| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
While TH287 (1–10 μM; 24 hours) is significantly less toxic to some primary or immortalized cells, it kills U2OS and other cancer cell lines with efficiency and selectivity [1].
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| 体外研究 (In Vitro) |
虽然 TH287（1–10 μM；24 小时）对某些原代细胞或永生化细胞的毒性明显较低，但它可以高效且选择性地杀死 U2OS 和其他癌细胞系 [1]。
在以 dGTP 为底物的生化实验中，TH287 能有效抑制 MTH1 的酶活性 (IC50 = 0.8 ± 0.1 nM)。当使用生理底物 8-oxodGTP (IC50 = 0.9 ± 0.2 nM) 和 2-OH-dATP (IC50 = 2.5 ± 0.1 nM) 时，抑制同样有效。[1] 在细胞热转移分析（CETSA）中，TH287 (50 µM) 被证明能在完整的 BJ SV40T RasV12 细胞中结合并稳定 MTH1 蛋白，表明其与靶点结合。[1] 在细胞活力和克隆形成实验中，TH287 能选择性地有效杀死多种癌细胞系（如 U2OS、HeLa、SW620、MDA-MB-231、MCF-7），IC50 值通常在低微摩尔范围（例如，对于几个细胞系为 0.8-1.7 µM）。相比之下，它对几种原代或永生化非转化细胞（如 VH10、HDFn、BJ-hTERT）的毒性要小得多，IC50 值约为 20 µM。[1] 用 TH287 (10 µM) 处理癌细胞（U2OS）24 小时，通过使用修复酶 OGG1 和 MUTYH 的改良彗星实验检测，增加了氧化核苷酸（特别是 8-oxodG 和 2-OH-dA）掺入 DNA。在原代 VH10 细胞中或使用非活性类似物 TH650 时未观察到这种效应。[1] TH287 在癌细胞中诱导 DNA 损伤，表现为 53BP1、RPA 和磷酸化 DNA-PKcs foci 的形成增加，并触发了 ATM-p53 介导的 DNA 损伤反应（ATM 和 p53 的磷酸化，p21 的诱导）。[1] TH287 在 U2OS 细胞中诱导凋亡，表现为 FACS 分析中 caspase-3 切割增加和亚 G1 期细胞群增加。[1] TH287 的细胞毒性依赖于 MTH1 的抑制，因为过表达野生型（而非催化失活型 E56A）MTH1 蛋白可以挽救细胞活力。此外，表达对特定底物水解有缺陷的 MTH1 突变体（D119A 对 8-oxodGTP，W117Y 对 2-OH-dATP）并不能挽救活力，表明两种氧化核苷酸类型都导致了毒性。[1] TH287 的细胞毒性与 p53 状态无关，因为 p53 缺失或 p53 无效的细胞系（如 HCT116 p53-/-）表现出相似的敏感性。[1] 过表达 DNA 修复酶 OGG1 或 MUTYH 并未改变 TH287 的细胞毒性效应。[1] 在使用 BJ 成纤维细胞的逐步转化模型中，TH287 选择性对表达 SV40 大 T 抗原和致癌 Ras (BJ-SV40-Ras) 的细胞具有细胞毒性，但对亲本或仅表达 hTERT 永生化 (BJ-hTERT) 的细胞则没有。[1] 在人类细胞的细胞核或线粒体中表达细菌同源物 MutT（它不受 TH287 抑制）部分挽救了 TH287 诱导的细胞毒性并减少了 53BP1 foci 的形成，为靶点作用机制提供了有力证据。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在小鼠中，TH287（5 mg/kg；腹腔注射）的 tmax 为 0.5 小时，Cmax 为 0.82 μM [2]。
在使用 SW480 结直肠癌细胞的小鼠异种移植模型中，每日皮下给予 TH287（该模型中 TH287 的具体剂量未提供；相关化合物 TH588 在类似研究中以 25 mg/kg 的剂量使用）抑制了肿瘤生长。[1] |
| 酶活实验 |
使用基于孔雀绿的酶法检测来筛选和表征 MTH1 抑制剂。将纯化的重组人 MTH1 蛋白在测定缓冲液中与 dGTP 底物一起孵育。加入过量的无机焦磷酸酶将释放的焦磷酸盐（PPi）转化为无机磷酸盐（Pi），然后使用孔雀绿试剂进行比色定量。对于 IC50 测定，将 TH287 在 DMSO 中连续稀释，然后在测定缓冲液中稀释。加入 MTH1、dGTP 和焦磷酸酶，孵育反应混合物。终止反应后，加入孔雀绿试剂。显色后，在 630 nm 处读取吸光度。拟合剂量反应曲线以计算 IC50 值。[1]
使用更灵敏的基于发光的检测（PPiLight 无机焦磷酸盐检测试剂盒）来检测生理底物 8-oxodGTP 和 2-OH-dATP。在反应缓冲液中，将 MTH1 与其 Km 浓度的底物在连续稀释的 TH287 存在下孵育。反应后，使用商业试剂盒检测释放的 PPi，并测量发光强度。[1] 使用等温滴定量热法（ITC）来确认直接结合。将 TH287 滴定到含有 MTH1 蛋白的溶液中。测量结合时的热量变化，并将数据拟合到结合模型以获得结合常数（K）、焓变（ΔH）和化学计量比（n）。[1] 使用 Biacore T200 仪器进行表面等离子体共振（SPR）分析。将纯化的 MTH1 固定在 CM5 芯片上。将不同浓度的 TH287 在运行缓冲液中流过芯片。记录传感图，并分析数据以确定动力学参数（结合/解离速率）和亲和力（Kd）。[1] |
| 细胞实验 |
对于克隆形成存活实验，将细胞以低密度接种（例如，10-cm 培养皿中 500 个细胞或 6 孔板中每孔 200 个细胞）。贴壁后，用 TH287 或载体（DMSO）处理细胞 7-14 天。在此期间不更换含化合物的培养基。然后固定平板并用亚甲蓝染色，手动计数克隆数。存活率相对于载体处理对照组进行归一化。[1]
对于细胞活力实验（刃天青/Alamar Blue），将细胞接种在 96 孔板中（每孔 1,500-3,000 个细胞）。第二天，用一系列浓度的 TH287 处理细胞。72 小时后，向孔中加入刃天青溶液。孵育（例如 2-4 小时）后，测量荧光（激发/发射 530/590 nm 或 560/590 nm）。相对于载体处理对照组计算细胞活力，并生成剂量反应曲线以确定 IC50 值。[1] 对于 DNA 损伤 foci 的免疫荧光（IF）分析，将细胞接种在盖玻片或 96 孔板上。用 TH287 处理后，用多聚甲醛固定细胞，透化，封闭，并与一抗（例如针对 53BP1、RPA、磷酸化 DNA-PKcs 的抗体）孵育。洗涤后，与荧光标记的二抗和 DNA 复染剂（DAPI 或 To-Pro-3）孵育。通过共聚焦显微镜或高内涵成像获取图像，并手动或自动量化 foci 数量。[1] 对于检测 8-oxodG 掺入 DNA，用甲醇固定细胞。透化和封闭后，与 Alexa Fluor 488 标记的亲和素孵育，该亲和素特异性结合 8-oxodG。对 DNA 进行复染，并通过显微镜或高内涵分析量化细胞核中的荧光强度。[1] 对于检测特定氧化碱基的改良彗星实验，将用 TH287 处理的细胞包埋在载玻片的低熔点琼脂糖中。裂解细胞并洗涤载玻片。然后将 DNA 与单独的缓冲液、OGG1 酶（在 8-oxodG 位点切割）或 MUTYH 酶（在 8-oxodG 和 2-OH-dA 位点切割）孵育。载玻片进行碱性电泳，用 DNA 染料（YOYO-1）染色并成像。使用彗星分析软件量化 DNA 损伤（尾矩）。[1] 对于通过 FACS 进行细胞凋亡分析，收集用 TH287 处理的细胞，固定，透化，并用抗切割的 caspase-3 抗体染色，然后使用荧光二抗。细胞也用碘化丙啶（PI）和 RNase 染色。通过流式细胞术分析样品，以量化切割的 caspase-3 阳性细胞的百分比以及 PI 直方图中的亚 G1 期（凋亡）细胞群。[1] 对于 siRNA 转染，将细胞接种，并在第二天使用商业转染试剂按照制造商的方案，用靶向 MTH1 的 siRNA 双链体或非靶向对照进行转染。通常在转染后 3-6 天分析细胞的活力、蛋白表达（蛋白质印迹）或 DNA 损伤标记物（IF）。[1] |
| 动物实验 |
在药代动力学 (PK) 研究中，C57BL/6 或 SCID 小鼠（雌性，6-8 周龄）接受单次皮下注射 10 mg/kg 的 TH287。注射后在不同时间点从各组小鼠（例如，每个时间点 n=3）采集血样。分离血浆，并通过 LC-MS/MS 分析测定化合物浓度随时间的变化。[1]
（TH287 单独使用的具体动物疗效方案未与 TH588 分开详细描述。本文主要描述了 TH588 的疗效研究。一项相关的异种移植研究方案包括将癌细胞（例如 SW480）皮下接种到 SCID 小鼠体内。当肿瘤可触及时，将小鼠随机分组，并每日一次皮下注射赋形剂或化合物进行治疗。定期监测肿瘤体积和体重。）[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
在采用小鼠肝微粒体 (MLM) 进行的体外代谢稳定性试验中，TH287 显示出较高的固有清除率 (CLint = 261 µL/min/mg 蛋白)，表明其代谢迅速。[1]
在采用快速平衡透析 (RED) 进行的体外血浆蛋白结合试验中，TH287 与蛋白高度结合，在人血浆中的游离分数 (fu) 为 8.0%。[1] 测定 TH287 在 PBS 中的溶解度为 52 µM。[1] 在 Caco-2 细胞渗透性试验中，TH287 在顶端至基底外侧 (AB) 方向的表观渗透率 (Papp) 为 8.4 × 10⁻⁶ cm/s，外排比 (BA/AB) 为 0.8，表明其渗透性较低至中等，且无显著性差异。外排。[1] 在体内，小鼠单次皮下注射10 mg/kg TH287后，1小时（Tmax）血浆浓度（Cmax）达到1.5 µM。浓度-时间曲线下面积（AUC0-inf）为1.8 µmol·h/L。末端半衰期（t1/2）为0.4小时。检测到一种主要代谢物（推测为N-去烷基化产物），其暴露量更高（Cmax 5.6 µM，AUC0-inf 10.5 µmol·h/L），半衰期更长（1.0小时）。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在小鼠体内单剂量药代动力学研究中，10 mg/kg 皮下注射剂量未观察到急性毒性。[1]
（正文未报告 TH287 的具体体内毒性参数，例如最大耐受剂量 (MTD)、半数致死剂量 (LD50) 或器官的详细组织病理学分析。）[1] 体外研究表明，TH287 对非转化原代细胞或永生化细胞的细胞毒性显著低于对癌细胞的细胞毒性，提示其具有潜在的治疗窗口。[1] |
| 参考文献 |
[1]. Gad H, et al. MTH1 inhibition eradicates cancer by preventing sanitation of the dNTP pool. Nature. 2014 Apr 10;508(7495):215-21.
[2]. Saleh A, et, al. Development and validation of method for TH588 and TH287, potent MTH1 inhibitors and new anti-cancer agents, for pharmacokinetic studies in mice plasma. J Pharm Biomed Anal. 2015 Feb;104:1-11. |
| 其他信息 |
TH287 被鉴定为首个针对 nudix 水解酶蛋白家族的抑制剂，其特异性靶向 MTH1。它的发现源于非癌基因成瘾的概念，即氧化还原调节功能障碍且活性氧 (ROS) 水平升高的癌细胞会依赖 MTH1 来清除氧化的 dNTP 池，从而防止 DNA 复制过程中发生致命损伤。[1]
其作用机制涉及抑制 MTH1 的催化活性，从而导致氧化的 dNTP（如 8-oxodGTP 和 2-OH-dATP）在 DNA 复制过程中掺入 DNA 中。这种掺入会导致DNA损伤，激活DNA损伤反应，最终导致癌细胞死亡，同时对正常细胞的氧化应激较低。[1] TH287被发现可通过其氨甲基取代基的N-去烷基化在体内快速代谢，这促使人们开发出代谢更稳定的类似物TH588，该类似物以环丙基取代。[1] MTH1与TH287复合物的共晶结构已解析至1.6 Å分辨率，结果表明氨基嘧啶部分结合在活性位点，并与Asn33、Asp119和Asp120形成关键的氢键。[1] |
| 分子式 |
C11H11CL3N4
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|---|---|
| 分子量 |
305.5908
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| 精确质量 |
304.004
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| CAS号 |
1638211-05-8
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| 相关CAS号 |
TH287;1609960-30-6
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| PubChem CID |
91826506
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| tPSA |
63.8
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
2
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| 重原子数目 |
18
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| 分子复杂度/Complexity |
254
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
ClC1C(=C([H])C([H])=C([H])C=1C1=C([H])C(=NC(N([H])[H])=N1)N([H])C([H])([H])[H])Cl.Cl[H]
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| InChi Key |
YBLIJWDQSUDCJU-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C11H10Cl2N4.ClH/c1-15-9-5-8(16-11(14)17-9)6-3-2-4-7(12)10(6)13;/h2-5H,1H3,(H3,14,15,16,17);1H
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| 化学名 |
6-(2,3-dichlorophenyl)-4-N-methylpyrimidine-2,4-diamine;hydrochloride
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.2724 mL | 16.3618 mL | 32.7236 mL | |
| 5 mM | 0.6545 mL | 3.2724 mL | 6.5447 mL | |
| 10 mM | 0.3272 mL | 1.6362 mL | 3.2724 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
匹伐加宾
磷酸氢化可的松
BAY-784
Gly-PEG3-endo-BCN
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