6-Bnz-cAMP sodium salt

目录号: V69112 纯度: ≥98%
6-Bnz-cAMP 钠盐是一种细胞可渗透(可穿透)的 cAMP 类似物。
6-Bnz-cAMP sodium salt CAS号: 1135306-29-4
产品类别: PKA
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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1mg
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产品描述
6-Bnz-cAMP钠盐是一种可透过细胞膜的cAMP类似物。6-Bnz-cAMP选择性地激活cAMP依赖的PKA信号通路,但不激活Epac信号通路。
6-Bnz-cAMP钠盐(N6-苯甲酰环磷酸腺苷钠盐,CAS 1135306-29-4)是一种细胞膜可渗透的选择性环磷酸腺苷(cAMP)类似物,可作为蛋白激酶A(PKA)依赖性信号通路的高效特异性激活剂。与天然cAMP可同时激活PKA和Epac(cAMP直接激活的交换蛋白)不同,6-Bnz-cAMP对PKA具有高度选择性,不会激活Epac。它特异性地靶向PKA调节亚基上保守的cAMP结合域,触发催化亚基的解离,并随后磷酸化下游底物,例如CREB(cAMP反应元件结合蛋白)。该类似物具有膜渗透性,适用于细胞研究,且钠盐形式可提高其在水性介质中的溶解度。它被广泛用于区分PKA特异性效应和Epac介导的反应。
生物活性&实验参考方法
靶点
6-Bnz-cAMP sodium salt selectively targets the cyclic AMP-binding domains of protein kinase A (PKA) regulatory subunits (RI and RII). Upon binding, it induces a conformational change that leads to dissociation of the catalytic subunits, which then phosphorylate Ser/Thr residues on downstream protein targets. It has negligible affinity for Epac1 and Epac2, the other major cAMP-binding proteins. This exquisite selectivity makes it the standard pharmacological tool for specifically activating PKA in cells without engaging Epac-mediated pathways. It does not target adenosine receptors.
体外研究 (In Vitro)
体外实验表明,6-Bnz-cAMP钠盐在无细胞体系中能选择性地激活PKA,其EC50值在低微摩尔范围内(通常为1-10 uM)。在以纯化PKA全酶(50 nM)为底物的无细胞激酶活性测定中,6-Bnz-cAMP(10 uM)可将其催化活性提高10倍以上,与cAMP相当。相反,在核苷酸交换实验(使用Epac特异性FRET传感器)中,6-Bnz-cAMP并未激活Epac蛋白。即使浓度高达500 uM,也未观察到Epac的激活,证实了其极高的选择性。此外,该化合物与8-CPT-2Me-cAMP(一种Epac激活剂)联用时,还能抑制血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖,表明其对细胞生长具有协同作用。
体内研究 (In Vivo)
6-Bnz-cAMP钠盐通常不作为体内治疗药物使用,但在动物研究中,它已被用作激活PKA和研究生理过程的研究工具。例如,在心肌梗死大鼠模型中,冠状动脉内注射6-Bnz-cAMP(10 uM)可通过增加PKA介导的磷蛋白磷酸化来改善左心室功能,从而增强心肌收缩力。在小鼠中,腹腔注射50 mg/kg 6-Bnz-cAMP可增加海马中CREB的磷酸化,并被用于研究记忆巩固。该化合物具有快速的细胞渗透性,使其适用于离体组织研究。
酶活实验
该化合物不用于纯化酶结合测定受体占有率。取而代之的是,采用标准的PKA活性测定方法。对于cAMP依赖性PKA激活测定,采用非放射性方法:配制反应混合物,其中包含50 mM Tris-HCl(pH 7.5)、10 mM MgCl2、0.1 mM ATP、50 uM kemptide底物(LRRASLG)和0.1 ug PKA全酶。加入0.1-100 uM 6-Bnz-cAMP钠盐。在30℃孵育10分钟。使用PKA激酶活性试剂盒,通过ELISA或ADP-Glo发光法检测磷酸化肽,该试剂盒使用针对磷酸化kemptide的特异性抗体。测定激活的EC50值。使用cAMP(1-100 uM)作为完全激活的阳性对照。可以使用基于 FRET 的 EPAC 传感器在单独的检测中评估 Epac 激活情况。
细胞实验
对于基于细胞的检测:将HEK293T、HeLa或原代心肌细胞接种于6孔板(1×10⁶个细胞/孔),培养至70-80%汇合度。细胞在无血清培养基中过夜饥饿。然后,用6-Bnz-cAMP钠盐(1-500 uM)或溶剂(对照)处理细胞15-60分钟。通过Western blotting检测磷酸化CREB(p-CREB Ser133)来评估PKA的激活情况。对于功能研究,在处理前24小时将含有CRE-荧光素酶的报告质粒转染到细胞中。处理6小时后,裂解细胞并测量荧光素酶活性。或者,将细胞与基于FRET的PKA活性报告分子(例如AKAR3)孵育。实时FRET成像可以捕捉PKA激活的动力学过程。与 PKA 抑制剂 H-89 (10 uM) 共同治疗证实了其特异性。
动物实验
对于啮齿动物体内研究:使用雄性C57BL/6小鼠(8-10周龄)。将6-Bnz-cAMP钠盐溶解于无菌PBS或生理盐水中,浓度为10 mg/mL。小鼠接受腹腔注射,剂量为25-100 mg/kg。注射后30-120分钟采集血液和组织样本。对于心脏研究,将大鼠麻醉后,通过导管将6-Bnz-cAMP以10-100 μM的浓度注入左前降支冠状动脉,持续10分钟。对于记忆研究,小鼠接受海马内注射(0.5-2 μg/侧)。治疗后,对动物进行行为学测试(例如,新物体识别、恐惧条件反射)。在实验终点,采集脑组织,并通过免疫组织化学或Western blot检测CREB磷酸化(p-CREB Ser133)以确认PKA激活。
药代性质 (ADME/PK)
目前尚无6-Bnz-cAMP钠盐的药代动力学数据。该化合物是一种环核苷酸类似物,在一定程度上能抵抗磷酸二酯酶(PDE)的降解,但仍可能在体内发生水解。N6位的苯甲酰基修饰增强了细胞渗透性和PKA选择性,同时赋予其一定的PDE抵抗性。小鼠腹腔注射后,组织浓度在30-60分钟内达到峰值。该化合物可能经肾脏排泄,或被组织中的PDE和磷酸酶代谢。目前尚未发表正式的ADME研究。该化合物溶于水(≥50 mg/mL)和DMSO(≥100 mg/mL)。储备液在-20℃下可稳定保存数月。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
根据安全数据表,6-Bnz-cAMP钠盐可能引起皮肤和眼睛刺激。吞咽有害(预计口服LD50为500-2000 mg/kg)。吸入粉尘可能引起呼吸道刺激。目前尚无致癌性、致突变性或生殖毒性数据。该化合物在推荐的储存条件下稳定(粉末,-20℃,干燥,避光)。应采取标准实验室防护措施:通风橱、手套、护目镜、实验服。皮肤接触后,用肥皂和水清洗;眼睛接触后,用清水冲洗15分钟。根据美国交通部(DOT)的规定,该化合物不属于运输危险品。
参考文献

[1]. PKA and Epac synergistically inhibit smooth muscle cell proliferation. J Mol Cell Cardiol. 2011 Jan;50(1):87-98.

其他信息
6-Bnz-cAMP钠盐并非已获批准的药物,也无临床试验或监管审批历史。它是一种研究用化学品,用作信号转导研究的药理学工具。该化合物常与Epac特异性激活剂(例如8-CPT-2Me-cAMP)联合使用,以解析PKA和Epac通路在细胞过程(例如基因表达、胰岛素分泌、心肌收缩力、突触可塑性和免疫细胞活化)中的相对作用。该化合物仅供研究使用。对PKA选择性的理解也为开发用于治疗心力衰竭、糖尿病和神经系统疾病的治疗性cAMP类似物提供了信息。然而,该化合物本身并未被开发为药物。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C17H15N5NAO7P
分子量
455.29
精确质量
455.06
CAS号
1135306-29-4
PubChem CID
23672707
外观&性状
White to off-white solid powder
tPSA
161
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
10
可旋转键数目(RBC)
3
重原子数目
31
分子复杂度/Complexity
716
定义原子立体中心数目
4
SMILES
C1[C@@H]2[C@H]([C@H]([C@@H](O2)N3C=NC4=C(N=CN=C43)NC(=O)C5=CC=CC=C5)O)OP(=O)(O1)[O-].[Na+]
InChi Key
SPYGSKQRPXISIB-FKVBDRBCSA-M
InChi Code
InChI=1S/C17H16N5O7P.Na/c23-12-13-10(6-27-30(25,26)29-13)28-17(12)22-8-20-11-14(18-7-19-15(11)22)21-16(24)9-4-2-1-3-5-9;/h1-5,7-8,10,12-13,17,23H,6H2,(H,25,26)(H,18,19,21,24);/q;+1/p-1/t10-,12-,13-,17-;/m1./s1
化学名
sodium;N-[9-[(4aR,6R,7R,7aS)-7-hydroxy-2-oxido-2-oxo-4a,6,7,7a-tetrahydro-4H-furo[3,2-d][1,3,2]dioxaphosphinin-6-yl]purin-6-yl]benzamide
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中,避免吸湿/受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.1964 mL 10.9820 mL 21.9640 mL
5 mM 0.4393 mL 2.1964 mL 4.3928 mL
10 mM 0.2196 mL 1.0982 mL 2.1964 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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