Decoyinine   中文名称: 德夸菌素

GMP synthetase (GMPS)

Decoyinine是一种腺苷类似物，可抑制 GMP 合酶，导致细胞内 GTP 水平下降。 Decoyinine 仅在 gra-10 突变导致 α-淀粉酶控制的下游调节组件无法发挥作用的菌株中刺激 oa 淀粉酶的合成。 Decoyinine 对 WLN-11 中 α-淀粉酶活性的明显增强并不是酶活性水平变化的结果。嘌呤核苷酸，尤其是 GMP，已被证明对 B 的活性具有强烈的抑制作用。淀粉酶前沿F-2。在研究中使用的浓度为 1.07 mM 时，Decoyinine 不会影响 B 的活性。体外来自枯草芽孢杆菌 WLN-11 的 α-淀粉酶。相同浓度下，GMP 会轻微抑制 α-淀粉酶活性 [2]。

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Decoyinine/Angustmycin A/安格斯霉素A对GMPS的药理学靶向作用降低了侵袭性[1]
Angustmycin A是一种选择性GMPS抑制剂，在小鼠中进行了非癌症相关特性测试。因此，我们感兴趣的是通过安格斯霉素A抑制GMPS是否可以抑制黑色素瘤细胞的侵袭。用2处理SK-Mel-28和SK-Mel103细胞 与载体处理的细胞相比，mM的Angustmycin A（不影响研究细胞增殖的最大浓度）将其侵袭减少了约30%（图4a），反映了GMPS耗竭引起的表型（图1b）。此外，正如在GMPS耗竭的情况下观察到的那样，补充100 μM的鸟苷抵消了安格斯霉素A的作用（图4a）。因此，GMPS的药理学抑制现象复制了GMPS基因抑制对黑色素瘤细胞侵袭能力及其鸟苷依赖性的影响。

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Decoyinine是GMP合成酶的抑制剂，允许枯草芽孢杆菌中的孢子形成在其他分解代谢抑制条件下启动和进行。研究了Decoyinine对枯草芽孢杆菌α-淀粉酶合成的影响，该事件表现出类似孢子形成起始的调节特征。Decoyinine没有克服枯草芽孢杆菌野生型菌株中α-淀粉酶合成的分解代谢抑制，但在特异性阻断α-淀粉酶分解代谢抑制的突变菌株中确实导致了过早和增强的合成。Decoyinine对α-淀粉酶的酶活性没有影响。因此，枯草芽孢杆菌中控制α-淀粉酶合成和孢子形成的分解代谢控制机制似乎对decoyinine的反应不同，因此必须至少部分由单独的成分组成[2]。

Decoyinine 还抑制由带有 NRASQ61R (SK-Mel-103) 或 BRAFV600E (SK-Mel-28) 突变的细胞制成的异种移植物的生长，这表明它的作用（如 GMPS 活性的作用）似乎并不具有亚型潜力 [1 ]。

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Angustmycin A/Decoyinine抑制SCID小鼠黑色素瘤细胞异种移植物的生长[1]
基于上述结果，我们对安格斯霉素A/Decoyinine在临床前小鼠模型中的抗黑色素瘤疗效感兴趣。以前，只有在小鼠中进行了安格斯霉素A/Decoyinine的体内研究，以研究对皮肤同种异体移植物的免疫反应。31使用本文的数据，我们确定了截至120只SCID小鼠的安格斯霉素A/Decoyinine的重复最大耐受剂量（rMTD） mg/kg。
IMPDH1和IMPDH2是新鸟苷酸生物合成的限速酶（图1a），它们在肿瘤细胞中的表达升高。7，33，34 MPA是IMPDH酶的特异性抑制剂，在器官移植过程中被用作免疫抑制剂。MPA的一种更好的生物利用形式是其前药MMF（生物利用度提高超过200%），它也被提议作为抗癌疗法。因此，为了进行比较，我们用MMF对安格斯霉素A进行了正面评价。由于安格斯霉素A/Decoyinine是通过腹腔注射给药的，我们为MMF选择了相同的给药途径。我们根据之前的研究和生物利用度信息选择了MMF的治疗活性剂量（30mg/kg）。
将SK-Mel-103和SK-Mel-28细胞皮下接种在SCID小鼠的两侧（18只小鼠/细胞系）。一旦肿瘤体积达到约100 mm3，小鼠被随机分配到四组中的一组，每天腹腔注射安格斯霉素A/Decoyinine（120mg/kg）、MMF（30mg/kg）或各自的赋形剂。每隔一天用卡尺测量肿瘤大小，一旦肿瘤体积达到1000只，就杀死小鼠 mm3或动物出现发病迹象。在SK-Mel-103细胞中，安格斯霉素A治疗导致异种移植物体积减少36%，而与相应的载体对照相比，MMF仅导致19%的体积减少（图4b）。在SK-Mel-28细胞中，安格斯霉素A和MMF引起的异种移植物体积减少分别为62%和30%（图4b）。

免疫印迹[1]
在NP-40缓冲液（20mM Tris pH7.4，150mM氯化钠；1%的NP-40，20mM NaF）补充1mM原钒酸钠，1 mM PMSF和蛋白酶抑制剂（抑肽酶1μg/ml、肽抑素A 1μg/ml和亮肽2μg/ml）。样品（20-80μg/泳道）在变性聚丙烯酰胺凝胶上溶解，并转移到硝化纤维膜上。膜在4°C下与第一抗体一起孵育，然后在室温下与适当的HRP偶联的第二抗体孵育1小时。使用Pierce ECL蛋白质印迹基质和X射线胶片对信号进行可视化。

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免疫组织化学[1]
福尔马林固定和石蜡包埋的人黑素细胞、皮肤和转移性黑色素瘤组织在病理学核心设施进行处理。阳性和阴性对照载玻片由病理学核心设施提供，并包含在每次免疫化学运行中。用Novocastra PowerVision试剂盒观察GMPS抗体，然后用Fast Red染色。载玻片用苏木精手动复染。如Wawrzyniak等人所述，由委员会认证的病理学家对人体组织标本的染色强度进行评分。

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基于基质胶的侵袭试验[1]
如Wawrzyniak等人8所述，根据制造商的说明，使用BioCoat Matrigel侵入室进行侵入试验。实验进行了两次，并重复了至少两次。

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联合明胶降解试验[1]
如Wawrzyniak等人所述，盖玻片上涂有温热的俄勒冈绿488共轭明胶。黑色素瘤细胞（7.5×104）接种在盖玻片上，在37℃下孵育16小时后 将它们固定在PBS中4%多聚甲醛中。在PBS中0.05%Triton X-100中透化后，用罗丹明结合的鬼笔环肽和hoechst对细胞进行染色。盖玻片用水性安装介质安装在载玻片上。使用配备Roper CoolSnap HQ CCD相机和MetaVue软件的尼康TE2000-E倒置显微镜捕获荧光图像。

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使用在相同培养基中生长的洗涤指数相种子培养物，将同源菌株WLN-4（sacA321-amyRJ-amyE+）和WLN-11（sacA321gra-10-amyE+）接种到含有2%（wt/vol）葡萄糖的最低S7培养基中。
在对数生长中期，将每种培养物平均分为两个烧瓶：
一个烧瓶可容纳1/10体积的新鲜S7培养基
另一个接受1/10体积的过滤灭菌S7培养基，含有2.5 mg/mL的Decoyinine（最终Decoyinine浓度为250μg/mL） 定期采样：
之前添加Decoyinine 经过Decoyinine添加
使用前面描述的方法测定培养上清液中的α-淀粉酶活性
在添加-Decoyinine后16小时，确定每种培养物中耐热孢子的频率[2]。

Animal studies using a subcutaneous xenograft model [1]
SK-Mel-103 or SK-Mel-28 cells expressing control vector or shRNA to GMPS were inoculated subcutaneously in both flanks of 4- to 6-week-old female SCID mice, which are bred and maintained by the in-house transgenic mouse facility at RPCI (1.0x106 cells/flank, and 5.0 × 106 cells/flank, respectively). For all cohorts, the time of the appearance of tumor ≥2 mm in at least one dimension was recorded and tumors were measured thereafter every other day. For drug treatment studies, uninfected SK-Mel-103 or SK-Mel-28 cells were inoculated as described above. When tumors reached 100 mm3 in size, mice were randomly assigned to different treatment groups and treated with daily i.p. injection of Decoyinine (120 mg/kg in a solution of 10% DMSO in PBS), MMF (30 mg/kg in a suspension of 0.9% benzyl alcohol, 0.9% sodium chloride, 0.5% carboxymethylcellulose, and 0.4% polysorbate 80 in water), or the correspondent vehicle control.

121578 Mice oral LD50 >2500 mg/kg, Compounds for Basic Research, Vol. 2, No. 6, Antibiotics, Upjohn Research Laboratory Project, 2(6)(-), 1971.
121578 Mice intraperitoneal LD50 >1 gm/kg, Compounds for Basic Research, Vol. 2, No. 6, Antibiotics, Upjohn Research Laboratory Project, 2(6)(-), 1971.
121578 Mice subcutaneous LD50 2500 mg/kg, CRC Handbook of Antibiotic Compounds, Vol. 1-19, Berdy, J., Boca Raton, Florida, CRC Press, 1980, 5(294), 1981.

[1]. Pharmacological targeting of guanosine monophosphate synthase suppresses melanoma cell invasion and tumorigenicity. Cell Death Differ. 2015 Nov; 22(11): 1858–1864.

[2]. Effect of Decoyinine on the regulation of alpha-amylase synthesis in Bacillus subtilis. J Bacteriol. 1987 Dec; 169(12): 5867–5869.

Decoyinine belongs to the 6-aminopurine class of compounds. It has been reported that decoyinine exists in Streptomyces angustmyceticus, and related data have been reported. Malignant melanoma is one of the most metastatic cancers in humans. Acquiring an aggressive phenotype is a prerequisite for melanoma metastasis. Elucidating the molecular mechanisms of melanoma invasion will greatly facilitate the design of novel melanoma therapeutics. This article reports that guanosine monophosphate synthase (GMPS)—an enzyme involved in the de novo synthesis of GMP—plays a crucial role in the invasion and tumorigenicity of BRAF(V600E) or NRAS(Q61R) mutant human metastatic melanoma cells. Furthermore, GMPS levels are elevated in metastatic human melanoma specimens compared to primary melanoma, suggesting that GMPS is an ideal candidate target for anti-melanoma therapy. Therefore, we have demonstrated for the first time that the GMPS nucleoside analog inhibitor Decoyinine/angustmycin A, produced by Streptomyces hygroscopius, effectively inhibits the invasion of melanoma cells in vitro and tumorigenicity in immunodeficient mice. Our data suggest that GMPS is a potent driver of melanoma cell invasion and that angustmycin A warrants further investigation as a novel anti-melanoma drug. [1] The isolation of the gra-JO mutation (8) provided a unique opportunity to investigate the regulatory role of the addition of Decoyinine on an exponentially expressed gene after the inactivation of a metabolite repression component. It was found that the apokines could only stimulate the synthesis of α-amylase when the catabolite repression mechanism was inactivated by the gra-10 mutation. This suggests that the decrease in GTP levels associated with the end of exponential growth may play a role in time-regulated gene activation, rather than necessarily in the deactivation of catabolite repression. In addition to the α-amylase synthesis we discovered, apopeptides were also shown to induce the expression of spoOH(2), spoVG(18), and citB(1). These genes are all time-regulated. Interestingly, we speculate that the mechanisms regulating the expression of these genes may share common features with the mechanisms regulating the time-dependent expression of α-amylase synthesis, although one of the genes, spoVG, is transcribed by a different form of RNA polymerase. [2]

C11H13N5O4

279.25202

279.096

C, 47.31; H, 4.69; N, 25.08; O, 22.92

2004-04-8

121578

Typically exists as solid at room temperature

1.9±0.1 g/cm3

580.3±60.0 °C at 760 mmHg

304.7±32.9 °C

0.0±1.7 mmHg at 25°C

1.837

-1.25

128.54

4

8

2

20

410

3

C=C(O1)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@]1(CO)N2C=NC3=C(N)N=CN=C32

UZSSGAOAYPICBZ-SOCHQFKDSA-N

InChI=1S/C11H13N5O4/c1-5-7(18)8(19)11(2-17,20-5)16-4-15-6-9(12)13-3-14-10(6)16/h3-4,7-8,17-19H,1-2H2,(H2,12,13,14)/t7-,8-,11-/m1/s1

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。