PI3Kδ(IC50 = 11 nM); PI3Kα(IC50 = 280 nM); PI3Kβ(IC50 = 480 nM); PI3Kγ(IC50 = 2.57 nM); DNA-PK (IC50 = 880 nM)
Leniolisib phosphate targets the delta isoform of phosphoinositide 3-kinase (PI3Kδ). It demonstrates high selectivity for PI3Kδ with an IC50 of 11 nM, showing 28-fold selectivity over PI3Kα, 43-fold over PI3Kβ, and 257-fold over PI3Kγ. The compound also inhibits DNA-PK with an IC50 of 880 nM. By selectively inhibiting PI3Kδ, Leniolisib reduces the PI3K/AKT pathway activity, which is overactive in APDS due to gain-of-function mutations in the PI3Kδ pathway.

在表达APDS突变体p110δ的细胞系和患者来源细胞中观察到染料活性增强，而磷酸化AKT或S6可拮抗这种增强作用。该染料的活性可被磷酸盐以浓度抑制的方式抑制[1]。体外实验表明，CDZ173可抑制多种免疫细胞功能，包括B细胞、T细胞、中性粒细胞、单核细胞、嗜碱性粒细胞、浆细胞样树突状细胞和肥大细胞[2]。体外实验表明，磷酸盐对PI3Kδ具有强效且选择性的抑制作用，IC50值为11 nM。它可抑制多种免疫细胞功能，包括B细胞、T细胞、中性粒细胞、单核细胞、嗜碱性粒细胞、浆细胞样树突状细胞和肥大细胞。在细胞实验中，Leniolisib 可降低 pAKT 通路活性，并抑制 B 细胞和 T 细胞亚群的增殖和活化。在表达 APDS 突变体 p110δ 的细胞系和患者来源细胞中观察到的染料活性增加，可被 Leniolisib 以浓度依赖的方式拮抗。

在体内，CDZ173 以浓度和时间依赖的方式抑制大鼠和猴子的 B 细胞活化。在预防性或治疗性给药后，CDZ173 可有效抑制抗原特异性抗体的产生，并减轻大鼠胶原诱导性关节炎模型中的疾病症状。CDZ173 的结构与第一代 PI3Kδ 和 PI3Kγδ 选择性临床化合物显著不同。因此，CDZ173 可能具有更佳的安全性。目前，CDZ173 正在进行针对原发性干燥综合征和 APDS/PASLI（一种由 PI3Kδ 功能获得性突变引起的疾病）患者的临床研究[2]。在体内，磷酸盐 Leniolisib 以浓度和时间依赖的方式抑制大鼠和猴子的 B 细胞活化。在预防性或治疗性给药后，它可有效抑制抗原特异性抗体的产生，并减轻大鼠胶原诱导性关节炎模型中的疾病症状。口服给药可导致体外评估的PI3K/AKT通路活性呈剂量依赖性降低，并改善患者的免疫失调。该化合物耐受性良好，并改善了APDS患者的实验室和临床指标。

PI3K 同工酶和其他脂质激酶的生化分析 [2]
KinaseGlo 法 [2]
使用磷脂酰肌醇 (PI) 作为底物，在正辛基葡糖苷 (OG) 中，通过基于 ATP 消耗的发光分析法 (KinaseGlo) 测定 PI3Kα 和 PI3Kβ 的抑制性激酶活性。将约 50 nL 的化合物稀释液分装到黑色 384 孔板 (Greiner Cat. No.784076) 上。将 10 mg/mL 的 L-α-磷脂酰肌醇 (PI) 甲醇溶液转移至玻璃管中，并在氮气流下干燥。然后涡旋混匀，重悬于 3% (v/v) 正辛基葡糖苷溶液中，并储存于 4°C。加入约 4.5 μl PI/OG 与 10 nM PI3Kα 或 0.75 μg/ml PI3Kβ 的混合物。通过加入 4.5 μl ATP 混合物启动激酶反应，该混合物最终体积为 9 μl，包含以下成分：10 mM Tris-HCl（pH 7.5）、3 mM MgCl₂ 或 3 mM MnCl₂、50 mM NaCl、0.05% CHAPS、1 mM MAKT DTT 和 1 μM ATP。反应在室温下进行 30 分钟或 60 分钟（分别对应 PI3Kα 或 PI3Kβ），然后用 9 μl Kinase Glo 终止反应。10 分钟后，使用 Synergy2 读板仪读取结果，每个孔的积分时间为 0.1 秒。为了实现激酶反应的100%抑制，在不添加重组激酶的情况下，使用激酶缓冲液中的PI/OG；而0%抑制则通过在水中加入重组激酶，使用溶剂载体（90% v/v DMSO）来实现。

---

ADAPTA法[2]
用于测定PI3Kγ和PI3Kδ活性的激酶测定方法为非放射性方法，通过监测ADP TR-FRET（ADAPTA）的生成来实现。将约50 nl的化合物稀释液分装到白色384孔小体积聚苯乙烯板上。然后，加入4.5 μl PI3K底物PI，再加入4.5 μl ATP（最终反应体积为9 μL），于室温孵育。 Adapta™ TR-FRET 检测的标准反应缓冲液包含 10 mM Tris-HCl（pH 7.5）、3 mM MgCl₂、50 mM NaCl、1 mM DTT 和 0.05% (v/v) CHAPS。反应用 4.5 μl EDTA 溶液终止，该溶液包含 Eu 标记的抗 ADP 抗体和 Alexa Fluor® 647 标记的 ADP 示踪剂，溶于 TR-FRET 稀释缓冲液中。反应 30 至 60 分钟后（分别对应 PI3Kγ 或 PI3Kδ），使用 Synergy2 读板仪读取数据，积分时间为 0.4 秒，延迟时间为 0.05 秒。用标准反应缓冲液代替 PI3K 作为激酶反应 100% 抑制的对照。用化合物的溶剂（90% DMSO 水溶液）作为 0% 抑制的对照。通过 KinaseGlo 和 ADAPTA 获得的 IC50 值已被证明是等效/可比的。

---

放射性测定法[2]
放射性蛋白激酶测定（33PanQinase® 活性测定）在 Perkin Elmer（美国马萨诸塞州波士顿）的 96 孔 Flash-Plates™ 中进行，反应体积为 50 μl。反应混合物按以下顺序分 4 步加入：
• 10 μl 非放射性 ATP 溶液（溶于 H2O）
• 25 μl 检测缓冲液/[γ-33P]-ATP 混合物
• 5 μl 10% DMSO 溶液中的测试样品
• 10 μl 酶/底物混合物
检测体系包含 70 mM HEPES-NaOH（pH 7.5）、3 mM MgCl2、3 mM MnCl2、3 μM 原钒酸钠、1.2 mM DTT、1.0 μM ATP、[γ-33P]-ATP（每孔约 8 x 1005 cpm）、2.4 nM 蛋白激酶和 20 μg/ml 底物（酪蛋白）。

---

所有蛋白激酶均由 ProQinase 提供，并在 Sf9 昆虫细胞或……中表达。大肠杆菌表达重组GST融合蛋白或His标签蛋白，可以是全长蛋白或具有酶活性的片段。所有激酶均由人cDNA表达。激酶通过GSH亲和层析或固定化金属亲和层析纯化。纯化过程中，部分激酶的亲和标签被去除。蛋白激酶的纯度通过SDS-PAGE/考马斯亮蓝染色检测；其鉴定通过质谱分析进行。反应混合物在30℃孵育60分钟。反应用50 μl 2% (v/v) H3PO4终止，吸出反应液，并用200 μl 0.9% (w/v) NaCl洗涤两次。激酶活性依赖的33Pi转移（计数“cpm”）用微孔板闪烁计数器（Microbeta，Wallac）测定。所有检测均使用 BeckmanCoulter Biomek 2000/SL 自动化系统进行。对于每种激酶，将三个含有完整反应混合物但不含激酶的孔的 cpm 中值定义为“低对照”（n=3）。该值反映了在没有蛋白激酶但存在底物的情况下，放射性物质与微孔板的非特异性结合。此外，对于每种激酶，将另外三个含有完整反应混合物但不含任何化合物的孔的 cpm 中值作为“高对照”，即在没有任何抑制剂的情况下达到完全活性（n=3）。高对照与低对照之间的差异被视为每种激酶的 100% 活性。作为数据评估的一部分，将特定微孔板中每一行的低对照值及其对应的 10 个“化合物值”相减。使用以下公式计算特定孔板每行每个孔的残余活性（以百分比表示）：残余活性 (%) = 100 × [(化合物 cpm – 低对照) / (高对照 – 低对照)]。由于每种测试化合物均针对每种激酶测试了 10 个不同的浓度，因此对原始数据的评估结果为每种激酶的 10 个残余活性值。基于这 10 个相应的残余活性值，使用 Prism 5.04 for Windows（Graphpad，圣地亚哥，加利福尼亚州，美国；www.graphpad.com）计算 IC50 值。所使用的数学模型为“S 型响应（可变斜率）”，参数“top”固定为 100%，“bottom”固定为 0%。使用 PI 作为底物，在基于 ATP 消耗的 n-辛基葡糖苷 (OG) 发光测定法（KinaseGlo）中测定 Vps34 和 PI4Kβ 的体外生化活性。采用抗体依赖性TR-FRET检测法评估mTOR的抑制活性，以确定重组mTOR催化的4EBP-1磷酸化水平。DNA-PK的生化活性通过DNA-PK将放射性33P掺入肽底物中来测定，并通过液体闪烁计数法进行测定。PI3K亚型的生化检测通常采用KinaseGlo试剂盒。将重组PI3K亚型（PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kγ、PI3Kδ）与不同浓度的化合物在ATP和脂质底物（例如磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸）存在下孵育。反应在针对每种亚型优化的激酶缓冲液中进行。孵育后，使用基于发光的激酶测定法对消耗的 ATP 量进行定量，并根据剂量反应曲线计算 IC50 值。

体外B细胞和T细胞活化的细胞学检测[2]
小鼠B细胞活化（CD86表达）和B细胞受体刺激后的增殖。[2]
首先将CDZ173溶解于DMSO中并稀释，然后用培养基进行1:50稀释。分离Balb/c小鼠的脾细胞，重悬后转移至96孔板（200 μl/孔）。向孔中加入稀释后的化合物或溶剂（25 μl），并在37 °C下孵育1小时。然后，用25 μl抗IgM单克隆抗体/孔（终浓度30 μg/ml）刺激培养物，并在37 °C下孵育24小时，最后用抗小鼠CD86-FITC和抗小鼠CD19-PerCP（每种抗体2 μl/孔，均购自Becton Dickinson公司）染色。通过流式细胞术定量CD19阳性B细胞上的CD86表达。基于 CD86 表达的降低，确定了 IC50 值。为了评估对增殖的影响，在滴定浓度的化合物存在下，用抗 IgM 抗体通过 B 细胞受体刺激小鼠 B 细胞，并在 88 小时孵育期的最后 16 小时内，通过掺入放射性 3H-胸苷来评估增殖情况，如文献所述（Julius 等，1984）。

---

小鼠和人混合淋巴细胞反应 (MLR) [2]
MLR 被认为是体外同种异体 T 细胞活化的简单模型。对于小鼠 MLR，将等量的 C57/Bl6 和 DBA/2 小鼠的脾细胞（每孔 4 x 10⁵ 个细胞）混合，并在 200 ml 完全 RPMI 培养基中，于 37℃、5% CO₂ 条件下，在平底组织培养微孔板（Falcon，Becton Dickinson，巴塞尔，瑞士）中，与化合物的系列稀释液一起孵育。 4天后，向每个孔中加入1 mCi 3H-胸苷（英国Amersham公司），并继续孵育5小时。随后，使用Betaplate™ 96孔细胞收集器将细胞收集到滤纸上，并使用Betaplate™计数器测量放射性。抑制程度以百分比表示，计算公式为：抑制率 [%] = (高浓度对照组 - 样品组) / 高浓度对照组 × 100，并确定半数最大抑制浓度（IC50 值）。[2]

---

人 T 细胞增殖[2]
CDZ173 对 T 细胞受体结合（有或无 CD28 共刺激）诱导的人 T 细胞增殖的影响，具体方法简述如下：将 5 μg/ml 抗 CD3 (OKT3) 抗体溶液或 5 μg/ml 抗 CD3 (OKT3) 抗体溶液和 1 μg/ml 抗 CD28 (克隆 15E8，诺华) 抗体溶液包被于 96 孔平底组织培养板中，2-8°C 过夜。如上所述分离人外周血单核细胞 (PBMC)，并以 2.5×10⁵ 个细胞/ml 的细胞浓度接种于组织培养基中。将PBMC与不同浓度的CDZ173在37°C、5% CO2条件下孵育1小时。甩掉预包被的96孔板上的抗体溶液，用200μl/孔PBS洗涤3次，然后去除PBS。将细胞悬液以5×10⁴个细胞/孔的密度接种于孔板，并在37°C、5% CO2条件下孵育56小时。之后，向细胞中加入1μCi/孔的³H-胸苷进行脉冲标记，并在37°C、5% CO2条件下继续孵育16-20小时，并按上述方法测量放射性掺入量。为了评估Leniolisib的细胞活性，使用表达APDS突变体p110δ的人外周血单核细胞（PBMC）或患者来源的细胞。将细胞接种于96孔板中，并用不同浓度的Leniolisib磷酸盐处理。孵育后，采用ELISA或Western blot检测AKT（pAKT）和S6（pS6）的磷酸化水平，以此作为PI3K通路活性的指标。采用流式细胞术评估B细胞和T细胞的增殖和活化。通过检测细胞因子生成和细胞表面活化标志物来评估该化合物抑制免疫细胞功能的能力。

大鼠药代动力学/药效学研究[2]
动物[2]
本药代动力学/药效学实验采用成年雄性Lewis大鼠（LEW/Han/Hsd，德国Charles River公司，体重225-236克）。实验符合瑞士联邦动物保护法，并经巴塞尔兽医办公室批准（BS No. 425）。动物饲养于常规卫生条件下（每笼2只，温度20-24℃，相对湿度最低40%，光照/黑暗周期12小时），自由摄取标准饲料（NAFAG 890 25W16）和饮用水。实验前后，动物均可自由摄取食物和水。
使用的悬浮液载体为0.5% Tween80（Fluka 93781）和0.5%羧甲基纤维素水溶液。将赋形剂加入化合物中，室温下搅拌过夜，制备用于口服给药的混悬液。所有使用的溶剂和试剂均为分析纯。化合物给药、PK/PD血液采集：CDZ173以4 ml/kg体重的剂量口服给药。采血时，使用Fluvac气流系统以异氟烷麻醉动物。分别于给药前24小时和给药后1、2、4、6、8、10、12和24小时舌下采集全血。药效学分析：每个时间点采集100 μl大鼠血液，置于含30 IU肝素钠（5000 IU/ml）的Eppendorf管中。药代动力学分析：每个时间点采集150 μl大鼠血液，置于EDTA抗凝的Eppendorf管中。

---

猴PK/PD研究[2]
动物[2]
PK/PD 实验采用 8-9 岁、体重 4.4-6.2 kg 的食蟹猴进行，这些猴子均为圈养繁殖，来自 SICONBREC 公司（n=3，非初次感染：#5517♀、5518♀、5528♂）。这些猴子的血液学、血清/尿液生化检查结果均正常，且结核病、沙门氏菌/志贺氏菌感染、病毒感染（B 型疱疹病毒、STLV、SIV、SRV D 型、乙型肝炎病毒）以及体外和体内寄生虫检测结果均为阴性。在研究期间，除在椅子上停留的时间以及给药后两小时的禁食时间外，动物可随时自由摄取食物和水。每只动物均由 NIBR-ATI 的非人灵长类动物团队通过腿部纹身编号或胸部纹身编号进行识别。在给药前测量动物的体重。在7小时的实验过程中，猴子被单独饲养在温度控制在22 ± 2ºC、湿度不低于40%的房间内，笼子均有明显标记。实验结束后，猴子被放回自然光照条件下的群体饲养设施。猴子的饲料按照诺华标准（灵长类动物颗粒饲料[Kliba Nafag 3446颗粒]、水果和蔬菜）喂养，并在动物未被束缚时可自由饮水。动物的饲养、护理、药物处理和血液采样均按照瑞士联邦动物保护法（动物许可证号BS No. 1495）进行。
药物制备和给药[2]
CDZ173在给第一只动物给药前一天配制成混悬液，并在给其余两只动物给药前两天配制成混悬液，并储存于室温下。将约 225.6 mg CDZ173 溶解于 42.864 ml 0.5% CMC 和 2.256 ml 10% Tween80 的水溶液中。CDZ173 以 10 mg/kg 体重的剂量口服给药。CDZ173 的给药体积为 4 ml/kg 体重。采血时，使用 Fluvac 气流麻醉系统以异氟烷麻醉动物。使用预涂有肝素钠的皮下注射针头的 10 ml 注射器从腹主动脉采集全血。将血液转移至 50 ml Falcon 管中，并将抗凝剂浓度调整至 100 U/ml 的最终浓度。

---

药代动力学研究[2]
大鼠体内药代动力学研究[2]
雌性野生型 Sprague Dawley 大鼠（Iffa Credo，法国）饲养于符合瑞士动物福利指南的标准笼具和条件下（12 小时光照/黑暗循环，室温 22-24 °C，湿度至少 45% 但 <70%），可自由获取林格氏液（葡萄糖 5%，氯化钠 0.9%，氯化钾 0.5%）和颗粒状啮齿动物饲料。在给予试验物质前96-120小时，用异氟烷麻醉动物，并在严格无菌操作（使用无菌器械和手术材料，并进行局部抗生素预防）下，通过手术将导管植入股动脉和股静脉。导管引出颈部，连接至哈佛旋转系统（Harvard Instruments），并注入含100 U·mL⁻¹肝素的0.9%生理盐水。麻醉苏醒后，将动物单独饲养于特制笼中，并可自由获取食物和自来水，直至实验结束。术后当晚和次日早晨，使用Temgesic®（10 μg/kg，皮下注射，注射体积1 mL/kg）进行镇痛治疗。化合物于早晨（6-8点）给药。在不同时间点，从股动脉导管采集血样至涂有EDTA钠的Eppendorf管中。血液样本立即冷冻于-20℃直至最终处理（最长保存时间为8天）。静脉注射和口服给药在同一动物身上进行，两次单次给药之间间隔48小时的洗脱期。受试物质以1-甲基-2-吡咯烷酮和聚乙二醇200（30:70，v/v）的溶液形式静脉注射，剂量为1 mg/kg；以Tween 80和羧甲基纤维素钠（0.5/0.5/99，w/w）的均质水混悬液形式口服，剂量为3 mg/kg。
犬体内药代动力学研究[2]
成年雄性比格犬（来自意大利蒙蒂基亚里的Marshall Farms，属于MAP/DMPK永久种群）按照瑞士动物福利指南，在标准条件下饲养于犬舍中（每日喂食一次标准犬粮，研究期间可自由饮用自来水）。给药前，犬只禁食12小时，给药后2小时喂食。化合物于上午（7-8点）给药。静脉注射和口服给药均在同一动物身上进行。两次给药之间间隔一周。受试物质以0.1 mg/kg的剂量静脉注射，配制成1-甲基-2-吡咯烷酮和聚乙二醇200（15:85，v/v）的溶液；以0.3 mg/kg的剂量口服，配制成吐温80和羧甲基纤维素钠（0.5/0.5/99，w/w）的均质水混悬液。
食蟹猴体内药代动力学研究[2]
两只雄性和一只雌性成年食蟹猴来自MAP/DMPK永久种群，饲养于符合瑞士动物福利指南的标准条件下（标准颗粒猴粮，上午加水果，下午加蔬菜，研究期间可自由饮用自来水）。在单次给药实验中，直至7小时采样时间，动物单独饲养于实验笼中。在此之前和之后，动物群养于大型笼中，仅在需要采集剩余血样时才单独饲养。给药前猴子不禁食，给药后2小时喂食。化合物以盒式给药，上午使用两种化合物的混合物。静脉和口服给药均在同一只动物身上进行。两次给药之间的洗脱期为一周。受试物质以1-甲基-2-吡咯烷酮和聚乙二醇200（15:85，v/v）溶液的形式静脉注射，剂量为0.1 mg/kg；并以吐温80和羧甲基纤维素钠（0.5/0.5/99.5，w/w）的均质水混悬液的形式口服，剂量为0.3 mg/kg。

---

在大鼠模型中评估了Leniolisib的体内疗效。在胶原诱导性关节炎大鼠模型中，用胶原蛋白免疫动物以诱导关节炎。Leniolisib以不同剂量进行预防性或治疗性口服给药。通过测量爪肿胀、临床评分和关节组织病理学分析来评估疾病严重程度。检测血清中抗原特异性抗体的产生。在大鼠和猴子的 B 细胞活化模型中，动物接受 T 细胞依赖性抗原的免疫，并评估该化合物对抗体产生和 B 细胞活化的影响。

磷酸莱尼奥利布是一种口服有效的化合物，具有良好的药代动力学特性。口服后，它能剂量依赖性地降低PI3K/AKT通路活性。该化合物的磷酸盐形式提高了其溶解度和生物利用度。作为一种获得FDA批准用于治疗APDS的药物，其药代动力学特征已在临床研究中得到充分表征。推荐储存条件为-20℃，干燥密封。

妊娠期和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无关于哺乳期使用莱尼奥利西布的临床信息。由于莱尼奥利西布与血浆蛋白的结合率高达 94.5%，其在母乳中的浓度可能非常低。生产商建议在莱尼奥利西布治疗期间以及末次给药后一周内停止母乳喂养。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到已发表的信息。
◉ 对哺乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到已发表的信息。

---

作为一种获得 FDA 批准的 APDS 治疗药物，磷酸莱尼奥利西布已在临床前研究和临床试验中进行了广泛的毒理学评估。临床研究表明其耐受性良好，并改善了 APDS 患者的实验室和临床指标。该化合物的结构与第一代PI3Kδ和PI3Kγδ选择性临床化合物不同，可能具有更佳的安全性。常见不良反应与其他PI3K抑制剂一致。

[1]. Effective 'Activated PI3Kd Syndrome' -targeted therapy with PI3Kd inhibitor leniolisib. The New England journal of medicine: NEJM. ISSN 0028-4793; 1533-4406.

[2]. Discovery of CDZ173 (Leniolisib), Representing a Structurally Novel Class of PI3K Delta-Selective Inhibitors. ACS Med Chem Lett. 2017 Aug 25;8(9):975-980.

磷酸莱尼奥利布是一种磷酸盐，由莱尼奥利布与等当量的磷酸反应制得。它用于治疗成人和12岁及以上儿童的活化磷脂酰肌醇3-激酶δ (PI3Kδ) 综合征。它是一种EC 2.7.1.153（磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶）抑制剂和免疫调节剂。它含有莱尼奥利布。
另见：莱尼奥利布（含活性成分）。

---

磷酸莱尼奥利布也称为CDZ173磷酸盐和Joenja。它是一种首创的、强效的、选择性的PI3Kδ抑制剂，目前正在进行治疗免疫缺陷疾病的II/III期临床试验。 2023年3月，该药物获得FDA批准，用于治疗活化磷脂酰肌醇3-激酶δ综合征（APDS），一种罕见的原发性免疫缺陷病。临床试验包括针对APDS的NCT02435173试验以及针对原发性干燥综合征的研究。

C21H28F3N6O6P

548.452595710754

548.176

C, 45.99; H, 5.15; F, 10.39; N, 15.32; O, 17.50; P, 5.65

1354691-97-6

Leniolisib;1354690-24-6

90214495

White to off-white solid powder

161Ų

4

14

5

37

703

1

CCC(=O)N1CC[C@@H](C1)NC2=NC=NC3=C2CN(CC3)C4=CC(=C(N=C4)OC)C(F)(F)F.OP(=O)(O)O

XXEDEGOAYSGNPS-ZOWNYOTGSA-N

InChI=1S/C21H25F3N6O2.H3O4P/c1-3-18(31)30-6-4-13(10-30)28-19-15-11-29(7-5-17(15)26-12-27-19)14-8-16(21(22,23)24)20(32-2)25-9-14;1-5(2,3)4/h8-9,12-13H,3-7,10-11H2,1-2H3,(H,26,27,28);(H3,1,2,3,4)/t13-;/m0./s1

2934.99.03.00

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

---

注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

View More

注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

---

口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

View More

口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

---

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。