Cgp 52432

GABAB receptor (IC50 = 85 nM)

GABAB 受体拮抗剂 CGP52432 的 IC50 为 85 nM，分别比控制谷氨酸流出和生长抑素的受体低 35 倍和 100 倍 [1]。

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如前所述，GABAB受体是异质的。大鼠大脑皮层轴突末端存在三种药理学上不同的受体亚型，分别介导γ-氨基丁酸（GABA）、谷氨酸或生长抑素释放的抑制。我们研究了上述受体亚型上的新型GABAB受体拮抗剂[3-[[（3,4-二氯苯基）甲基]氨基]丙基]（二乙氧基甲基）次膦酸（CGP52432）。（-）-巴氯芬对K（+）诱发的大鼠皮质突触体释放GABA、谷氨酸或生长抑素的影响被CGP52432拮抗。该药物对GABA自身受体（0.085微M）的IC50分别比调节生长抑素和谷氨酸溢出的受体低35倍和100倍。在自身受体上，计算出的CGP52432的pA2为7.70，这使得该药物在该受体上的效力比phaclofen强约1000倍。CGP52432的效力和选择性特征表明，该药物是迄今为止研究大鼠大脑皮层末端GABAB自身受体的最合适工具[1]。

在高架十字迷宫中，CGP52432（10、30 mg/kg）对总头部倾斜或总手臂进入没有影响[2]。在大鼠中，当 CGP52432（100 nmol/kg，静脉注射或 1 nmol/kg，静脉注射）消除 GABA（50 μmol/kg，静脉注射）对缺血期间增强的肾交感神经活动 (RSNA) 的抑制作用时，GABA 的肾脏保护作用被消除[3]。

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为此，我们从出生后第14-28天开始用选择性GABAB受体激动剂R-巴氯芬（2mg/kg，皮下注射）、GABAB接收器拮抗剂CGP52432（10mg/kg和30mg/kg）或赋形剂治疗雄性BALB/c小鼠幼崽（P）。然后在一系列行为测试中评估这些小鼠成年后（P62以后）的焦虑行为，包括：；应激诱导高温（SIH）试验、防御性大理石埋藏（DMB）、高架迷宫（EPM）和强迫游泳试验（FST）。产后R-巴氯芬治疗导致EPM中焦虑样行为增加，如回避和行为学测量所示。其他行为指标没有显著改变。有趣的是，在生命早期用CGP52432阻断GABAB受体不会导致情绪行为的改变。这些数据表明，在早期生活中，GABAB受体信号传导在成年后的焦虑行为编程中起着重要作用。这些影响背后的潜在神经发育过程仍有待发现。[2]

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静脉注射荷包牡丹碱或CGP52432对GABA诱导的缺血性AKI改善的影响[3]
缺血前GABA治疗（50μmol/kg，静脉注射）显著抑制了缺血期RSNA的增强（图1a、b、d）。选择性GABAB受体拮抗剂CGP52432（10和100 nmol/kg，静脉注射）以剂量依赖的方式抑制了这种抑制作用（图1c，d）。相反，选择性GABAA受体拮抗剂荷包牡丹碱（1和10μmol/kg，静脉注射）治疗未能减弱GABA对RSNA的抑制作用（图1d）。

如图2所示，再灌注29小时后，缺血45分钟的大鼠肾功能明显恶化。与假手术大鼠相比，赋形剂治疗的AKI大鼠的血尿素氮（BUN）、血浆肌酐（PCr）浓度和尿流量（UF）显著增加，肌酐清除率（CCr）显著降低，表明肾功能障碍。向缺血性AKI大鼠静脉注射GABA（50μmol/kg）显著减轻了I/R诱导的肾功能障碍，这种改善被静脉注射100nmol/kg的CGP52432逆转。然而，GABA的肾脏保护作用不受荷包牡丹碱（1和10μmol/kg）或10 nmol/kg CGP52432的影响。此外，我们证实，单独静脉注射10μmol/kg的荷包牡丹碱对i/R诱导的肾损伤没有影响（数据未显示）。

组织学检查显示，再灌注29小时后，赋形剂治疗的AKI大鼠肾脏出现严重病变。与假手术大鼠的肾脏相比，这些变化的特征是内髓质小管中的蛋白质管型（图3b），内髓质条外区的髓质充血和出血（图3g），外髓质条外区管状坏死（图3l）（图3a、f、k）。向缺血性AKI大鼠静脉注射GABA可显著减轻所有病变的发展（表1；图3c，h，m）。此外，100 nmol/kgCGP52432（图3e，j，o）消除了这些GABA诱导的改善，而10μmol/kg，静脉注射，荷包牡丹碱对GABA的作用没有影响（图3d，i，n）。

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静脉注射CGP52432对GABA诱导的缺血性AKI改善的影响[3]
如图4所示，0.1 nmol/kg静脉注射CGP52432可部分减弱GABA（50μmol/kg）对RSNA的抑制作用，而1 nmol/kg的静脉注射CGP52432几乎消除了GABA的作用。同样，0.1 nmol/kg静脉注射CGP52432可部分减弱GABA诱导的肾功能障碍改善，但1 nmol/kg的静脉注射CGP52432可几乎消除GABA诱导的改善（图5）。Bicuulline（10nmol/kg，i.c.v.）未能影响GABA诱导的肾脏保护作用（数据未显示）。

GABAB受体拮抗剂CGP52432（100 nmol/kg，静脉注射或1 nmol/kg的静脉注射）治疗消除了50μmol/kg，静脉内注射GABA对缺血期间增强的肾交感神经活动（RSNA）的抑制作用，从而消除了GABA的肾脏保护作用。侧脑室注射0.5μmol/kg GABA或静脉注射1μmol/kg巴氯芬（一种选择性GABAB受体激动剂）可预防i/R诱导的肾损伤，相当于静脉注射GABA。相反，静脉注射GABAA受体拮抗剂10μmol/kg荷包牡丹碱治疗，未能影响GABA对缺血性AKI的预防作用。因此，我们得出结论，中枢神经系统中的GABAB受体刺激，而不是外周GABAB接收器刺激，通过抑制肾缺血诱导的RSNA增强，介导了GABA对缺血性AKI的预防作用[3]。

本研究使用了两组雄性幼鼠。一组分别接受R(+)巴氯芬盐酸盐（2 mg/kg；Sigma；n = 10）或载体（磷酸盐缓冲液，PBS；n = 13）治疗。另一组分别接受GABAB受体拮抗剂CGP52432（10、30 mg/kg；n = 10）或载体（PBS；n = 10）治疗。药物每日新鲜配制，用PBS溶解，涡旋振荡并短暂超声处理。R(+)巴氯芬和CGP52432的剂量选择基于先前在成年小鼠中显示出良好耐受性的剂量（Colombo等，2001；Voigt等，2011）。所有药物均采用皮下注射，每日一次，从出生后第14天（P14）至第28天（P28），每次注射0.05毫升。选择此给药方案是因为已有研究表明，P14-28是药物作用于GABA能系统发育的易感期[2]。除比库啉和CGP52432外，其他药物或溶剂均在缺血开始前5分钟注射；而比库啉和CGP52432则在缺血开始前10分钟注射，以研究这些药物对GABA诱导的肾脏保护作用。在假手术对照组大鼠中，左肾的处理方法与上述相同，但不进行夹闭。缺血45分钟的大鼠在再灌注后被置于代谢笼中饲养24小时，并收集5小时的尿液样本。尿液收集结束后，从胸主动脉抽取血样，然后在戊巴比妥麻醉（50 mg/kg，腹腔注射）下切除左肾。通过离心（1630 g，15 分钟，4°C）从血液中分离血浆，并用于测定肾功能（如下所述），同时用光学显微镜检查肾脏组织进行组织学分析。CGP52432 溶于生理盐水（0.9%）。[3]

[1]. CGP 52432: a novel potent and selective GABAB autoreceptor antagonist in rat cerebral cortex. Eur J Pharmacol. 1993 Jun 24;237(2-3):191-5.

[2]. Activation but not blockade of GABAB receptors during early-life alters anxiety in adulthood in BALB/c mice. Neuropharmacology. 2014 Jun;81:303-10.

[3]. Mechanisms underlying the renoprotective effect of GABA against ischaemia/reperfusion-induced renal injury in rats. Clin Exp Pharmacol Physiol. 2015 Mar;42(3):278-86.

3-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]丙基-(二乙氧基甲基)膦酸是一种二氯苯。

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GABA抑制外周交感神经系统的机制有多种，包括神经节阻滞和/或抑制神经末梢的递质释放。^{9, 23, 24} 在本研究中，由于我们未使用离体组织，因此未探讨GABA是否抑制外周交感神经的去甲肾上腺素（NA）溢出。事实上，在急性肾损伤（AKI）大鼠的外周交感神经中，全身应用GABA可通过抑制神经末梢的NA释放来预防缺血/再灌注（I/R）诱导的肾损伤，即使在使用CGP52432阻断GABA的作用后，该作用仍然存在。然而，本研究表明，在脑室内注射CGP52432的大鼠中，全身应用GABA未能预防I/R诱导的肾损伤。这些研究结果表明，GABA的肾脏保护作用似乎更多地依赖于中枢神经系统（CNS）的神经传递，而非外周交感神经介导的作用。
总之，GABA通过激活GABAB受体（而非GABAA受体）抑制缺血期间增强的肾交感神经活动（RSNA）和缺血/再灌注（I/R）后增加的去甲肾上腺素（NA）溢出，并且这种作用主要集中于中枢神经系统活动，而非交感神经系统的外周神经活动。这些抑制作用可能是GABA对I/R引起的肾损伤发挥肾脏保护作用的原因。[3]

C15H24CL2NO4P

384.2351

383.082

C, 46.89; H, 6.30; Cl, 18.45; N, 3.65; O, 16.66; P, 8.06

139667-74-6

139667-74-6

132252

White to off-white solid powder

1.258g/cm3

544.4ºC at 760mmHg

283.1ºC

1.1E-12mmHg at 25°C

1.524

4.491

77.6

2

5

11

23

369

0

CCOC(OCC)P(=O)(CCCNCC1=CC(=C(C=C1)Cl)Cl)O

GJZVQXWEIYRHBE-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C15H24Cl2NO4P/c1-3-21-15(22-4-2)23(19,20)9-5-8-18-11-12-6-7-13(16)14(17)10-12/h6-7,10,15,18H,3-5,8-9,11H2,1-2H3,(H,19,20)

Phosphinic acid, (3-(((3,4-dichlorophenyl)methyl)amino)propyl)(diethoxymethyl)-

Cgp 52432; Cgp52432;Cgp 52,432; Cgp-52,432; Phosphinic acid, P-[3-[[(3,4-dichlorophenyl)methyl]amino]propyl]-P-(diethoxymethyl)-; 4ZH667RFW5; DTXSID20161147; Phosphinic acid, (3-(((3,4-dichlorophenyl)methyl)amino)propyl)(diethoxymethyl)-; (3-(((3,4-Dichlorophenyl)methyl)amino)propyl)(diethoxymethyl) phosphinic acid; ...; 139667-74-6; Cgp-52432.

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~5 mg/mL (~13.01 mM)
H2O : ~4 mg/mL (~10.41 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。