Survivin (IC50 = 0.54 nM)

生存基因启动子驱动的荧光素酶报告基因活性不影响司潘溴铵 (YM155；30 μM)。通过对生存素基因启动子的转录抑制，sepantronium bromide 可显着降低 p53 缺陷的 PC-3 和 PPC-1 人 HRPC 细胞中内源性生存素的表达。 c-IAP2、XIAP、Bcl-2、Bcl-xL、Bad、α-肌动蛋白和 β-微管蛋白的蛋白表达不受 sepatrium bromide (100 nM) 的影响。 Sepatrium bromide 的 IC50 范围为 2.3 至 11 nM，可有效抑制人类癌细胞系（突变或截短的 p53），包括 PC-3、PPC-1、DU145、TSU-Pr1、22Rv1、SK-MEL-5 和 A375，分别。 1]。溴化隔膜 (YM155) 可增加 NSCLC 细胞的伽马射线敏感性。当分离溴化物和伽玛射线联合使用时，凋亡细胞的数量和 caspase-3 活性会增加。此外，溴化庚烷无法快速修复由辐射引起的核 DNA 双链断裂 [2]。

在 PC-3 异种移植物中，sepantronium bromide（YM155；3 和 10 mg/kg）可抑制肿瘤生长，而不会导致明显的体重减轻或血细胞计数降低。溴化蛇纹石广泛分散在人体的肿瘤组织中。在 PC-3 原位异种移植物中，溴化蛇在 5 mg/kg 剂量下显示出 80% TGI [1]。当与伽马射线结合时，spentronium bromide (YM155) 对裸鼠中的 H460 或 Calu6 异种移植物表现出强大的抗癌功效 [2]。在原位肾肿瘤和转移性肺肿瘤模型中，Sepantronium bromide (YM-155) 和 IL-2 进一步降低了肿瘤重量、肺转移和荧光素染色的肿瘤图片 [3]。

使用 Pyrobest 聚合酶和以下引物，通过 PCR 从人类基因组 DNA 中分离出 2,767 bp 的人类生存素基因启动子序列：5

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γ-H2AX免疫荧光染色。[2]
细胞在两孔Lab Tec小室载玻片（Nunc）中生长至50%融合，然后在50 nmol/LYM155或载体存在下培养48小时，然后暴露于3 Gy的γ辐射。在此后的不同时间，它们在室温下用4%多聚甲醛固定10分钟，在4°C下用0.1%Triton X-100渗透10分钟，并在室温下暴露于5%脱脂奶粉中10分钟。用PBS洗涤载玻片，然后在室温下首先用1:300稀释的组蛋白γ-H2AX小鼠单克隆抗体孵育2小时，然后用1:700稀释的Alexa 488标记的小鼠IgG山羊抗体孵育1小时。将载玻片安装在荧光安装介质中，用配备LSM5 PASCAL系统的共聚焦激光扫描显微镜观察荧光信号。以×100的放大倍数检查了三个随机区域，每个区域包含=50个细胞。如前所述，将含有≥10个免疫反应灶的核计数为γ-H2AX阳性，并计算阳性细胞的百分比[2]。

将细胞以 5-40 × 103 的密度接种在 96 孔板中。将溶解有 YM155 的 DMSO 给予细胞 48 小时。然后，使用磺基罗丹明 B 测定法计算细胞计数。台盼蓝排斥染色用于测定细胞活力。[1]

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在有或没有YM155的情况下培养48小时后，通过胰蛋白酶消化和离心（0.05%胰蛋白酶-EDTA）收集PC-3和PPC-1细胞，并将其重新悬浮在DMEM中。将细胞悬浮液用等体积的台盼蓝（0.4%工作溶液）稀释。在血细胞计数器上计数活细胞（未染色）和死细胞（染色），活细胞与细胞总数的比率表示为活细胞百分比。

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半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3活性的测量。[1]
根据制造商的说明，用CPP32/SCaspase-3荧光蛋白酶检测试剂盒（MBL）测量半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3活性。在用YM155孵育48小时后，PC-3和PPC-1细胞在100μL细胞裂解缓冲液（随试剂盒提供）中裂解，得到等体积（50μL）的细胞裂解液（100μg蛋白质）。加入2倍反应缓冲液后，将混合物加入黑色96孔板中。然后以5 mL/孔的速度加入DEVD-AFC底物（附有试剂盒），并将混合物在37°C下孵育30分钟。用荧光分光光度计在390 nm的激发波长和460 nm的发射波长下对荧光发射进行定量。

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体外细胞生长抑制试验。[1]
YM155的抗增殖活性通过国家癌症研究所使用的方法进行测量。用YM155处理48小时后，通过磺基罗丹明B测定细胞计数。GI50值通过逻辑分析计算，即药物浓度导致对照细胞在药物孵育过程中净蛋白质增加（通过硫罗丹明B染色测量）减少50%。该测定一式三份，平均GI50值由四次独立测定的结果得出。

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体外抗肿瘤活性的时间依赖性。[1]
A549细胞用YM155、甲氨蝶呤或阿霉素处理。通过用新鲜培养基洗涤五次，在不同长度的暴露时间后去除每种化合物。在细胞处理开始后的72小时温育时，用Alamar Blue测定法（Serotec；参考文献22）测定所选化合物对细胞增殖的影响，每种浓度（n=1）两次。通过逻辑分析计算IC50。为了了解每种化合物的体外作用模式和药效学特性，以对数标度绘制了YM155、阿霉素（作为曲线下面积依赖性药物）和甲氨蝶呤（作为时间相关药物）的对数斜率（暴露时间）和对数斜率的倒数（A549抗增殖作用的IC50），并比较了三种药物的IC50暴露时间曲线的斜率。

在雄性裸鼠（BALB/c nu/nu）中建立PC-3皮下（原位）异种移植瘤模型
\n5 mg/kg
\n通过植入式微型渗透泵，每周皮下注射3天，持续3周。

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\n\n体内实验中，YM155在给药前立即溶解并稀释于生理盐水中。
\n\n针对PC-3皮下异种移植瘤模型的体内抗肿瘤活性。[1]
\n使用5周龄雄性裸鼠（BALB/c nu/nu）。将PC-3细胞（2 × 10⁶–3 × 10⁶）注射到小鼠侧腹部，使其肿瘤体积（长×宽2 × 0.5）>100 mm³。 YM155采用皮下注射给药，每周3天，持续2周，使用植入式微型渗透泵（Alzet 1003D型，Durect公司）进行持续输注；或采用静脉注射给药，每周5次，持续2周。首次给药YM155后14天，使用以下公式计算各组的肿瘤生长抑制率：MTV = 100 × {1 − [(治疗组第14天的MTV) − (治疗组第0天的MTV)] / [(对照组第14天的MTV) − (对照组第0天的MTV)]}，其中MTV为平均肿瘤体积。对于冷冻肿瘤和血浆样本，采用Western blotting分析survivin表达水平，并采用高效液相色谱/三重四极杆质谱（LC/MS/MS）结合已验证的方法分析YM155药物浓度。\n

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\n\n针对PC-3原位异种移植模型的体内抗肿瘤活性。[1]
\n对于原位移植，将PC-3细胞悬液（每只小鼠1 × 10⁶/20 μL）注射到7周龄雄性裸鼠（BALB/c nu/nu）的前列腺背外侧叶（右侧）。移植两周后，使用植入式微型渗透泵（Alzet 1003D型，Durect）以5 mg/kg/d的剂量，每周连续3天皮下输注YM155，持续3周。从首次给予YM155给药开始，定期测量体重。三周后，取出附着于前列腺和精囊的肿瘤并称重，作为肿瘤重量。YM155的抗肿瘤活性以肿瘤生长抑制百分比表示，计算公式如下：MTW = 100 × [1 − (治疗组第21天的MTW) / (对照组第21天的MTW)]。

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\n\n\n体内肿瘤生长评估。[2]
\n将肿瘤细胞（2 × 10⁶）皮下注射到6周龄雌性无胸腺裸鼠（BALB/c nu/nu）的右后肢。根据公式LW²/2，用游标卡尺测量肿瘤长度（L）和宽度（W）计算肿瘤体积。当各组动物的肿瘤平均体积达到约 200 至 250 mm³ 时开始治疗。治疗组（每组 8 只小鼠）包括：载体对照组（生理盐水）、YM155 单独治疗组、载体联合放射治疗组和 YM155 联合放射治疗组。载体或 YM155 的剂量为 5 mg/kg 体重，连续 7 天（第 1-7 天）通过植入式微型渗透泵（Alzet 1003D 型；Durect 公司）给药。放射治疗组的小鼠接受钴辐照器提供的 10 Gy γ 射线照射，照射方式为：在给药第 3 天一次性照射，或在连续 5 天（第 3-7 天）分次照射；照射靶向肿瘤，其余身体部位用铅屏蔽。生长延迟 (GD) 的计算方法为：治疗组肿瘤体积增长 5 倍所需时间减去对照组肿瘤体积增长 5 倍所需时间。增强因子随后被确定为：(GDcombination − GDYM155)/GDradiation。[2]

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\n\n将表达荧光素酶的RENCA细胞分别植入左肾肾包膜下和尾静脉，以构建具有原位肿瘤和肺转移瘤的小鼠肾细胞癌（RCC）模型。将小鼠随机分为四组，各组的IVIS值分布均匀。第1组腹腔注射100 μL磷酸盐缓冲液（PBS）作为载体对照；第2组单独接受YM155治疗（1 mg/kg体重/天，腹腔注射，持续1周）；第3组单独接受IL-2治疗（在治疗的第0、4和8天腹腔注射6000 U重组IL-2）；第 4 组（联合治疗组）接受 YM155 和 IL-2 治疗（剂量和给药方案与第 2 组相同，加上第 3 组）。所有组均在治疗后第 14 天进行肿瘤成像并分析肿瘤体积。处死小鼠，测量左肾原位肿瘤和双侧肺转移组织切片的重量。[3]

[1]. YM155, a novel small-molecule survivin suppressant, induces regression of established human hormone-refractory prostate tumor xenografts. Cancer Res. 2007 Sep 1;67(17):8014-21.

[2]. Radiosensitizing effect of YM155, a novel small-molecule survivin suppressant, in non-small cell lung cancer cell lines. Clin Cancer Res. 2008 Oct 15;14(20):6496-504.

[3]. A combination of YM-155, a small molecule survivin inhibitor, and IL-2 potently suppresses renal cell carcinoma in murine model. Oncotarget. 2015 Aug 28;6(25):21137-47.

溴化塞潘曲铵是一种有机溴化物盐，由塞潘曲铵阳离子和溴离子阴离子组成。研究发现，它能选择性抑制survivin（BIRC5）基因启动子活性，并在体外下调survivin表达，从而诱导细胞凋亡。它具有抗肿瘤、抑制survivin和诱导细胞凋亡的双重作用。其分子结构中包含塞潘曲铵基团。
溴化塞潘曲铵是一种具有潜在抗肿瘤活性的小分子促凋亡剂。溴化塞潘曲铵选择性抑制肿瘤细胞中survivin的表达，从而抑制survivin的抗凋亡活性（通过外源性或内源性凋亡途径），最终诱导肿瘤细胞凋亡。Survivin是凋亡抑制蛋白（IAP）基因家族的成员，在胚胎发育过程中表达，但在大多数正常的终末分化组织中不表达。 Survivin在多种人类癌症中表达上调，其在肿瘤中的表达与更具侵袭性的表型、更短的生存期以及化疗反应降低相关。

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越来越多的证据表明，作为凋亡抑制蛋白（IAP）家族成员的Survivin在多种癌症（包括激素难治性前列腺癌（HRPC））的耐药性和癌细胞存活中发挥着重要作用。本研究采用Survivin基因启动子活性检测方法，对一种新型小分子Survivin抑制剂YM155进行了表征。YM155在10 nmol/L浓度下即可抑制PC-3和PPC-1人HRPC细胞系中Survivin的表达并诱导细胞凋亡。相反，浓度高达100 nmol/L的YM155对其他IAP或Bcl-2相关蛋白的表达水平几乎没有影响。在小鼠皮下移植PC-3肿瘤模型中，连续3天以3至10 mg/kg的剂量输注YM155可诱导肿瘤显著消退，并伴有肿瘤内survivin表达的抑制。YM155还能完全抑制原位移植PC-3肿瘤的生长。在实验期间，接受YM155治疗的小鼠体重未见明显下降。药代动力学分析表明，YM155在肿瘤部位分布广泛，其浓度约为血浆浓度的20倍。我们的研究首次尝试通过单一小分子化合物治疗，证实了p53缺陷型人HRPC细胞的肿瘤消退和survivin表达的抑制。对YM155在多种癌症类型（包括去势抵抗性前列腺癌[HRPC]）中的进一步广泛研究，对于开发这种新型治疗方法而言似乎很有价值。[1]

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目的：Survivin是凋亡抑制蛋白家族的成员，是癌症治疗的一个有吸引力的靶点。我们现在研究了Survivin表达的小分子抑制剂YM155对人非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系γ射线敏感性的影响。实验设计：基于细胞死亡、克隆形成存活率和肿瘤异种移植瘤的进展来评估YM155的放射增敏作用。基于组蛋白H2AX磷酸化和DNA聚焦形成来评估辐射诱导的DNA损伤。结果：YM155以浓度和时间依赖的方式诱导NSCLC细胞中Survivin表达的下调。克隆形成存活实验表明，YM155 可提高非小细胞肺癌 (NSCLC) 细胞在体外对 γ 射线的敏感性。YM155 与 γ 射线联合应用可协同增加凋亡细胞的数量和 caspase-3 的活性。组蛋白 γ-H2AX 的免疫荧光分析也显示，YM155 可延缓核 DNA 中辐射诱导的双链断裂的修复。最后，YM155 与 γ 射线联合治疗可显著延缓裸鼠体内 NSCLC 肿瘤异种移植瘤的生长，其效果优于单独使用任一治疗方式。结论：这些结果表明，YM155 可在体外和体内增强 NSCLC 细胞对辐射的敏感性，并且 YM155 的这种作用可能至少部分归因于其通过下调 survivin 表达而抑制 DNA 修复并增强细胞凋亡。 YM155与放射治疗联合治疗作为一种潜在的抗癌策略，值得在临床试验中进行研究。[2]YM155是一种小分子抗凋亡蛋白survivin抑制剂，已被开发为一种潜在的抗癌药物。我们利用肾细胞癌（RCC）小鼠模型研究了YM155与白细胞介素-2（IL-2）的联合治疗。YM155可诱导肾癌（RENCA）细胞的细胞周期阻滞和凋亡。随后，我们将表达荧光素酶的RENCA细胞移植到BALB/c小鼠的左肾和肺中，构建RCC转移模型。在这些原位肾癌和肺转移瘤模型中，YM155和IL-2均能协同降低肿瘤重量、肺转移灶和荧光素染色肿瘤的显像强度。此外，与单药治疗相比，联合用药显著抑制了调节性T细胞和髓源性抑制细胞的增殖。我们建议，YM155 和 IL-2 的组合可以作为 RCC 患者的潜在治疗方式进行测试。[3]

C20H19N4O3+.CL-

398.84286

398.115

C, 60.23; H, 4.80; Cl, 8.89; N, 14.05; O, 12.03

355406-09-6

Sepantronium bromide;781661-94-7

23108256

Light brown to brown solid powder

77.96

0

6

5

28

571

0

NUZWGSASIPTGSA-UHFFFAOYSA-M

InChI=1S/C20H19N4O3.ClH/c1-13-23(9-10-27-2)17-18(24(13)12-14-11-21-7-8-22-14)20(26)16-6-4-3-5-15(16)19(17)25;/h3-8,11H,9-10,12H2,1-2H3;1H/q+1;/p-1

1-(2-methoxyethyl)-2-methyl-3-(pyrazin-2-ylmethyl)benzo[f]benzimidazol-3-ium-4,9-dione;chloride

YM-155 hydrochloride; 355406-09-6; YM-155 (hydrochloride); 1-(2-methoxyethyl)-2-methyl-4,9-dioxo-3-(pyrazin-2-ylmethyl)-4,9-dihydro-1H-naphtho[2,3-d]imidazol-3-ium chloride; Sepantronium (hydrochloride); 1-(2-methoxyethyl)-2-methyl-3-(pyrazin-2-ylmethyl)benzo[f]benzimidazol-3-ium-4,9-dione;chloride; YM-155hydrochloride; YM-155 (chloride);

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。