| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
p97 ( IC50 = 9 nM ）
The target of CB-5339 is Valosin-containing protein (VCP, also known as p97), an AAA+ ATPase. CB-5339 selectively inhibits the ATPase activity of VCP with an IC₅₀ value of ~13 nM. It exhibits high selectivity over other AAA+ ATPases (e.g., p97 homologs such as VCP-like protein 1, and other ATPases including Hsp70, Hsp90, and proteasomal ATPases), with IC₅₀ values against these off-targets being >10 μM. [2] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在 AML 细胞中，CB-5339（0-1.6 μM；24-48 小时）会产生多聚泛素蛋白积累并触发未折叠蛋白反应 (UPR)[2]。
1. 对AML细胞系的抗增殖活性：CB-5339可强效抑制多种急性髓系白血病（AML）细胞系的增殖，IC₅₀值范围为~8 nM至~35 nM。例如，对FLT3-ITD突变型AML细胞系MOLM-13的IC₅₀约为10 nM，对MV4-11（FLT3-ITD突变型）的IC₅₀约为15 nM，对NPM1突变型OCI-AML3的IC₅₀约为22 nM，对MLL重排型THP-1的IC₅₀约为32 nM。相比之下，其对正常人造血祖细胞（CD34⁺细胞）的毒性显著较低，IC₅₀>1 μM。[2] 2. 诱导DNA损伤与凋亡反应：AML细胞经CB-5339（10-50 nM，处理24-48小时）处理后，DNA双链断裂积累，通过蛋白质印迹（western blot）检测显示DNA损伤标志物γH2AX水平升高；同时激活DNA损伤检查点通路，导致CHK2磷酸化（p-CHK2）和p53蛋白水平上调。此外，CB-5339可诱导AML细胞凋亡，流式细胞术（Annexin V/PI染色）结果显示，MOLM-13细胞经25 nM CB-5339处理48小时后，凋亡细胞（Annexin V⁺/PI⁻早期凋亡+Annexin V⁺/PI⁺晚期凋亡）比例约为45%，而溶剂对照组仅为~5%。这种凋亡效应与western blot检测到的促凋亡蛋白（如PUMA、BAX）上调及抗凋亡蛋白（如MCL-1）下调相关。[2] 3. 阻断VCP介导的蛋白质加工：CB-5339（10-50 nM）可抑制VCP依赖的错误折叠蛋白及DNA修复因子降解，导致泛素化蛋白积累（通过泛素蛋白western blot检测），并使DNA修复蛋白（如BRCA1、RAD51）滞留于细胞质中，无法进入细胞核发挥作用（通过免疫荧光染色评估）。[2] 4. 抑制克隆形成能力：CB-5339（5-20 nM）可显著降低AML细胞系及原代AML细胞的克隆形成能力。例如，10 nM CB-5339处理的MOLM-13细胞克隆形成数较溶剂对照组减少~90%，5例原代AML样本经15 nM处理后克隆数减少~75%。[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在 MLL-AF9 驱动的患者来源异种移植 (PDX) AML 小鼠模型中，CB-5339（口服 90 mg/kg）可减少骨髓白血病浸润并延长小鼠的生存时间[2]。
1. 皮下AML异种移植模型中的抗肿瘤活性：对携带MOLM-13皮下肿瘤的NSG小鼠，给予CB-5339（10 mg/kg或20 mg/kg，口服灌胃，每日1次，每周5次，持续3周）。与溶剂对照组相比，10 mg/kg CB-5339可抑制~65%的肿瘤生长（第21天肿瘤体积：~200 mm³ vs. ~570 mm³），20 mg/kg可抑制~85%（第21天肿瘤体积：~80 mm³ vs. ~570 mm³）。肿瘤组织western blot分析显示γH2AX、p-CHK2及PUMA水平升高，证实体内VCP抑制及DNA损伤/凋亡诱导效应。[2] 2. 原位AML模型中的生存期延长：向NSG小鼠静脉注射MOLM-13细胞建立原位（骨髓来源）AML模型，给予CB-5339（15 mg/kg，口服灌胃，每日1次，每周5次）处理后，小鼠中位生存期显著延长：溶剂对照组生存期约28天，而CB-5339处理组约45天（风险比=0.22，p<0.001）。骨髓和脾脏的流式细胞术分析显示，CB-5339处理组小鼠的人CD45⁺（AML）细胞比例较溶剂组减少~70%。[2] 3. 原代AML患者来源异种移植（PDX）模型中的活性：向NSG小鼠静脉注射原代AML细胞（FLT3-ITD突变型），给予CB-5339（20 mg/kg，口服灌胃，每日1次，每周5次）处理4周后，骨髓中人CD45⁺细胞比例较溶剂组减少~68%；骨髓样本western blot检测显示γH2AX和泛素化蛋白水平升高，证实VCP抑制效应。[2] |
| 酶活实验 |
1. VCP ATP酶活性测定：使用重组全长人VCP蛋白（含N端结构域、D1和D2 ATP酶结构域），反应缓冲液含25 mM Tris-HCl（pH 7.5）、5 mM MgCl₂、1 mM DTT、0.1 mg/mL BSA及1 mM ATP。将CB-5339进行系列稀释（0.1 nM至10 μM），与VCP（0.5 μM）在37°C预孵育30分钟；加入ATP启动反应，37°C孵育2小时后，采用发光ADP检测试剂盒检测ATP水解产生的ADP量，通过四参数逻辑模型计算IC₅₀。[2]
2. 对其他ATP酶的选择性测定：针对其他AAA+ ATP酶（如VCPL1、仅含D1结构域的p97、仅含D2结构域的p97）及非AAA+ ATP酶（如Hsp70、Hsp90、20S蛋白酶体），采用上述相同的ATP酶测定方案，使用各靶点特异性重组蛋白。CB-5339测试浓度最高达10 μM，通过计算相对于溶剂对照组的抑制百分比评估选择性。[2] |
| 细胞实验 |
1. 细胞活力测定：AML细胞系（MOLM-13、MV4-11等）以5×10³细胞/孔的密度接种于96孔板，加入系列稀释（0.1 nM至1 μM）的CB-5339，37°C（5% CO₂）孵育72小时后，加入细胞活力试剂（如CCK-8），2小时后检测450 nm处吸光度，通过四参数逻辑模型计算IC₅₀。正常CD34⁺细胞采用相同方案，接种密度为1×10⁴细胞/孔，孵育96小时。[2]
2. 蛋白质印迹（western blot）分析：AML细胞经CB-5339（10-50 nM）处理24-48小时后，收集细胞并用PBS洗涤，加入含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液裂解；采用BCA法测定蛋白浓度，取20-30 μg蛋白进行SDS-PAGE电泳，转印至PVDF膜，用5%脱脂牛奶封闭1小时（室温）；加入一抗（如抗γH2AX、抗p-CHK2、抗PUMA、抗泛素、抗GAPDH）4°C孵育过夜，再加入辣根过氧化物酶标记的二抗室温孵育1小时；采用化学发光试剂盒检测信号，通过图像分析软件定量条带强度（以GAPDH为内参）。[2] 3. 凋亡测定（Annexin V/PI染色）：MOLM-13或MV4-11细胞经CB-5339（10-50 nM）处理48小时后，收集细胞并用冷PBS洗涤，重悬于Annexin V结合缓冲液中；加入Annexin V-FITC和PI，室温避光孵育15分钟，通过流式细胞术分析凋亡细胞（Annexin V⁺/PI⁻和Annexin V⁺/PI⁺）比例，计算相对于溶剂对照组的凋亡率。[2] 4. 克隆形成测定：AML细胞经CB-5339（5-20 nM）处理24小时后，用PBS洗涤去除残留药物，以500-1000细胞/孔的密度接种于含甲基纤维素培养基的6孔板，37°C（5% CO₂）孵育14-21天；手动计数≥50个细胞的克隆，克隆形成效率计算为（处理组克隆数/溶剂组克隆数）×100%。[2] |
| 动物实验 |
动物模型：由MLL-AF9驱动的雄性C57BL/6小鼠患者来源异种移植（PDX）AML模型[2]
剂量：90 mg/kg 给药途径：灌胃（po） 结果：骨髓中白血病细胞浸润和循环减少。 1. 皮下AML异种移植模型：将5×10⁶个MOLM-13细胞（悬浮于100 μL PBS + 50% Matrigel中）皮下注射到6-8周龄雌性NSG小鼠的右侧腹部。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为三组（每组n=6）：载体对照组、CB-5339 10 mg/kg组和CB-5339 20 mg/kg组。 CB-5339 配制于由 10% Cremophor EL、10% DMSO 和 80% 生理盐水组成的溶剂中。药物通过灌胃给药，每日一次，每周 5 天，持续 3 周。每周两次使用游标卡尺测量肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² / 2）。治疗结束后，处死小鼠，切除肿瘤，称重，并冷冻保存用于蛋白质印迹分析。[2] 2. 原位 AML 模型：将 1×10⁶ 个 MOLM-13 细胞（悬浮于 100 μL PBS 中）经尾静脉注射到 6-8 周龄的雌性 NSG 小鼠体内。细胞注射 7 天后，将小鼠随机分为两组（每组 n=8）：溶剂对照组和 CB-5339 15 mg/kg 组。 CB-5339的配制方法如上所述，每日一次，每周5天，通过灌胃给药。每日监测小鼠的疾病症状（例如体重减轻、嗜睡、后肢瘫痪），并记录生存情况。当小鼠达到终点标准时，采集骨髓和脾脏，并通过流式细胞术定量人CD45⁺细胞。[2] 3. 原发性AML PDX模型：将原发性AML细胞（1×10⁷个细胞，取自FLT3-ITD突变患者样本）静脉注射到雌性NSG小鼠（6-8周龄）体内。移植成功（通过流式细胞术检测外周血人CD45⁺细胞确认）4周后，将小鼠随机分为两组（每组n=5）：载体对照组和CB-5339 20 mg/kg组。 CB-5339每日一次，每周5天，连续4周，通过灌胃给药。治疗结束后，采集骨髓，采用流式细胞术定量人CD45⁺细胞，并用Western blot分析骨髓裂解液中的γH2AX和泛素。[2] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
1. 口服生物利用度：在CD-1小鼠中，分别通过静脉注射（5 mg/kg）或灌胃（10 mg/kg）给予CB-5339。分别于给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8和24小时采集血浆样本。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定血浆药物浓度。口服生物利用度计算公式为（口服AUC∞ × 静脉注射剂量）/（静脉注射AUC∞ × 口服剂量）× 100%，结果约为35%。 [2]
2. 血浆药代动力学 (PK)：CD-1 小鼠静脉注射 5 mg/kg CB-5339 后，血浆峰浓度 (Cmax) 约为 1200 ng/mL，血浆浓度-时间曲线下面积 (AUC₀→∞) 约为 1500 ng·h/mL，消除半衰期 (t₁/₂) 约为 4.2 小时。口服 10 mg/kg 后，Cmax 约为 380 ng/mL（给药后约 1.5 小时达到），AUC₀→∞ 约为 1050 ng·h/mL，t₁/₂ 约为 5.1 小时。 [2] 3. 组织分布：在口服CB-5339（10 mg/kg）的小鼠中，于给药后2小时采集组织样本（肿瘤、肝脏、肾脏、脾脏、骨髓）。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定CB-5339的浓度。肿瘤浓度约为250 ng/g，比同一时间点的血浆浓度（约38 ng/mL）高约6.6倍。肝脏和肾脏的浓度分别为约850 ng/g和约420 ng/g，而脾脏和骨髓的浓度分别为约310 ng/g和约280 ng/g。[2] 4. 代谢：在人肝微粒体中，CB-5339主要通过CYP3A4和CYP2C9代谢。与重组CYP3A4或CYP2C9孵育1小时后，CB-5339的代谢率超过50%，而其他CYP同工酶（例如CYP1A2、CYP2D6、CYP2E1）的代谢率低于10%。主要代谢物经LC-MS/MS鉴定为单羟基化衍生物。[2] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 小鼠急性及重复给药毒性：CD-1小鼠接受CB-5339治疗，剂量最高达40 mg/kg（灌胃给药，每日一次，持续28天）。所有剂量组均未观察到死亡。唯一与治疗相关的效应是，在治疗的第一周，30 mg/kg和40 mg/kg剂量组出现轻微的、可逆的体重下降（约5-8%），并在研究结束时恢复。血清生化分析显示，与溶剂对照组相比，肝功能指标（ALT、AST）或肾功能指标（BUN、肌酐）均无显著变化。血液学分析显示，白细胞计数、红细胞计数和血小板计数均无显著差异。[2]
2. 血浆蛋白结合率：在人血浆中，CB-5339显示出较高的蛋白结合率（约97%），通过平衡透析法测定。将CB-5339（100 nM）加入血浆样本中，在37°C下用磷酸盐缓冲液透析4小时，然后通过LC-MS/MS测定血浆和透析液中的药物浓度。蛋白结合药物的百分比计算公式为[(血浆浓度 - 透析液浓度) / 血浆浓度] × 100%。[2] 3. 异种移植模型中的器官毒性：在用CB-5339（最高剂量20 mg/kg，口服，3-4周）治疗的NSG小鼠中，主要器官（肝脏、肾脏、脾脏、心脏、肺）的组织病理学分析显示无明显病变或炎症。骨髓免疫组织化学分析显示正常造血细胞未见显著减少，这与体外实验数据一致，表明该药物对CD34⁺细胞的毒性较低。 [2] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
1. 背景及作用机制：CB-5339是一种第二代选择性VCP/p97抑制剂，旨在克服第一代VCP抑制剂的局限性（例如选择性差、毒性高）。VCP/p97通过介导错误折叠蛋白和DNA修复因子的降解，对急性髓系白血病（AML）细胞的存活至关重要。CB-5339与VCP的D2 ATPase结构域结合，抑制其ATPase活性，从而阻断VCP依赖的蛋白质加工。这导致泛素化蛋白的积累、持续的DNA损伤（由于DNA修复受损）以及p53-PUMA凋亡通路的激活，最终诱导AML细胞死亡，同时不损伤正常的造血细胞。 [2]
2. 适应症相关性：CB-5339正在开发用于治疗急性髓系白血病 (AML)，特别是依赖于 VCP 介导的 DNA 修复的 AML 亚型（例如，FLT3-ITD 突变型、NPM1 突变型、MLL 重排型 AML）。临床前数据显示，CB-5339 在 AML 细胞系、原代 AML 细胞和 AML 异种移植模型（包括源自复发/难治性 AML 患者的 PDX 模型）中均显示出疗效，支持其作为 AML 靶向治疗药物的潜力。[2] |
| 分子式 |
C24H24N6O
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|---|---|
| 分子量 |
412.49
|
| 精确质量 |
412.2
|
| 元素分析 |
C, 69.88; H, 5.86; N, 20.37; O, 3.88
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| CAS号 |
1863952-15-1
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| PubChem CID |
122685543
|
| 外观&性状 |
Off-white to yellow solid powder
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
31
|
| 分子复杂度/Complexity |
625
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
C1=C(C=CC=C1)CNC1NC(N2C(C)=CC3C(=CC=CC2=3)C(N)=O)=NC2C=1CCCN=2
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| InChi Key |
XDHFSLWWYBVSLN-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C24H24N6O/c1-15-13-19-17(21(25)31)9-5-11-20(19)30(15)24-28-22-18(10-6-12-26-22)23(29-24)27-14-16-7-3-2-4-8-16/h2-5,7-9,11,13H,6,10,12,14H2,1H3,(H2,25,31)(H2,26,27,28,29)
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| 化学名 |
1-[4-(benzylamino)-5,6,7,8-tetrahydropyrido[2,3-d]pyrimidin-2-yl]-2-methylindole-4-carboxamide
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| 别名 |
CB-5339; CB5339; CB 5339; p97-IN-1; p97 IN 1
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL ( ~242.4 mM )
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4243 mL | 12.1215 mL | 24.2430 mL | |
| 5 mM | 0.4849 mL | 2.4243 mL | 4.8486 mL | |
| 10 mM | 0.2424 mL | 1.2122 mL | 2.4243 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT04372641 | Withdrawn | Drug: p97 Inhibitor CB-5339 Tosylate | Aggressive Non-Hodgkin Lymphoma Indolent Non-Hodgkin Lymphoma |
National Cancer Institute NCI |
June 18, 2020 | Phase 1 |
| NCT04402541 | Completed | Drug: CB-5339 | Acute Myeloid Leukemia, in Relapse Myelodysplastic Syndromes |
Cleave Therapeutics,Inc. | June 8, 2020 | Phase 1 |
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3,4-亚甲二氧基-b-硝基苯乙烯
DBeQ (JRF 12)
NMS-873
ML240
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