p160ROCK (Ki = 0.33 μM); ROCK2 (IC50 = 0.158 μM); PKG (IC50 = 1.65 μM); PKA (IC50 = 4.58 μM); PKC (IC50 = 12.30 μM)

在大鼠肝星状细胞 (HSC) 和人 HSC 衍生的 TWNT-4 细胞中，半水合物 facsudil 盐酸盐 (100 μM) 通过阻断应力纤维的产生、细胞扩散和 α-SMA 表达来抑制细胞增殖[4]。大鼠 HSC 和人 HSC 衍生的 TWNT-4 细胞的蛋白质印迹显示，facudil Hydrochloride semiHydrate（50-100 μM；24 小时）可抑制 LPA（溶血磷脂酸）引起的 ERK1/2、JNK 和 p38 磷酸化[4] 。在人 HSC 衍生的 TWNT-4 细胞中，facsudil HydroHClide semiHydrate（25–100 μM；24 小时）可促进 MMP-1 转录，同时抑制胶原蛋白和 TIMP 转录[4]。

盐酸法舒地尔半水合物（10 mg/kg；静脉注射；手术前一小时）已被证明可以预防心血管疾病，减少 JNK 激活，并减少缺血损伤期间 AIF 的线粒体核易位[5]。盐酸法舒地尔半水合物（50 mg/kg/d；腹腔注射）抑制淋巴细胞增殖，导致白细胞介素 (IL)-17 下调，并显着降低 IFN-γ 与 IL-4 的比率。它还可以预防由蛋白脂质蛋白 PLP p139-151 引起的急性和复发性 EAE（实验性自身免疫性脑脊髓炎）[6]。盐酸法舒地尔半水合物（100 mg/kg/d；口服）可减少小鼠脊髓的炎症、脱髓鞘、轴突损失和 APP 阳性。它还显着降低了SJL/J小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的发生率和病理检查评分[6]。

在最终体积为0.2 mL的反应混合物中，测定环AMP依赖性蛋白激酶的活性，该反应混合物中含有50 mM Tris-HCl (pH 7.0)， 10 mM醋酸镁，2 mM EGTA, 1 μM环AMP或不含环AMP, 3.3至20 μM [r-32P] ATP (4×105 c.p.m)， 0.5 μg酶，100 μg组蛋白H2B和化合物。在30℃下孵育5 min，加入500 μg牛血清白蛋白作为载体蛋白，加入20%三氯乙酸1mL，终止反应。样品在3000转/分离心15min后，在10%三氯乙酸冰冷溶液中重悬，重复离心-重悬循环3次。最后的颗粒溶解在1ml的1n NaOH中，用液体闪烁计数器测量放射性。

Western Blot 分析[4]
细胞类型：大鼠 HSC 和人 HSC 衍生的 TWNT-4 细胞
测试浓度： 50 μM； 100 μM
孵育时间： 24 小时
实验结果： 将 LPA 诱导的 ERK1/2、JNK 和 p38 MAPK 磷酸化抑制 60分别为 %、70% 和 90%。

---

RT-PCR[4]
细胞类型：大鼠 HSC 和人 HSC 衍生的 TWNT-4 细胞
测试浓度： 25微米； 50μM； 100 μM
孵育时间：24 小时
实验结果：降低 I 型胶原蛋白、a-SMA 和 TIMP-1 的表达。

动物/疾病模型： 大鼠心肌缺血再灌注模型（250-300 g）[5]
剂量： 10 mg/kg
给药途径： 静脉注射；术前1小时
实验结果： 激活Rho激酶和JNK，导致AIF易位至细胞核。抑制Rho激酶活性，减少心肌梗死面积和心肌细胞凋亡。

大鼠口服 LD50 335 mg/kg 感觉器官和特殊感觉：眼睑下垂；行为：震颤；行为：惊厥或对癫痫阈值的影响 Yakuri to Chiryo。药理学与治疗学，20（增刊）
大鼠皮下注射LD50 123 mg/kg 感觉器官和特殊感觉：眼睑下垂；行为：震颤；行为：惊厥或对癫痫阈值的影响。药理学与治疗学，20（增刊）
大鼠静脉注射LD50 59900 ug/kg 感觉器官和特殊感觉：眼睑下垂；行为：惊厥或对癫痫阈值的影响；胃肠道：唾液腺结构或功能的变化。药理学与治疗学， 20(增刊
小鼠口服LD50 274 mg/kg 感觉器官和特殊感觉：眼睑下垂；行为：睡眠时间改变（包括翻正反射改变）；行为：惊厥或对癫痫阈值的影响 Yakuri to Chiryo. Pharmacology and Therapeutics., 20(增刊
小鼠皮下注射LD50 124 mg/kg 感觉器官和特殊感觉：眼睑下垂；行为：睡眠时间改变（包括翻正反射改变）；行为：惊厥或对癫痫阈值的影响 Yakuri to Chiryo. Pharmacology and治疗学，20（增刊）

[1]. Fasudil and its analogs: a new powerful weapon in the long war against central nervous system disorders? Expert Opin Investig Drugs. 2013 Apr;22(4):537-50.

[2]. The effects of fasudil on the permeability of the rat blood-brain barrier and blood-spinal cordbarrier following experimental autoimmune encephalomyelitis. J Neuroimmunol. 2011 Oct 28;239(1-2):61-7.

[3]. Calcium sensitization of smooth muscle mediated by a Rho-associated protein kinase in hypertension. Nature. 1997 Oct 30;389(6654):990-4.

[4]. Fasudil hydrochloride hydrate, a Rho-kinase (ROCK) inhibitor, suppresses collagen production and enhances collagenase activity in hepatic stellate cells. Liver Int. 2005 Aug;25(4):829-38.

[5]. Inhibition of the activity of Rho-kinase reduces cardiomyocyte apoptosis in heart ischemia/reperfusion via suppressing JNK-mediated AIF translocation. Clin Chim Acta. 2009 Mar;401(1-2):76-80.

[6]. The selective Rho-kinase inhibitor Fasudil is protective and therapeutic in experimental autoimmune encephalomyelitis. J Neuroimmunol. 2006 Nov;180(1-2):126-34. Epub 2006 Sep 22.

盐酸法舒地尔水合物是盐酸法舒地尔的半水合物形式。它是一种用于预防蛛网膜下腔出血手术后脑血管痉挛和继发性脑缺血的药物。它具有抗高血压、钙通道阻滞、EC 2.7.11.1（非特异性丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶）抑制剂、神经保护剂、促智药和血管扩张剂等多种作用。它含有盐酸法舒地尔。

---

法舒地尔是一种异喹啉类化合物，其5位被(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)磺酰基取代。它是一种Rho激酶抑制剂，其盐酸盐水合物形式已获准用于治疗脑血管痉挛和脑缺血。它具有多种作用，包括抗衰老、抑制EC 2.7.11.1（非特异性丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶）、血管扩张、促智、神经保护、降压和钙通道阻滞。它是一种N-磺酰二氮杂环庚烷类化合物，属于异喹啉类。它是法舒地尔(1+)的共轭碱。
法舒地尔已在颈动脉狭窄的治疗中得到研究。

---

引言：Rho激酶（ROCK）在肌动蛋白细胞骨架的组织中起着关键作用，并参与多种基本细胞功能，例如收缩和基因表达。法舒地尔是一种ROCK抑制剂，自1995年以来，已在日本用于治疗蛛网膜下腔出血（SAH）。越来越多的证据表明，法舒地尔可能对中枢神经系统（CNS）疾病，例如阿尔茨海默病，具有显著的治疗作用。本文总结了支持法舒地尔治疗多种中枢神经系统疾病潜在疗效的证据，并概述了其类似物的特性。专家意见：目前针对中枢神经系统疾病的疗法只能缓解症状，无法延缓或阻止疾病进展，因此迫切需要具有疾病改善作用的新方法。法舒地尔在动物模型和/或临床应用中对中枢神经系统疾病的显著疗效使其成为治疗人类中枢神经系统疾病的一种有前景的策略。鉴于中枢神经系统疾病的病理机制复杂，有必要进一步开发多功能法舒地尔衍生物或与其他药物联合使用，以期在对抗中枢神经系统疾病时发挥更强的疗效并最大限度地减少不良反应。 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23461757/

---

血脑屏障 (BBB) 和血脊髓屏障 (BSCB) 功能障碍是多发性硬化症 (MS) 的主要特征。我们评估了选择性 ROCK 抑制剂法舒地尔在豚鼠脊髓诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE) 模型中的保护作用。此外，我们还研究了法舒地尔对 BBB 和 BSCB 通透性的影响。我们发现，法舒地尔通过降低 BBB 和 BSCB 通透性，部分减轻了 EAE 引起的损伤。这些结果为开发选择性 Rho 激酶抑制剂作为 MS 的新型疗法提供了理论依据。 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21978848/

---

背景/目的：Rho-ROCK信号通路在肝星状细胞（HSCs）的激活中发挥重要作用。我们研究了Rho激酶（ROCK）抑制剂法舒地尔盐酸盐水合物（法舒地尔）对HSCs细胞生长、胶原蛋白生成和胶原酶活性的影响。方法：培养大鼠HSCs和人HSC来源的TWNT-4细胞，用于研究应力纤维形成和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达。采用BrdU掺入法检测细胞增殖，采用TUNEL法检测细胞凋亡。采用蛋白质印迹法检测MAP激酶（MAPK）、细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）、c-Jun激酶（JNK）和p38的磷酸化状态。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和实时定量PCR分别检测I型胶原、基质金属蛋白酶-1（MMP-1）和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的生成和基因表达。同时检测胶原酶活性（活性MMP-1）。结果：法舒地尔（100 μM）抑制细胞铺展、应力纤维形成和α-SMA表达，并伴随细胞生长抑制，但未诱导细胞凋亡。法舒地尔抑制ERK1/2、JNK和p38的磷酸化。法舒地尔治疗抑制了胶原蛋白和TIMP的生成和转录，刺激了MMP-1的生成和转录，并增强了胶原酶活性。结论：这些发现表明，法舒地尔不仅抑制细胞增殖和胶原蛋白生成，还能增加胶原酶活性。https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15998434/

2[C14H17N3O2S].2[HCL].H2O

673.67452

672.172

C, 49.92; H, 5.69; Cl, 10.52; N, 12.48; O, 11.87; S, 9.52

186694-02-0

Fasudil;103745-39-7;Fasudil dihydrochloride;203911-27-7

23724856

Typically exists as solid at room temperature

6.672

150.59

5

11

4

43

421

0

O.Cl.Cl.C1NCCN(S(C2=CC=CC3C=NC=CC2=3)(=O)=O)CC1.C1NCCN(S(C2=CC=CC3C=NC=CC2=3)(=O)=O)CC1

AACOJGPCMIDLEY-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/2C14H17N3O2S.2ClH.H2O/c2*18-20(19,17-9-2-6-15-8-10-17)14-4-1-3-12-11-16-7-5-13(12)14;;;/h2*1,3-5,7,11,15H,2,6,8-10H2;2*1H;1H2

5-(1,4-diazepan-1-ylsulfonyl)isoquinoline;hydrate;dihydrochloride

Fasudil hydrochloride hydrate; 186694-02-0; Fasudil hydrochloride hemihydrate; Eril-S; fasudil HCl semihydrate; 5-((1,4-Diazepan-1-yl)sulfonyl)isoquinoline hydrochloride hemihydrate; Fasudil hydrochloride hydrate [JAN]; LI4L0R5Y7T;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

---

注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

View More

注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

---

口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

View More

口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

---

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。