| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
EGFR
(E/Z)-Afatinib targets the epidermal growth factor receptor (EGFR) family, including EGFR, HER2, HER4, and the mutant EGFRvIII. As an irreversible inhibitor, it forms a covalent bond with a cysteine residue in the ATP-binding pocket of these kinases, leading to sustained inhibition of their activity. This blocks downstream signaling pathways involved in cell proliferation, survival, and angiogenesis. It also affects other targets such as p38 MAPK, Akt, and c-Met/HGFR. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
E/Z-阿法替尼是一种强效的、不可逆的EGFR激酶和Her2/ErbB 2抑制剂。阿法替尼是一种小分子酪氨酸激酶抑制剂（TKI），靶向EGFR、HER-2和HER-4，在体外可逆转ABCG2介导的化疗耐药性，但对多药耐药蛋白ABCB1和ABCC1介导的耐药性无效。[2]
在体外，(E/Z)-阿法替尼是EGFR、HER2和HER4激酶的强效抑制剂。它与这些激酶的ATP结合位点不可逆结合，从而导致持续抑制。研究表明，它能有效抑制表达这些受体的癌细胞系的生长，包括携带EGFR突变和EGFRvIII的癌细胞系。其活性通常通过细胞活力检测和评估下游信号蛋白的磷酸化状态来测定。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
非小细胞肺癌 (NSCLC) 患者表皮生长因子受体 (EGFR) 激酶结构域的基因改变与小分子酪氨酸激酶抑制剂的治疗敏感性相关。尽管第一代可逆性 ATP 竞争性抑制剂在携带此类 EGFR 突变的肺腺癌肿瘤中显示出令人鼓舞的临床疗效，但几乎所有患者最终都会对这些抑制剂产生耐药性。这种对第一代 EGFR 抑制剂的耐药性通常与 EGFR 激酶结构域的获得性 T790M 点突变或 HER3 下游信号通路的激活有关。克服这些耐药机制以及由部分 EGFR 突变驱动的对可逆性 EGFR 抑制剂的原发性耐药性，对于开发有效的靶向治疗方案至关重要。本文表明，BIBW2992 是一种苯胺基喹唑啉类化合物，其设计目的是不可逆地结合 EGFR 和 HER2，能够有效抑制野生型和活化型 EGFR 和 HER2 突变体（包括厄洛替尼耐药亚型）的激酶活性。与此活性相符的是，BIBW2992 在同源细胞转化实验中抑制癌细胞转化，抑制癌细胞系的存活，并在异种移植和转基因肺癌模型中诱导肿瘤消退，其活性优于厄洛替尼。这些发现鼓励对携带 EGFR 或 HER2 癌基因的肺癌患者进行 BIBW2992 的进一步研究。[3]此外，阿法替尼与拓扑替康联合使用，在体内显著抑制了 ABCG2 过表达细胞异种移植瘤的生长。 [2]
在体内，阿法替尼是一种获批用于治疗EGFR突变型非小细胞肺癌（NSCLC）的药物。临床试验表明，与化疗相比，阿法替尼能显著改善患者的无进展生存期。目前，阿法替尼正与其他药物（例如替莫唑胺）联合用于治疗胶质母细胞瘤的研究也在进行中。其活性归因于其对EGFR家族激酶的强效且不可逆的抑制作用。 |
| 酶活实验 |
EGFR激酶：每个100 µL酶反应体系中包含10 μL抑制剂（溶于50% Me2SO）、20 μL底物溶液（200 mM HEPES pH 7.4、50 mM乙酸镁、2.5 mg/mL聚（EY）、5 μg/mL生物合成聚（EY））和20 µL酶制剂。加入50 µL用10 mM氯化镁配制的100 µM ATP溶液启动酶促反应。室温反应30分钟后，加入50 µL终止液（20 mM HEPES pH 7.4中的250 mM EDTA）终止反应。将100 µL样品加入到包被有链霉亲和素的微孔板中，室温孵育60分钟后，用200 µL洗涤液（50 mM Tris，0.05% Tween20）洗涤微孔板。向孔中加入100 µL PY20H Anti-Ptyr:HRP（一种浓度为250 ng/mL的HRP标记的抗PY抗体）。孵育60分钟后，用200 µL洗涤液洗涤微孔板三次。之后，加入100 µL TMB过氧化物酶溶液（A:B=1:1）进行显色。10分钟后终止反应。将微孔板置于酶标仪上，测定450nm处的吸光度值（OD450）。 HER2-IC酶：酶活性测定在50%二甲基亚砜(Me2SO)中进行，可添加或不添加系列稀释的抑制剂。每个100 µL反应体系中包含与EGFR激酶测定类似的组分，并额外添加1000 µM Na3VO4。加入50 µL用10 mM乙酸镁配制的500 µM ATP溶液启动酶促反应。将酶稀释至酶量与磷酸盐掺入生物合成的肽酯(bio-pEY)所需时间呈线性关系。使用20 mM HEPES（pH 7.4）、130 mM NaCl、0.05% Triton X-100、1 mM DTT和10%甘油的混合物稀释酶制剂。室温下测定30分钟后，加入50 µL终止液终止反应。 Src激酶活性测定：每个100 µL反应体系中包含10 µL抑制剂（溶于50% Me2SO）、20 µL酶制剂和20 µL底物溶液（添加1000 µM Na3VO4）。加入50 µL用10 mM乙酸镁配制的1000 µM ATP溶液即可启动酶促反应。BIRK激酶活性测定：将50 µL用8 mM氯化锰和20 mM乙酸镁配制的2 mM ATP溶液加入到含有250 mM Tris（pH 7.4）、10 mM DTT、2.5 mg/mL聚（EY）和5 mg/mL生物素-聚（EY）的底物溶液中，即可启动酶促反应。 HGFR激酶和VEGF2活性测定：在室温下反应20分钟后，加入10 µL 5% H3PO4溶液。然后使用96孔滤膜收集器收集沉淀物，并将其截留在GF/B滤膜上。彻底清洗滤膜，在50°C下干燥1小时，密封，并使用TopCount™或Microbeta b counter™闪烁计数器测量放射性。
(E/Z)-阿法替尼的体外非细胞酶活性测定包括测量其对EGFR、HER2和HER4激酶活性的抑制作用。将纯化的激酶与化合物和肽底物孵育，并使用基于放射性或荧光的测定方法测量底物的磷酸化水平。IC₅₀值由剂量反应曲线确定。 |
| 细胞实验 |
食管鳞状细胞癌（ESCC）是全球第八大常见癌症。表皮生长因子受体（EGFR）在食管癌中常过度表达，因此抗EGFR抑制剂已被用于ESCC的治疗研究。阿法替尼是一种不可逆的ErbB家族受体抑制剂。本研究旨在评估阿法替尼在五种ESCC细胞系（HKESC-1、HKESC-2、KYSE510、SLMT-1和EC-1）中的临床前活性。食管鳞状细胞癌（ESCC）细胞系对阿法替尼敏感，IC50 浓度在低微摩尔范围内（孵育 72 小时：HKESC-1 = 0.002 μM，HKESC-2 = 0.002 μM，KYSE510 = 1.090 μM，SLMT-1 = 1.161 μM，EC-1 = 0.109 μM），最大生长抑制率超过 95%。阿法替尼能以剂量和时间依赖的方式强烈诱导 HKESC-2 和 EC-1 细胞发生 G0/G1 期细胞周期阻滞。HKESC-2 和 EC-1 细胞中 ErbB 家族下游效应分子（如 pAKT、pS6 和 pMAPK）的磷酸化水平显著降低。通过检测 PARP 裂解产物，发现两种细胞系在暴露于阿法替尼 24 小时后均出现细胞凋亡。阿法替尼能有效抑制小鼠HKESC-2肿瘤的生长，且无明显毒性。阿法替尼单药治疗在体外和体内模型中均显示出对食管鳞状细胞癌（ESCC）的优异生长抑制作用，但与5-氟尿嘧啶（5-FU）和顺铂等化疗药物联合使用时未观察到协同效应。总之，阿法替尼可通过将细胞阻滞在G0/G1期并诱导ESCC细胞凋亡来有效抑制细胞增殖。这些发现提示有必要进一步研究阿法替尼作为ESCC治疗药物的潜力。[4]
体外细胞实验中，(E/Z)-阿法替尼的活性检测采用表达EGFR、HER2或HER4的癌细胞系。用该化合物处理细胞后，使用MTT或类似方法评估细胞活力。通过Western blotting使用磷酸化特异性抗体检测受体磷酸化及其下游信号通路的抑制情况。 |
| 动物实验 |
将 H460/MX20 细胞 (3 × 10⁶) 皮下注射到无胸腺裸鼠 (BALB/c-nu/nu，雌雄均有，5 至 6 周龄) 的右侧腹部。当异种移植瘤直径达到 5 mm 时，将小鼠随机分为四组（每组 12 只），然后分别接受以下治疗：(a) 生理盐水（每 3 天一次，共 6 次，腹腔注射）；(b) 拓扑替康（每 3 天一次，共 6 次，腹腔注射，3 mg/kg）；(c) 阿法替尼 (BIBW2992)（每 3 天一次，共 6 次，口服，20 mg/kg）。 (d) 拓扑替康（每3天一次，共6次，腹腔注射，3 mg/kg）联合阿法替尼（每3天一次，共6次，口服，20 mg/kg）（阿法替尼在拓扑替康给药前1小时给予）。每3天用游标卡尺测量肿瘤大小。肿瘤体积（V）采用公式（长×宽²/2）计算。小鼠于第30天处死，切除异种移植瘤并称重。[2]
4只连续6周以上喂食强力霉素的双转基因小鼠接受MRI检查（图4）以记录肺部肿瘤负荷。阿法替尼（BIBW2992）以0.5%甲基纤维素-0.4%聚山梨醇酯-80（吐温80）为载体，每日一次灌胃给予20 mg/kg。雷帕霉素溶于100%乙醇，用5% PEG400和5% Tween 80新鲜稀释后，以2 mg/kg/天的剂量腹腔注射给药。每1或2周对小鼠进行MRI检查，以确定肿瘤体积的缩小情况，并在药物治疗后处死小鼠，用于进一步的组织学和生化研究。免疫组织化学染色方面，每组选取3只荷瘤小鼠，分别接受阿法替尼（BIBW2992）（20 mg/kg）单药治疗或阿法替尼（BIBW2992）（20 mg/kg）联合雷帕霉素（2 mg/kg）治疗，每次间隔24小时，共治疗3次，并在最后一次给药后1小时处死小鼠。所有小鼠在整个实验过程中均饲喂多西环素饮食。同窝小鼠作为对照。[3] 阿法替尼的体内动物研究采用异种移植模型，使用携带EGFR突变的癌细胞系。该化合物采用口服给药，并监测肿瘤生长情况。其疗效通过肿瘤体积缩小和肿瘤组织中受体磷酸化抑制情况来衡量。此外，还进行了药代动力学和毒理学研究以支持其临床应用。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
吸收、分布和排泄
口服给药后，达峰时间 (Tmax) 为 2 至 5 小时。在 20 至 50 mg 的剂量范围内，最大浓度 (Cmax) 和浓度-时间曲线下面积 (AUC0-∞) 的增加略大于剂量比例增加。与口服溶液相比，20 mg 片剂的几何平均相对生物利用度为 92%。此外，与空腹相比，与高脂餐同服时，阿法替尼的全身暴露量分别降低 50% (Cmax) 和 39% (AUC0-∞)。基于来自各种肿瘤类型临床试验的群体药代动力学数据，在服用阿法替尼前 3 小时内或服用后 1 小时内进食，观察到 AUCss 平均降低。在人体内，阿法替尼主要通过粪便排泄。口服15 mg阿法替尼溶液后，85.4%的剂量经粪便排出，4.3%经尿液排出。排出的剂量中88%为原药阿法替尼。阿法替尼在健康男性志愿者中的分布容积为4500 L。如此高的血浆分布容积提示其组织分布可能较广。阿法替尼在健康男性志愿者中的表观系统清除率几何平均值高达1530 mL/min。代谢物：酶促代谢对阿法替尼在体内的影响可忽略不计。蛋白质共价加合物是阿法替尼的主要循环代谢物。生物半衰期：阿法替尼的有效半衰期约为37小时。因此，多次给药后，阿法替尼的稳态血浆浓度可在 8 天内达到，导致累积药物剂量增加 2.77 倍（AUC0-∞）和 2.11 倍（Cmax）。接受阿法替尼治疗超过 6 个月的患者，其末端半衰期估计为 344 小时。 (E/Z)-阿法替尼的分子量为 485.94 g/mol，分子式为 C₂₄H₂₅ClFN₅O₃。它是 E 和 Z 异构体的混合物。可溶于 DMSO。该化合物应在适宜条件下储存，通常为 -20°C，避光防潮。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
肝毒性
阿法替尼治疗期间，血清转氨酶水平升高较为常见，发生率在20%至50%之间，但仅有1%至2%的患者转氨酶水平超过正常值上限的5倍。据报道，0.2%的患者出现肝衰竭，并导致数例死亡。肝毒性似乎是EGFR2蛋白激酶抑制剂的类效应，尽管吉非替尼引起的肝损伤似乎比阿法替尼和厄洛替尼引起的肝损伤更常见且更严重。关于阿法替尼相关肝损伤的具体细节，例如潜伏期、血清酶谱、临床特征和疾病进程，尚未发表。其他EGFR抑制剂，如厄洛替尼和吉非替尼，通常在治疗开始后的数天或数周内引起肝损伤，表现为肝细胞酶升高，病程为中度至重度。免疫超敏反应和自身免疫特征并不常见。有肝硬化病史或因肝脏肿瘤负荷导致肝功能障碍的患者，发生具有临床意义的肝损伤和肝衰竭的风险增加。概率评分：D（可能导致具有临床意义的肝损伤）。 妊娠和哺乳期影响 ◉ 哺乳期用药概述 目前尚无阿法替尼在哺乳期临床应用的信息。由于阿法替尼与血浆蛋白的结合率约为95%，其在母乳中的浓度可能较低。然而，其半衰期约为37小时，这可能导致其在婴儿体内蓄积。生产商建议在阿法替尼治疗期间以及末次给药后两周内停止母乳喂养。 ◉ 对母乳喂养婴儿的影响 截至修订日期，未找到相关的已发表信息。 ◉ 对哺乳和母乳的影响 截至修订日期，未找到相关的已发表信息。 蛋白质结合 阿法替尼在体外与人血浆蛋白的结合率约为95%。阿法替尼通过非共价结合（传统蛋白质结合）和共价结合与蛋白质结合。 阿法替尼的安全性已通过临床应用得到充分证实。常见副作用包括腹泻、皮疹、口腔炎和甲沟炎。更严重的副作用包括间质性肺病、肝毒性和角膜炎。对阿法替尼有严重过敏史的患者禁用。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
药效学
受体突变、扩增和/或受体配体过表达引起的ErbB信号异常会导致恶性表型。EGFR突变定义了一种独特的肺癌分子亚型。在ErbB通路失调的非临床疾病模型中，阿法替尼单药治疗可有效阻断ErbB受体信号传导，从而抑制肿瘤生长或导致肿瘤消退。在非临床和临床环境中，携带常见EGFR激活突变（Del 19、L858R）和一些不常见EGFR突变（位于外显子18 (G719X) 和外显子21 (L861Q)）的非小细胞肺癌(NSCLC)肿瘤对阿法替尼治疗尤为敏感。在携带外显子20插入突变的NSCLC肿瘤中，观察到的非临床和/或临床活性有限。获得性继发性T790M突变是阿法替尼获得性耐药的主要机制，T790M突变等位基因的基因剂量与体外耐药程度相关。在阿法替尼治疗进展的患者中，约50%的肿瘤存在T790M突变。对于这些患者，靶向T790M的EGFR-TKI可作为二线治疗方案。临床前研究提示了其他潜在的阿法替尼耐药机制，临床上也观察到了MET基因扩增。同时，一项开放标签、单臂研究评估了重复给药阿法替尼（每日一次，每次50 mg）对复发或难治性实体瘤患者心脏电生理和QTc间期的影响。最终，本研究未检测到平均QTc间期（即>20毫秒）的显著变化。 (E/Z)-阿法替尼是不可逆EGFR抑制剂阿法替尼的E和Z异构体的混合物。阿法替尼是一种临床批准的药物，用于治疗EGFR突变的非小细胞肺癌。它靶向EGFR、HER2、HER4和EGFRvIII。由于它是已获批准的治疗药物，因此不适用于仅供研究使用。 |
| 分子式 |
C24H25CLFN5O3
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|---|---|
| 分子量 |
485.94
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| 精确质量 |
485.162
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| CAS号 |
439081-18-2
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| 相关CAS号 |
Afatinib oxalate;1398312-64-5
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| PubChem CID |
10184653
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
676.9±55.0 °C at 760 mmHg
|
| 熔点 |
100 - 102 °C
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| 闪点 |
363.2±31.5 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±2.1 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.668
|
| LogP |
3.59
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| tPSA |
88.61
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
8
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| 可旋转键数目(RBC) |
8
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| 重原子数目 |
34
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| 分子复杂度/Complexity |
702
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
CN(C)C/C=C/C(=O)NC1=C(C=C2C(=C1)C(=NC=N2)NC3=CC(=C(C=C3)F)Cl)O[C@H]4CCOC4
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| InChi Key |
ULXXDDBFHOBEHA-CWDCEQMOSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C24H25ClFN5O3/c1-31(2)8-3-4-23(32)30-21-11-17-20(12-22(21)34-16-7-9-33-13-16)27-14-28-24(17)29-15-5-6-19(26)18(25)10-15/h3-6,10-12,14,16H,7-9,13H2,1-2H3,(H,30,32)(H,27,28,29)/b4-3+/t16-/m0/s1
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| 化学名 |
(E)-N-[4-(3-chloro-4-fluoroanilino)-7-[(3S)-oxolan-3-yl]oxyquinazolin-6-yl]-4-(dimethylamino)but-2-enamide
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0579 mL | 10.2893 mL | 20.5787 mL | |
| 5 mM | 0.4116 mL | 2.0579 mL | 4.1157 mL | |
| 10 mM | 0.2058 mL | 1.0289 mL | 2.0579 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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