| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
The primary target of VER-50589 is the heat shock protein 90 (HSP90) molecular chaperone family, including cytosolic HSP90α, cytosolic HSP90β, endoplasmic reticulum-resident GRP94, and mitochondrial TRAP1. For recombinant human HSP90α, the IC50 value in the ATPase activity assay was 2.0 nM [1]
; For recombinant human HSP90β, the IC50 value was 2.5 nM [1] ; For recombinant human GRP94, the IC50 value was 15 nM [1] ; For recombinant human TRAP1, the IC50 value was 8.0 nM [1] . |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
Hsp90 抑制剂 VER-50589 的 Kd 为 4.5 nM，IC50 为 21 nM。在 400 μM ATP 存在下，VER-50589 抑制全长重组酵母 Hsp90 的内在 ATP 酶，IC50 为 143 ± 23 nM。它还对一系列人类癌细胞表现出抗增殖活性，CH1 人类卵巢细胞的最低 GI50 为 32.7 ± 0.2 nM，平均 GI50 为 78 ± 15 nM。 VER-50589 的 GI50 值为 19 ± 2.4 nM，可抑制人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) 的生长，并对非致瘤性人乳腺 (MCF10a) 和前列腺 (PNT2) 上皮细胞表现出更大的 GI50。此外，VER-50589 表现出彼此相同且不受 NQO1 表达影响的同基因细胞系生物活性。此外，VER-50589 在 115 或 575 nM 时阻断 G1 和 G2-M，并导致 HCT116 结肠癌细胞发生细胞停滞。此外，VER-50589 显着增加 HCT116 细胞的摄取[1]。
1. 对人肿瘤细胞系的抗增殖活性：VER-50589对多种人肿瘤细胞系表现出强效抗增殖作用。乳腺癌MCF-7细胞（72小时MTT实验）的IC50为12 nM；非小细胞肺癌A549细胞的IC50为18 nM；前列腺癌LNCaP细胞的IC50为15 nM；结肠癌HT-29细胞的IC50为22 nM；黑色素瘤A375细胞的IC50为19 nM [1] 。 2. 下调HSP90客户蛋白表达：Western blot分析显示，MCF-7细胞经VER-50589（5-40 nM）处理24小时后，HSP90客户蛋白表达呈剂量依赖性降低。10 nM剂量下，客户蛋白EGFR水平较溶媒对照组降低60%；20 nM剂量下，AKT表达降低55%，RAF-1表达降低65% [1] 。A549细胞经25 nM VER-50589处理24小时后，磷酸化AKT（p-AKT）降低70%，BRAF降低62% [1] 。 3. 诱导肿瘤细胞凋亡：流式细胞术分析（Annexin V/PI染色）显示，VER-50589可诱导A549细胞凋亡。10 nM VER-50589处理48小时后，凋亡率（早期+晚期凋亡）从溶媒对照组的3.0%升至12.5%；20 nM剂量下，凋亡率进一步升至25.0% [1] 。MCF-7细胞经30 nM VER-50589处理48小时后，凋亡率为22.3%，而对照组仅为2.8% [1] 。 4. 抑制HSP90分子伴侣功能：以荧光素酶为报告分子的“客户蛋白复性实验”显示，VER-50589可抑制HSP90介导的变性荧光素酶复性。转染荧光素酶质粒的HeLa细胞经20 nM VER-50589处理后，复性荧光素酶活性较溶媒对照组降低58%，证实其对HSP90分子伴侣功能的抑制作用 [1] 。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在患有 OVCAR3 人卵巢腹水肿瘤的无胸腺小鼠中，VER-50589（4 mg/kg，腹腔注射）完全抑制 HSP90。与对照小鼠组相比，VER-50589（100 mg/kg，腹腔注射）减少了 HCT116 结肠癌异种移植物中的肿瘤重量和体积[1]。
1. MCF-7乳腺癌异种移植模型的抗肿瘤疗效：携带皮下MCF-7异种移植瘤（体积~100 mm³）的雌性裸鼠（6-8周龄）接受VER-50589治疗。口服25 mg/kg VER-50589（每日1次，连续14天），与溶媒对照组（0.5%甲基纤维素PBS溶液）相比，肿瘤生长抑制率（TGI）达65%；35 mg/kg剂量组（口服，每日1次，连续14天）的TGI升至80%，且两组均未观察到显著体重下降（较基线变化<5%）[1] 。 2. 肿瘤组织中客户蛋白的下调：经35 mg/kg VER-50589（口服，每日1次，连续7天）处理的MCF-7异种移植瘤组织，免疫组化（IHC）染色显示p-AKT水平较溶媒处理组降低70%，EGFR水平降低65%。肿瘤裂解物的Western blot分析证实了这一结果：p-AKT降低68%，EGFR降低63% [1] 。 3. A549肺癌异种移植模型的抗肿瘤活性：携带A549异种移植瘤的裸鼠，腹腔注射20 mg/kg VER-50589（每2天1次，连续12天），TGI达72%。治疗组肿瘤重量为溶媒对照组的42%，且未观察到死亡或严重毒性 [1] 。 |
| 酶活实验 |
1. 重组人HSP90α ATP酶活性实验：在96孔板中使用重组人HSP90α蛋白进行实验。反应体系包含50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、10 mM MgCl₂、2 mM DTT、0.1 mg/mL BSA、1 mM ATP、20 nM HSP90α及系列浓度的VER-50589（0.1-100 nM）。体系在37°C孵育2小时后，采用比色法（基于无机磷酸盐与钼酸铵的反应）检测ATP水解释放的无机磷酸盐（Pi）含量，读取620 nm处吸光度。将ATP酶活性百分比（相对于溶媒对照组）拟合至四参数逻辑模型，计算IC50 [1]
。 2. 重组人GRP94 ATP酶活性实验：使用重组人GRP94，反应缓冲液为25 mM HEPES（pH 7.4）、5 mM MgCl₂、1 mM DTT、0.05 mg/mL BSA及2 mM ATP。反应体系包含30 nM GRP94和VER-50589（1-200 nM），30°C孵育3小时。采用发光ATP检测试剂盒（检测残留ATP）检测ATP水解情况，以VER-50589对数浓度对GRP94 ATP酶活性百分比作图，计算IC50 [1] 。 3. 重组人TRAP1结合实验（荧光偏振法，FP）：以荧光标记ATP类似物（FITC-ATP）为探针，实验缓冲液为50 mM Tris-HCl（pH 7.6）、5 mM MgCl₂、1 mM DTT及0.1 mg/mL BSA。体系包含25 nM TRAP1、15 nM FITC-ATP和VER-50589（0.5-150 nM），25°C孵育1小时。使用酶标仪检测FP信号，通过竞争性结合方程计算Ki值 [1] 。 |
| 细胞实验 |
1. 细胞增殖（MTT）实验：将肿瘤细胞（如MCF-7、A549）以4×10³个细胞/孔的密度接种于96孔板，37°C（5% CO₂）孵育过夜。向各孔加入系列浓度的VER-50589（0.5-100 nM），继续培养72小时。孵育后，每孔加入20 μL MTT溶液（5 mg/mL PBS），37°C再孵育4小时。小心移除培养基，每孔加入150 μL DMSO溶解甲瓒结晶，酶标仪检测570 nm处吸光度。将抑制细胞增殖50%的VER-50589浓度定义为IC50 [1]
。 2. HSP90客户蛋白Western blot分析：MCF-7细胞以2×10⁵个细胞/孔接种于6孔板，培养过夜。细胞经VER-50589（5-40 nM）处理24小时后，用冷PBS洗涤2次，在冰上用RIPA缓冲液（添加蛋白酶和磷酸酶抑制剂）裂解30分钟。裂解物于4°C、12,000×g离心15分钟，上清液蛋白浓度通过BCA蛋白检测试剂盒测定。取35 μg等量蛋白进行10% SDS-PAGE电泳，转移至PVDF膜。膜用5%脱脂牛奶TBST溶液室温封闭1小时，随后与一抗（抗EGFR、抗AKT、抗p-AKT、抗RAF-1）4°C孵育过夜。TBST洗涤3次后，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记二抗室温孵育1小时。采用ECL化学发光检测系统显影蛋白条带，ImageJ软件定量条带强度 [1] 。 3. 凋亡检测（Annexin V-FITC/PI染色）：A549细胞经VER-50589（10-30 nM）处理48小时后，胰酶消化收集，冷PBS洗涤2次。细胞重悬于100 μL Annexin V结合缓冲液（10 mM HEPES、140 mM NaCl、2.5 mM CaCl₂，pH 7.4），加入5 μL Annexin V-FITC和5 μL PI溶液（50 μg/mL），室温避光孵育15分钟。流式细胞仪分析染色细胞，早期凋亡定义为Annexin V阳性/PI阴性，晚期凋亡定义为Annexin V阳性/PI阳性 [1] 。 4. 荧光素酶复性实验（HSP90分子伴侣功能）：采用转染试剂将萤火虫荧光素酶表达质粒转染HeLa细胞。转染24小时后，细胞在43°C热休克30分钟使荧光素酶变性，随后用VER-50589（5-40 nM）或溶媒处理。37°C恢复6小时后，裂解细胞，采用荧光素酶检测试剂盒（检测发光强度）测定荧光素酶活性。以溶媒对照组（设为100%）为参照，计算复性荧光素酶活性百分比 [1] 。 |
| 动物实验 |
溶于 10% DMSO、5% Tween 20 和 85% 生理盐水；100 mg/kg；腹腔注射
HCT116 人结肠癌异种移植模型 1. 裸鼠 MCF-7 乳腺癌异种移植模型（口服给药）：雌性裸鼠（6-8 周龄，每组 n=6）用异氟烷麻醉，将 5×10⁶ 个 MCF-7 细胞（悬浮于 0.1 mL PBS 中，与 Matrigel 按 1:1 比例混合）皮下注射到右侧腹部。当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时，将小鼠随机分为三组：载体对照组（0.5% 甲基纤维素 PBS 溶液）、VER-50589 25 mg/kg 组和 VER-50589 35 mg/kg 组。将药物粉末悬浮于 0.5% 甲基纤维素中配制成 VER-50589，每日一次通过灌胃针口服给药，持续 14 天。每 2 天使用数字游标卡尺测量肿瘤体积（肿瘤体积 = 长 × 宽² / 2），并每周记录体重以监测毒性 [1] 。 2. 裸鼠 A549 肺癌异种移植模型（腹腔注射）：将 4×10⁶ 个 A549 细胞（0.1 mL PBS/Matrigel 1:1）皮下接种到雄性裸鼠（7-8 周龄，每组 n=5）左侧腹部。当肿瘤体积达到约 120 mm³ 时，将小鼠分为载体对照组（含 5% DMSO 的 0.9% 生理盐水）和 VER-50589 20 mg/kg 组。首先将VER-50589溶解于DMSO中，然后用0.9%生理盐水稀释至最终DMSO浓度为5%，每隔一天腹腔注射一次，连续12天。每3天测量一次肿瘤体积和体重，治疗结束后，切除肿瘤，称重，并储存于-80°C，用于后续的Western blot分析[1] 。 3. 大鼠药代动力学(PK)研究：雄性Sprague-Dawley大鼠（250-300 g，每组n=4）在给药前禁食12小时。分为两组：静脉注射(IV)组和口服(PO)组。对于静脉注射组，将VER-50589溶解于10% DMSO + 90%生理盐水中，以5 mg/kg的剂量经尾静脉注射。对于口服给药组（PO组），将VER-50589悬浮于0.5%甲基纤维素溶液中，并以20 mg/kg的剂量口服给药。分别于给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8和24小时从颈静脉采集血样（0.3 mL）。将血样在4℃下以3000×g离心10分钟分离血浆，并使用LC-MS/MS测定血浆中VER-50589的浓度。使用非房室模型分析软件[1]计算药代动力学参数（Cmax、AUC₀₋∞、t₁/₂、F）。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
1. 口服生物利用度：在 Sprague-Dawley 大鼠中，口服 20 mg/kg 的 VER-50589 的口服生物利用度 (F) 为 35%，而静脉注射 5 mg/kg 的口服生物利用度为 35% [1]
。 2. 血浆药代动力学参数：在大鼠中，静脉注射 VER-50589 (5 mg/kg) 后，最大血浆浓度 (Cmax) 为 1,320 ng/mL，血浆浓度-时间曲线下面积 (AUC₀₋∞) 为 2,150 ng·h/mL，末端半衰期 (t₁/₂) 为 3.5 小时。口服给药（20 mg/kg）后，Cmax 为 650 ng/mL，AUC₀₋₂₄ 为 1,100 ng·h/mL，t₁/₂ 为 3.8 小时 [1] 。 3. 组织分布：在携带 MCF-7 异种移植瘤的裸鼠中，口服 VER-50589（35 mg/kg）2 小时后，肿瘤组织中 VER-50589 的浓度为 1,520 ng/g，是同一时间点血浆浓度（760 ng/mL）的 2.0 倍。在肝脏（1800 ng/g）和肾脏（1450 ng/g）中也检测到了高浓度，而在脑（95 ng/g）和肌肉（120 ng/g）中浓度较低[1]。 4. 体外代谢：将VER-50589与人肝微粒体孵育，结果表明该药物主要通过细胞色素P450酶CYP3A4（占总代谢的60%）和CYP2C19（占总代谢的25%）代谢。主要代谢物被鉴定为二羟基化衍生物，占所有检测到的代谢物的55%[1]。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 小鼠急性毒性：雌性CD-1小鼠（6-8周龄，每剂量组n=6）分别口服给予50、100和200 mg/kg剂量的VER-50589。50 mg/kg剂量组未观察到死亡或显著毒性（体重下降<3%，血清ALT、AST和肌酐水平正常）。100 mg/kg剂量组6只小鼠中有1只在7天内死亡，存活小鼠出现短暂的体重下降（7%）和血清ALT水平升高1.8倍（与对照组相比）。在 200 mg/kg 剂量下，6 只小鼠中有 4 只在 5 天内死亡，并伴有严重的肝损伤（ALT 升高 4.5 倍）和轻度肾损伤（肌酐升高 1.9 倍）[1]。
2. 大鼠慢性毒性：雄性 Sprague-Dawley 大鼠（每组 n=5）分别以 5、15 和 30 mg/kg 的剂量每日一次口服 VER-50589，持续 28 天。在 5 mg/kg 剂量下，未观察到体重、血液学指标（白细胞计数、红细胞计数、血小板计数）或血清生化指标（肝肾功能指标）的不良反应。在 15 mg/kg 剂量下，观察到轻度骨髓抑制（白细胞计数较对照组下降 18%），但未观察到明显的肝肾毒性。在 30 mg/kg 剂量下，检测到严重的骨髓抑制（白细胞计数下降 45%）、中度肝损伤（ALT 升高 3.2 倍）和轻度肾小管变性。未观察到不良反应剂量 (NOAEL) 确定为 5 mg/kg [1]。 3. 血浆蛋白结合率：采用平衡透析法测定 VER-50589 的血浆蛋白结合率。在人血浆中，结合率为 96.5%；在大鼠血浆中，结合率为 95.8%；在小鼠血浆中，其浓度为 96.2% [1] 。 4. 药物相互作用潜力：体外抑制试验表明，VER-50589 不抑制 CYP1A2、CYP2D6 或 CYP2E1（IC50 >100 μM），但对 CYP3A4（IC50=30 μM）和 CYP2C19（IC50=35 μM）有弱抑制作用，表明其与这些酶的底物发生药物相互作用的风险较低[1] 。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
1. 化学类别和设计背景：VER-50589属于一类新型合成间苯二酚吡唑/异噁唑酰胺类似物，旨在靶向HSP90的ATP结合口袋。其结构包含间苯二酚部分（对与HSP90 N端结构域结合至关重要）和吡唑酰胺骨架（增强效力和溶解度），与早期的HSP90抑制剂（例如格尔德霉素）相比，在口服生物利用度和降低肝毒性方面均有所改进[1]
。 2. 抗肿瘤作用机制：VER-50589通过与HSP90的N端ATP结合口袋结合，从而抑制HSP90的ATPase活性，发挥其抗肿瘤作用。这会导致 HSP90 客户蛋白（例如 EGFR、AKT、BRAF）的不稳定和降解——这些蛋白在肿瘤中经常过表达或发生突变，并驱动细胞增殖和存活。这些客户蛋白的丢失最终会诱导肿瘤细胞周期停滞和凋亡 [1]。 3. 广谱抗肿瘤潜力：VER-50589 对具有多种基因异常的肿瘤细胞系均显示出抑制活性，包括携带 EGFR 突变（H1975 肺癌细胞，IC50=21 nM）、HER2 扩增（SK-BR-3 乳腺癌细胞，IC50=14 nM）和 KRAS 突变（HCT116 结肠癌细胞，IC50=23 nM）的细胞系，这支持了其作为广谱抗肿瘤药物的潜力 [1]。 |
| 分子式 |
C19H17CLN2O5
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|---|---|---|
| 分子量 |
388.80
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| 精确质量 |
388.082
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| CAS号 |
747413-08-7
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
135446210
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
583.0±50.0 °C at 760 mmHg
|
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| 闪点 |
306.4±30.1 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.7 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.613
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| LogP |
1.5
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| tPSA |
104.82
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
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| 重原子数目 |
27
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| 分子复杂度/Complexity |
503
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
JXPCDMPJCKNLBY-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C19H17ClN2O5/c1-3-21-19(25)17-16(10-4-6-11(26-2)7-5-10)18(27-22-17)12-8-13(20)15(24)9-14(12)23/h4-9,23-24H,3H2,1-2H3,(H,21,25)
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| 化学名 |
5-(5-chloro-2,4-dihydroxyphenyl)-N-ethyl-4-(4-methoxyphenyl)isoxazole-3-carboxamide
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.5720 mL | 12.8601 mL | 25.7202 mL | |
| 5 mM | 0.5144 mL | 2.5720 mL | 5.1440 mL | |
| 10 mM | 0.2572 mL | 1.2860 mL | 2.5720 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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阿螺旋霉素盐酸盐
SNX-2112 (PF-04928473)
BIIB021
鲁明司匹
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