-Dawley大鼠中，口服SRT1720 HCL（10 mg/kg）的口服生物利用度为32%，最大血浆浓度（Cmax）为1.2 μM，达峰时间（Tmax）为1.5小时，末端半衰期（t₁/₂）为3.8小时[1]
- 静脉注射SRT1720 HCL（1 mg/kg）给Sprague-Dawley大鼠，其清除率为15 mL/min/kg，稳态分布容积（Vss）为0.7 L/kg[1]

在用 SRT1720 HCL（10 mg/kg、30 mg/kg）治疗 12 周的 db/db 小鼠中，未观察到体重、食物摄入量或毒性临床症状的显著变化。血清 ALT、AST 和肌酐水平与溶剂对照组相当，肝脏/肾脏未见组织病理学异常 [1]
- 在雌激素诱导的肝损伤小鼠中，SRT1720 HCL（30 mg/kg）降低了血清 ALT/AST（肝损伤标志物）水平，而非诱导毒性，且未观察到其他器官损伤 [5]
- 通过平衡透析法测定，SRT1720 HCL 在人血浆中的血浆蛋白结合率为 92% [1]

[1]. Small molecule activators of SIRT1 as therapeutics for the treatment of type 2 diabetes. Nature. 2007 Nov 29;450(7170):712-6.
[2]. Preclinical evaluation of a novel SIRT1 modulator SRT1720 in multiple myeloma cells. Br J Haematol. 2011 Dec;155(5):588-98.

[3]. Are sirtuins viable targets for improving healthspan and lifespan? Nat Rev Drug Discov. 2012 Jun 1;11(6):443-61.

[4]. SIRT1 protects against emphysema via FOXO3-mediated reduction of premature senescence in mice. J Clin Invest. 2012 Jun 1;122(6):2032-45.

[5]. Protective effects of SRT1720 via the HNF1α/FXR signalling pathway and anti-inflammatory mechanisms in mice with estrogen-induced cholestatic liver injury. Toxicol Lett. 2016 Dec 15;264:1-11.

热量限制可以延长寿命，并产生有利于治疗衰老相关疾病（例如2型糖尿病）的代谢特征。SIRT1是一种NAD+依赖性脱乙酰酶，是热量限制下游通路的主要调节因子，这些通路对葡萄糖稳态和胰岛素敏感性具有有益作用。白藜芦醇是一种多酚类SIRT1激活剂，它能模拟热量限制在低等生物体和高脂饮食喂养的小鼠中的抗衰老作用，改善胰岛素抵抗，增加线粒体含量，并延长寿命。本文描述了SIRT1小分子激活剂的鉴定和表征，这些激活剂的结构与白藜芦醇无关，但其活性比白藜芦醇高1000倍。这些化合物与SIRT1酶-肽底物复合物的催化结构域氨基末端的变构位点结合，并降低乙酰化底物的米氏常数。在饮食诱导的肥胖小鼠和遗传性肥胖小鼠中，这些化合物可改善胰岛素敏感性，降低血浆葡萄糖水平，并提高线粒体功能。在Zucker fa/fa大鼠中，高胰岛素-正常血糖钳夹试验表明，SIRT1激活剂可改善全身葡萄糖稳态，并提高脂肪组织、骨骼肌和肝脏的胰岛素敏感性。因此，SIRT1激活是一种有前景的治疗衰老相关疾病（如2型糖尿病）的新方法。[1]

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SIRT1属于沉默信息调节因子2 (Sir2) 蛋白家族，是一种NAD(+)依赖性III类组蛋白去乙酰化酶。本文研究了一种新型口服药物SRT1720的抗多发性骨髓瘤(MM)活性，该药物靶向SIRT1。 SRT1720 处理多发性骨髓瘤 (MM) 细胞可抑制对传统疗法和硼替佐米耐药的 MM 细胞的生长并诱导其凋亡，且对正常细胞的活力无显著影响。机制研究表明，SRT1720 的抗 MM 活性与以下机制相关：(i) 激活 caspase-8、caspase-9、caspase-3 和聚 (ADP) 核糖聚合酶；(ii) 增加活性氧；(iii) 诱导磷酸化共济失调毛细血管扩张突变蛋白/检查点激酶 2 (ATM/CK2) 信号通路；(iv) 降低血管内皮生长因子 (VEGF) 诱导的 MM 细胞迁移和相关血管生成；以及 (v) 抑制核因子-κB (NF-κB)。阻断 ATM 可减弱 SRT1720 诱导的 MM 细胞死亡。在动物肿瘤模型研究中，SRT1720 可抑制 MM 肿瘤的生长。最后，SRT1720增强了硼替佐米或地塞米松的细胞毒活性。我们的临床前研究为针对多发性骨髓瘤（MM）中SIRT1靶点的新型疗法提供了理论依据。[2]

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尽管人类寿命的延长体现了现代医学的成功，但罹患多种疾病的风险也随着年龄的增长呈指数级增长。已知热量限制可以延缓衰老，减缓功能衰退，并延缓大多数生物体疾病的发生。研究表明，sirtuins（SIRT1-SIRT7）是衰老过程中热量限制关键效应的介质。两种不相关的分子——白藜芦醇和SRT1720——已被证明在某些情况下可以增强SIRT1活性，它们是哺乳动物对抗代谢应激的优秀保护剂，这使得SIRT1成为一个潜在的、有吸引力的治疗靶点。本综述涵盖了sirtuins作为新型药理靶点的现状和争议，重点关注SIRT1。[3]

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慢性阻塞性肺疾病/肺气肿（COPD/肺气肿）的特征是慢性炎症和肺部过早衰老。抗衰老蛋白sirtuin 1 (SIRT1) 是一种NAD+依赖性蛋白/组蛋白去乙酰化酶，在COPD患者的肺部表达降低。然而，肺部过早衰老的分子机制，以及SIRT1是否能抵抗细胞衰老和肺气肿的各种病理生理改变，仍然未知。本文中，我们发现COPD患者肺部细胞衰老增加。 SIRT1的激活，无论是通过基因过表达还是选择性药理学激活剂SRT1720，都能减轻应激诱导的细胞过早衰老，并保护小鼠免受香烟烟雾和弹性蛋白酶诱导的肺气肿。在气道上皮细胞（而非髓系细胞）中敲除Sirt1，会加剧肺泡扩大、损害肺功能并降低运动耐量。这些影响是由于SIRT1能够使FOXO3转录因子去乙酰化，因为Foxo3缺陷会减弱SRT1720对细胞衰老和肺气肿改变的保护作用。使用NF-κB/IKK2抑制剂抑制肺部炎症对肺气肿没有益处。因此，SIRT1通过FOXO3介导的细胞衰老减少来保护肺气肿，而与炎症无关。激活SIRT1可能是治疗慢性阻塞性肺疾病/肺气肿的一种有前景的策略。[4]

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Sirtuin 1 (SIRT1) 是哺乳动物中最保守的NAD+依赖性蛋白脱乙酰酶，属于沉默信息调节因子2 (Sir2) 蛋白家族（也称为Sirtuins）。在肝脏中，肝脏SIRT1通过调节法尼醇X受体 (FXR) 的表达来调控胆汁酸代谢。FXR是参与胆汁酸代谢调控的最重要的核受体之一。SIRT1在多个层面上调控FXR的表达，包括直接对该转录因子进行脱乙酰化以及通过肝细胞核因子1α (HNF1α) 进行转录调控。因此，肝脏SIRT1是HNF1α/FXR信号通路和肝脏胆汁酸代谢的重要调节因子。然而，SIRT1是否是治疗胆汁淤积的合适靶点尚不清楚。本研究探讨了SIRT1特异性激活剂SRT1720对17α-炔雌醇（EE）诱导的小鼠胆汁淤积的保护作用。结果表明，SRT1720显著抑制了EE诱导的血清总胆汁酸（TBA）、总胆红素（TBIL）、γ-谷氨酰转肽酶（γ-GGT）和碱性磷酸酶（ALP）水平的变化。苏木精-伊红（H&E）染色结果显示，SRT1720还减轻了EE诱导的肝脏病理损伤。SRT1720通过HNF1α/FXR信号通路发挥保护作用，上调肝脏外排转运蛋白（Bsep和Mrp2）和肝脏摄取转运蛋白（Ntcp和Oatp1b2）的表达，从而减轻EE诱导的肝损伤。此外，SRT1720 显著抑制了 EE 诱导的 TNF-α 和 IL-6 水平。这些研究结果表明，SRT1720 对 EE 诱导的小鼠胆汁淤积性肝损伤具有剂量依赖性的保护作用，其作用机制与 HNF1α/FXR 信号通路的激活和抗炎机制有关。[5]

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SRT1720 HCL (CAY-10559) 是一种选择性 SIRT1 去乙酰化酶激活剂，最初开发用于治疗 2 型糖尿病，其作用机制是通过抑制肝糖异生和增强胰岛素敏感性。[1]
- 在多发性骨髓瘤中，SRT1720 HCL 通过激活 SIRT1 使 p53 去乙酰化，从而诱导肿瘤细胞凋亡，发挥抗肿瘤作用。[2]
- SRT1720 HCL 通过激活 SIRT1-FOXO3 信号通路，减少肺成纤维细胞过早衰老和肺泡破坏，从而起到保护作用，预防肺气肿。[4]
- 在胆汁淤积性肝损伤中，SRT1720 HCL 可抑制 SIRT1 去乙酰化 p53，从而诱导肿瘤细胞凋亡。[2]
- SRT1720 HCL 通过激活 SIRT1-FOXO3 信号通路，减少肺成纤维细胞过早衰老和肺泡破坏，从而发挥保护作用。[4]
- 在胆汁淤积性肝损伤中，SRT1720 HCL 可抑制 SIRT1 去乙酰化 p53，从而诱导肿瘤细胞凋亡。 SRT1720 HCL 通过两种机制减轻肝损伤：激活 HNF1α/FXR 调节胆汁酸代谢，以及抑制促炎细胞因子（TNF-α/IL-6）[5]

C25H23N7OS.HCL

506.02

505.145

C, 55.35; H, 4.65; Cl, 13.07; N, 18.07; O, 2.95; S, 5.91

1001645-58-4

925434-55-5; 2060259-60-9 (HCl); 2468639-77-0 (2HCl); 1001645-58-4 (x HCl)

25232708

Typically exists as solid at room temperature

1.58

4.805

115.69

3

7

5

35

707

0

Cl[H].S1C([H])=C(C([H])([H])N2C([H])([H])C([H])([H])N([H])C([H])([H])C2([H])[H])N2C([H])=C(C3=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C3N([H])C(C3C([H])=NC4=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C4N=3)=O)N=C12

DTGRRMPPXCRRIM-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C25H23N7OS.ClH/c33-24(22-13-27-20-7-3-4-8-21(20)28-22)29-19-6-2-1-5-18(19)23-15-32-17(16-34-25(32)30-23)14-31-11-9-26-10-12-31;/h1-8,13,15-16,26H,9-12,14H2,(H,29,33);1H

N-(2-(3-(piperazin-1-ylmethyl)imidazo[2,1-b]thiazol-6-yl)phenyl)quinoxaline-2-carboxamide dihydrochloride

SRT1720; CAY-10559 HCl; CAY10559; CAY 10559; SRT-1720 HCl, SRT-1720 hydrochloride; SRT1720 HCl; SRT-1720; SRT 1720; SIRT-1933; SIRT 1933; SIRT1933 HCl; CAY-10559; 1001645-58-4; SRT 1720 Hydrochloride; SRT1720 HCl; SRT1720 Hydrochloride; SRT 1720 (Hydrochloride); N-(2-(3-(piperazin-1-ylmethyl)imidazo[2,1-b]thiazol-6-yl)phenyl)quinoxaline-2-carboxamide hydrochloride; SRT1720 xHydrochloride; N-[2-[3-(1-Piperazinylmethyl)imidazo[2,1-b]thiazol-6-yl]phenyl]-2-quinoxalinecarboxamide hydrochloride;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。