CP-55940 (CP 55,940)

Cannabinoid receptor

CP55940以独立的浓度方式恢复线粒体膜电位（ΔΨm）并抑制PSEN1 E280A ChLN中ROS的产生。[2]
CP55940以CB1受体非依赖的方式恢复ΔΨm，但减少PSEN1 E280A ChLN中部分依赖CB1受体的ROS产生。[2]
CP55940以CB1Rs非依赖的方式减少细胞内sAβPPβf聚集，但它减少了PSEN1 E280A ChLN中部分依赖CB1Rs的氧化DJ-1。[2]
CP55940以独立于CB1Rs的方式阻断PSEN1 E280A ChLN的凋亡。[2]
CP55940以独立于CB1Rs的方式抑制tau磷酸化PSEN1 E280A ChLN。[2]
CP55940降低了PSEN 1 E280A ChLN中独立于CB1Rs的eAβ42蛋白片段的水平。[2]
CP55940不能恢复PSEN1 E280A ChLN中的Ca2+失调。[2]

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BAY 59-3074[3-[2-氰基-3-（三氟甲基）苯氧基]苯基-4,4,4-三氟-1-丁烷磺酸盐]是一种结构新颖的大麻素CB1/CB2受体部分激动剂，具有镇痛作用。[1]

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在两种反向激动剂（以下简称SR）存在的情况下，CP几乎完全抑制了细胞内sAβPPβf和p-Tau的聚集，增加了ΔΨm，减少了DJ-1Cys106-SH残基的氧化，并阻断了突变ChLN中c-Jun、p53、PUMA和caspase-3的激活，与CB1Rs信号传导无关。CP还抑制部分依赖CB1R的活性氧物种的产生。尽管CP降低了细胞外Aβ42，但它无法逆转突变ChLN对乙酰胆碱刺激的Ca2+内流失调反应。在SR加CP存在或不存在的情况下，暴露于抗Aβ抗体6E10（1:300）完全恢复了突变ChLN对乙酰胆碱的瞬时[Ca2+]i信号。[2]

本研究旨在通过高灵敏度的体内试验确认其受体结合谱。在28次训练后，大鼠（n=10）学会了以固定比例（10，食物强化双杠杆程序）区分BAY 59-3074（0.5mg/kg，口服，t-1h）和载体。BAY 59-3074呈全身剂量依赖性（ED（50）：0.081 mg/kg，口服），给药后0.25至4小时可检测到提示。选择性大麻素CB1受体拮抗剂SR 141716A[N-（哌啶-1-基）-5-（4-氯苯基）-1-（2,4-二氯苯基）-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐]阻断了BAY 59-3074的鉴别作用（ID50:1.79mg/kg，i.p.）。 腹腔注射BAY 59-3074（ED50值：0.41 mg/kg）和参考大麻素BAY 38-7271[（-）-（R）-3-（2-羟基甲基茚基-4-氧基）苯基-4,4,4-三氟-1-丁磺酸酯，0.011 mg/kg]、CP 55940[（-”-顺-3-[2-羟基-4（1,1-二甲基庚基）苯基]-反-4-（3-羟基丙基）环己醇，0.013 mg/kg]、HU-210[（-WIN55212-2[（R）-4,5-二氢-2-甲基-4（4-吗啉基甲基）-1-（1-萘羰基）-6H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-6-酮，0.41mg/kg]和（-）-Delta9-四氢大麻酚（0.41mg/kg）。具有镇痛作用的非大麻素，如吗啡、阿米替林、卡马西平、加巴喷丁和巴氯芬，并没有推广到这一线索。结果表明，BAY 59-3074的鉴别刺激作用是由大麻素CB1受体激活特异性介导的[1]。

受体结合试验。[3]
1.CB1测定。使用中国仓鼠卵巢（CHO）细胞的膜制剂测定CB1受体亲和力，其中人大麻素CB1受体与[3H]CP 55940作为放射性配体稳定转染19。在将新制备的细胞膜制剂与[3H]-放射性配体孵育后，加入或不加入测试化合物，通过玻璃纤维过滤器过滤进行结合配体和游离配体的分离。通过液体闪烁计数测量过滤器上的放射性。将至少三次独立测量的IC50值合并，并使用Cheng和Prusoff的假设转换为Ki值。

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CB2测定。[3]
使用中国仓鼠卵巢（CHO）细胞的膜制剂测定CB2受体亲和力，其中人大麻素CB2受体与[3H]CP 55940作为放射性配体稳定转染。在将新制备的细胞膜制剂与[3H]-放射性配体孵育后，加入或不加入测试化合物，通过玻璃纤维过滤器过滤进行结合配体和游离配体的分离。通过液体闪烁计数测量过滤器上的放射性。将至少两次独立测量的IC50值合并，并使用Cheng和Prusoff的假设转换为Ki值。

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体外药理学。[3]
花生四烯酸释放的测量。用克隆在中国仓鼠卵巢（CHO）细胞中的人CB1受体评估CB1受体拮抗作用。CHO细胞在添加了10%热灭活胎牛血清的Dulbecco改良Eagle培养基（DMEM）培养基中生长。吸取培养基，用DMEM代替，不含胎牛血清，但含有[3H]-花生四烯酸，并在细胞培养炉中孵育过夜（5%CO2/95%空气；37°C；水饱和气氛）。在此期间，[3H]-花生四烯酸被掺入膜磷脂中。在测试日，吸出培养基，用0.5mL含0.2%牛血清白蛋白（BSA）的DMEM洗涤细胞三次。WIN 55212-2刺激CB1受体导致PLA2激活，随后[3H]-花生四烯酸释放到培养基中。这种WIN 55212-2诱导的释放被CB1受体拮抗剂浓度依赖性地拮抗。试验化合物的CB1拮抗效力表示为pA2值。

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P-糖蛋白测定。[3]
评估了人MDR1 P-糖蛋白泵在PK1 LLC MDR细胞单层上转移化合物的能力。使用文献31中基本描述的运输方法。在实验开始时，以1μg/mL的浓度将化合物添加到细胞层的一侧。测量了底部到顶部的运输以及顶部到底部的运输。P-糖蛋白（Pgp）因子表示为自下而上运输和自上而下运输的比率。膜通过率表示为在添加化合物后3小时从底部到顶部和从顶部到底部运输的化合物的平均百分比。使用LC/MS法进行化合物检测。

细胞分析[2]
检测方案[2]
WT和PSEN1 E280A ChLNs细胞培养测定的方法是相同的。初始CP 55940筛选在10 nM和1μM之间进行了至少两次，一式三次。随后，确定CP 55940（1μM）为进一步实验的最佳浓度。ChLN分为四组：1）未治疗组；2） 分别用终浓度为1μM的SR141716（CB1受体反向激动剂）和SR144528（CB2受体反向激动器）治疗（以下简称SR）；3） CP 55940（或CP）；4） RS+CP55940（也称为SR+CP鸡尾酒）。为了阻断eAβ42，在分化后，在有或没有CP或CP+RS的情况下，将野生型和突变型ChLN与抗Aβ42抗体6E10（RCm中1:300）一起孵育四天。

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野生型（WT）和PSEN1 ChLN仅暴露于CP（1μM）或在CB1和CB2受体（CB1R、CB2Rs）反向激动剂SR141716（1μM）和SR144528（1μM.）存在的情况下暴露24小时。对未治疗或治疗的神经元进行生化和功能分析评估[2]。

体内药理学。1. CP 55940 诱导大鼠低血压。雄性正常血压大鼠（225-300 g；Harlan，荷兰霍斯特）用戊巴比妥钠（80 mg/kg，腹腔注射）麻醉。通过插入左侧颈动脉的套管，使用 Spectramed DTX-plus 压力传感器（Spectramed BV，荷兰比尔特霍芬）测量血压。经 Nihon Kohden 载波放大器（AP-621G 型；Nihon Kohden BV，荷兰阿姆斯特丹）放大后，血压信号通过 Po-Ne-Mah 数据采集程序（Po-Ne-Mah Inc.，美国斯托尔斯）记录到个人电脑（Compaq Deskpro 386s）上。心率由脉动压力信号计算得出。所有化合物均以1%甲基纤维素微混悬液的形式口服给药，于麻醉诱导前30分钟给药，麻醉诱导后60分钟给予CB1受体激动剂CP-55,940。注射体积为10 mL/kg。血流动力学稳定后，静脉注射CB1受体激动剂CP-55,940（0.1 mg/kg），并观察到降压作用²²。与溶媒对照组相比，CP-55,940给药后的典型血压约为60%^[3]。

[1]. Eur J Pharmacol.2004 Nov 28;505(1-3):127-33.
[2]. J Alzheimers Dis. 2021; 82(Suppl 1): S359–S378.
[3]. J Med Chem. 2004 Jan 29;47(3):627-43.

合成了一系列新型3,4-二芳基吡唑啉类化合物，并对其在人CB₁和人CB₂受体活性进行了评价。这些3,4-二芳基吡唑啉类化合物表现出强效的体外CB₁受体拮抗活性，且总体上对CB₁和CB₂受体亚型具有较高的选择性。一些关键化合物在口服给药后，在CB₁受体激动剂诱导的血压升高模型和CB₂受体激动剂诱导的体温过低模型中均显示出显著的体内药理活性。通过对消旋体67进行手性分离，并结合结晶和X射线衍射分析，确定了其对映体80（SLV319）在C₄位的绝对构型为4S。生物分析研究显示，候选药物 80 的中枢神经系统/血浆浓度比值较高。分子建模研究表明，80 与已知的 CB(1) 受体拮抗剂利莫那班 (SR141716A) 具有较为接近的三维结构重叠。对 80 的 X 射线衍射数据进行进一步分析，发现其分子内存在氢键，这一发现也得到了计算方法的证实。计算模型和 X 射线衍射数据表明，体内无活性化合物 6 的分子内氢键模式与 80 不同。此外，对 6 的 X 射线衍射研究表明，其分子间堆积比 80 更紧密，这可能也是其体内吸收较差的原因之一。用 -NHCH(3) 基团取代脒基 -NH(2) 部分被证明是提高该系列化合物口服生物利用度的关键改变，最终鉴定出化合物 80。[3]

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背景：阿尔茨海默病 (AD) 的特征是胆碱能神经元 (ChN) 的结构损伤、死亡和功能障碍，这是由于细胞内淀粉样β蛋白 (Aβ) 聚集、细胞外神经炎性斑块以及 tau 蛋白 (p-Tau) 的过度磷酸化所致。目的：评估合成大麻素 CP 55940 (CP) 对 PSEN1 E280A 胆碱能样神经细胞 (PSEN1 ChLN)（一种家族性 AD 的天然模型）的影响。方法：将野生型 (WT) 和 PSEN1 ChLN 单独暴露于 CP (1μM) 或在存在以下情况时暴露于 CP：分别用CB1和CB2受体（CB1R、CB2R）的反向激动剂SR141716（1μM）和SR144528（1μM）处理24小时。对未经处理或已处理的神经元进行生化和功能分析。结果：在两种反向激动剂（以下简称SR）存在的情况下，CP几乎完全抑制了细胞内sAβPPβf和p-Tau的聚集，增加了线粒体膜电位（ΔΨm），降低了DJ-1Cys106-SH残基的氧化，并阻断了突变型ChLN中c-Jun、p53、PUMA和caspase-3的激活，且该作用独立于CB1R信号通路。CP还抑制了活性氧的产生，该作用部分依赖于CB1R。尽管CP降低了细胞外Aβ42水平，但它无法逆转突变型ChLNs中乙酰胆碱刺激引起的Ca2+内流失调。在有或无SR加CP的情况下，用抗Aβ抗体6E10（1:300）处理突变型ChLNs，可完全恢复乙酰胆碱刺激引起的瞬时[Ca2+]i信号。结论：综上所述，我们的研究结果表明，大麻素、CB1R反向激动剂和抗Aβ抗体的联合应用可能是一种有前景的家族性AD治疗方法。[2]

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BAY 59-3074 [3-[2-氰基-3-(三氟甲基)苯氧基]苯基-4,4,4-三氟-1-丁烷磺酸盐]是一种结构新颖的大麻素CB1/CB2受体部分激动剂，具有镇痛作用。本研究旨在通过高灵敏度的体内实验验证其受体结合特性。大鼠（n=10）在固定比例为10的食物强化双杆实验中，经过平均28次训练后，学会区分BAY 59-3074（0.5 mg/kg，口服，t-1 h）和溶剂对照。BAY 59-3074的泛化作用呈剂量依赖性（ED₅₀：0.081 mg/kg，口服），且给药后0.25至4小时内均可检测到信号。选择性大麻素 CB1 受体拮抗剂 SR 141716A [N-(哌啶-1-基)-5-(4-氯苯基)-1-(2,4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐] 阻断了 BAY 59-3074 的辨别作用（ID50：1.79 mg/kg，腹腔注射）。腹腔注射 BAY 59-3074（ED50 值：0.41 mg/kg）后，以及参考大麻素 BAY 38-7271 [(-)-(R)-3-(2-羟甲基茚基-4-氧基)苯基-4,4,4-三氟-1-丁烷磺酸盐，0.011 mg/kg]、CP 55940 [(-)-顺式-3-[2-羟基-4-(1,1-二甲基庚基)苯基]-反式-4-(3-羟基丙基)环己醇，0.013 mg/kg]、HU-210 [(-)-11-OH-Δ8-四氢大麻酚二甲基庚基，0.022 mg/kg]、WIN 55,212-2 后，均获得了完全泛化。 [(R)-4,5-二氢-2-甲基-4(4-吗啉基甲基)-1-(1-萘基羰基)-6H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-6-酮，0.41 mg/kg] 和 (-)-Δ9-四氢大麻酚 (0.41 mg/kg)。具有镇痛作用的非大麻素类药物，如吗啡、阿米替林、卡马西平、加巴喷丁和巴氯芬，均未泛化至该线索。由此得出结论，BAY 59-3074 的辨别性刺激效应是由大麻素 CB1 受体激活特异性介导的。[1]

C24H40O3

376.57

376.297

C, 76.55; H, 10.71; O, 12.75

83002-04-4

104895

Typically exists as solid at room temperature

1.0±0.1 g/cm3

494.4±45.0 °C at 760 mmHg

209.2±23.3 °C

0.0±1.3 mmHg at 25°C

1.526

5.97

60.69

3

3

10

27

408

3

CCCCCCC(C)(C)C1=CC(=C(C=C1)[C@@H]2C[C@@H](CC[C@H]2CCCO)O)O

YNZFFALZMRAPHQ-SYYKKAFVSA-N

InChI=1S/C24H40O3/c1-4-5-6-7-14-24(2,3)19-11-13-21(23(27)16-19)22-17-20(26)12-10-18(22)9-8-15-25/h11,13,16,18,20,22,25-27H,4-10,12,14-15,17H2,1-3H3/t18-,20-,22-/m1/s1

2-[(1R,2R,5R)-5-hydroxy-2-(3-hydroxypropyl)cyclohexyl]-5-(2-methyloctan-2-yl)phenol

CP55940; CP-55940; 83003-12-7; 83002-04-4; 2-[(1r,2r,5r)-5-hydroxy-2-(3-hydroxypropyl)cyclohexyl]-5-(2-methyloctan-2-yl)phenol; CP55,940; CP-55,940; 8YX8JK1BQG;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。