| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Lactate dehydrogenase A (LDHA)[1]
Lactate dehydrogenase A (LDHA) |
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| 体外研究 (In Vitro) |
由于糖酵解增强，葡萄糖消耗增加，这种现象被称为“瓦博格效应”，它将癌细胞与健康细胞区分开来。与侵袭性癌症相关的一种重要的糖酵解酶是乳酸脱氢酶A（LDHA），它也被认为是丙酮酸转化为乳酸过程中的主要酶[1]。
GNE-140 外消旋体是乳酸脱氢酶 A (LDHA) 的强效抑制剂，LDHA 是糖酵解途径中的关键酶，可将丙酮酸转化为乳酸。该外消旋体可干扰糖酵解，并以 0.43 uM 的 IC50 值抑制 MIA PaCa-2 胰腺癌细胞的增殖。它还能降低葡萄糖摄取，IC50 值为 0.47 uM。利用氧化磷酸化 (OXPHOS) 而非糖酵解的胰腺癌细胞系对 GNE-140 具有固有耐药性，但可使用 OXPHOS 抑制剂苯乙双胍使其重新敏感。该外消旋体可降低乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。活性 (R)-对映体是强效的 LDHA 抑制剂，而 (S)-对映体活性较低或无活性。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在小鼠中，(R)-GNE-140（5 mg/kg）表现出较高的生物利用度。在之前的枪击模拟实验中，(R)-GNE-140在50至200 mg/kg剂量下显示出更高的暴露量。[2]
目前尚无GNE-140外消旋体的具体体内数据；然而，其活性(R)-对映体已进行过体内研究。基于(R)-对映体的活性，由于活性较低的(S)-对映体的存在，预计外消旋体在高剂量下也具有体内疗效。体内研究将包括给荷瘤小鼠给药，以评估肿瘤生长抑制情况、糖酵解通量（通过¹⁸F-FDG PET成像）和乳酸水平。外消旋体主要用作对照或用于比较研究。 |
| 酶活实验 |
重组人LDHA酶在大肠杆菌中表达并纯化。LDHA活性测定通过测量丙酮酸转化为乳酸并伴随NADH氧化的偶联反应来实现。反应混合物包含Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）、丙酮酸（1-10 mM）、NADH（100-200 uM）以及不同浓度的GNE-140外消旋体（0.001-100 uM）。加入LDHA酶（10-100 ng）启动反应。在37℃下，监测340 nm处吸光度（NADH氧化）在5-10分钟内的下降。计算初始反应速率（V0）。IC50值由剂量-反应曲线确定。活性(R)-对映体通常比外消旋体活性更高。对于外消旋体，由于存在无活性的 (S)-对映体，其 IC50 值可能是 (R)-对映体的两倍左右。
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| 细胞实验 |
GNE-140 处理可模拟 LS174T 和 B16 细胞系中 LDHA/B 双基因敲除的表型[2]。最近，Boudreau 等人证实，特异性 LDHA 和 LDHB 抑制剂 GNE-140 能够抑制高糖酵解胰腺癌细胞系（如 MiaPaca2）的生长。因此，我们很想知道这种抑制剂是否能够迅速重新激活氧化磷酸化 (OXPHOS)，并维持野生型 (WT) LS174T 和 B16 细胞系的活力和生长。我们用不同浓度的 GNE-140 处理 WT 和 LDHA/B 双敲除 (LDHA/B-DKO) 细胞，结果表明，已知可抑制 LDHA 和 LDHB 活性的 10 μM 浓度可降低 WT 细胞的生长，但对本文报道的两种 LDHA/B-DKO 细胞系没有影响。这项为期 9 至 12 天的长期实验证明，在所用浓度下，该化合物没有脱靶效应。此外，我们利用Seahorse生物分析仪分析了GNE-140短期处理野生型细胞的代谢后果。如图8 E-H所示，10 μM GNE-140处理1小时即可模拟LDHA/B-DKO细胞的表型，表现为糖酵解抑制和氧化磷酸化（OXPHOS）重新激活。因此，LDHA/B-DKO细胞的生长表型并非由基因敲除两步过程中的长期生长选择所致。这一基于遗传学和LDHA及LDHB特异性药理学敲除的发现，有力地证明在常氧条件下，瓦博格效应对于体外肿瘤生长并非必需。[2]
人胰腺癌细胞系（例如，MIA PaCa-2、PANC-1）和乳腺癌细胞系在含10%胎牛血清和抗生素的DMEM培养基中培养。将细胞接种于96孔板中，并用GNE-140外消旋体（0.001-100 uM）处理24-72小时。采用MTT、CCK-8或CellTiter-Glo法检测细胞增殖（MIA PaCa-2细胞的IC50 = 0.43 uM）。使用2-NBDG（2-脱氧-2-[(7-硝基-2,1,3-苯并恶二唑-4-基)氨基]-D-葡萄糖）荧光葡萄糖类似物或[14C]-2-脱氧葡萄糖测定葡萄糖摄取。将细胞用 GNE-140 外消旋体（0.1-10 uM）处理 4-24 小时，然后用 2-NBDG（100 uM）孵育 30-60 分钟，并测量荧光强度（激发波长 465 nm，发射波长 540 nm）。葡萄糖摄取的 IC50 值为 0.47 uM。使用比色法乳酸检测试剂盒测定培养上清液中的乳酸生成量。使用 Seahorse XF 分析仪测定细胞外酸化率 (ECAR) 和耗氧率 (OCR)，以评估糖酵解通量和线粒体呼吸。在耐药性研究中，将细胞与苯乙双胍（一种氧化磷酸化抑制剂，1-10 uM）共同处理，以使耐药细胞对 GNE-140 敏感。采用 MTT 法评估细胞活力。也可进行克隆形成实验。 |
| 动物实验 |
小鼠药代动力学研究[1] 本研究评估了化合物29 ((R)-GNE-140)在雌性CD-1小鼠（n=3）中单次静脉注射（IV）1.0 mg/kg和口服（PO）5 mg/kg的溶菌混悬液后的药代动力学。静脉注射所用溶剂为10/50/40 EtOH/PEG400/50 mM柠檬酸盐pH 3 (v/v, 10/50/40)，口服所用溶剂为0.5%甲基纤维素：0.2%吐温水溶液（MCT）。静脉注射组分别于给药后0.033、0.25、1、2、4和6小时采集血样。口服组分别于给药后0.25、0.5、1、2、4和6小时采集血样。在50、100和200 mg/kg的高剂量口服药代动力学研究中，分别于给药后0.25、0.5、1、2、4、6和8小时采集血样。血样采集后29分钟内进行离心，并收集血浆。血浆样本储存在约-70°C，直至采用液相色谱-串联质谱法（LCMS/MS）分析化合物浓度。药代动力学参数采用WinNonlin软件的非房室模型方法进行测定。[2]
目前尚无已发表的GNE-140外消旋体的体内动物研究。对于活性(R)-对映体(GNE-140)，典型的体内研究方案包括使用MIA PaCa-2或其他敏感癌细胞系在免疫缺陷小鼠中建立皮下肿瘤异种移植模型。当肿瘤体积达到100-200 mm³时，将GNE-140（10-100 mg/kg）溶于合适的溶剂（例如，10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45%生理盐水）中，每日一次通过灌胃或腹腔注射给药。研究终点包括：肿瘤体积、肿瘤重量、体重和生存期。采集血浆和肿瘤组织用于药代动力学分析和药效学评价：检测血浆和肿瘤中的乳酸水平（比色法），通过蛋白质印迹法或定量PCR检测糖酵解酶（LDHA、PKM2、GLUT1）的表达，以及通过免疫组化法检测肿瘤增殖（Ki-67）。¹⁸F-FDG PET成像可评估体内肿瘤的葡萄糖摄取。对于外消旋体，可采用类似的方案，但需调整剂量（通常为活性对映体剂量的2倍）以补偿非活性对映体的存在。这些方案尚未针对GNE-140外消旋体进行验证。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
GNE-140 外消旋体的具体药代动力学数据尚不清楚。活性 (R)-对映体 (R)-GNE-140 已在临床前研究中得到表征：其口服生物利用度良好，口服吸收率中等至良好。血浆半衰期适合每日一次或两次给药。预计外消旋体具有相似的药代动力学参数，但由于活性较低的 (S)-对映体的存在，其有效暴露量会降低。(S)-对映体的代谢清除率也可能不同，从而可能影响整体药代动力学特征。溶解度：DMSO ≥10 mg/mL。分子量：499.04。外消旋体的 LogP 值为 4.6，表明其具有高亲脂性，且血浆蛋白结合率可能较高。储存：粉末在 -20℃ 下可保存 3 年；溶剂在 -80℃ 下可保存 6 个月。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无GNE-140外消旋体的具体毒性数据。对于LDHA抑制剂，其主要靶向毒性与糖酵解抑制有关，这可能会影响快速增殖的正常细胞（例如，肠道上皮细胞、骨髓细胞、免疫细胞）。长期抑制LDHA可能导致乳酸性酸中毒，因为LDHA负责清除丙酮酸并再生NAD+。在细胞研究中，GNE-140外消旋体可降低癌细胞的活力，但也可能影响正常细胞。体内毒性研究将评估最大耐受剂量（MTD）、体重减轻、器官毒性（肝脏、肾脏、胰腺）、血液学参数和乳酸水平。目前尚无关于外消旋体或活性对映体的数据公开。仅供研究使用，操作时请采取标准实验室防护措施（戴手套、穿实验服、佩戴护目镜）。不得用于人体。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
癌细胞与正常细胞的不同之处在于它们消耗更多的葡萄糖，这种现象被称为“瓦博格效应”，因为它会增强糖酵解。乳酸脱氢酶A (LDHA) 是一种关键的糖酵解酶，是侵袭性癌症的标志，被认为是丙酮酸转化为乳酸的主要酶。为了阐明其在肿瘤生长中的作用，我们敲除了两种癌细胞系（人结肠腺癌细胞和小鼠黑色素瘤细胞）中的LDHA和LDHB基因。出乎意料的是，LDHA或LDHB基因敲除均未显著降低乳酸分泌。相反，双基因敲除（LDHA/B-DKO）完全抑制了LDH活性和乳酸分泌。此外，在常氧条件下，LDHA/B-DKO细胞通过将代谢途径转向氧化磷酸化（OXPHOS）来克服基因敲除的影响，与野生型细胞相比，其体外和体内增殖率均降低了2倍。然而，在低氧条件（1%氧气）下，LDHA/B抑制完全阻断了体外细胞生长，这与其对氧化磷酸化（OXPHOS）的依赖性相符。有趣的是，LDHA/B双敲除（DKO）基因对激活呼吸和细胞耐力生长的阻断并非长期适应的结果。用LDHA/B特异性抑制剂（GNE-140）处理野生型细胞可以药理学地重现这些现象。这些发现表明，瓦博格效应并非完全依赖于高水平的LDHA表达，因为抑制发酵糖酵解需要同时敲除LDHA和LDHB。最后，我们证明，即使在侵袭性肿瘤中，瓦博格效应也并非必需，而LDHA/B基因破坏导致的代谢向氧化磷酸化（OXPHOS）的转变才是肿瘤逃逸和生长的原因。 [1]
一系列三取代羟基内酰胺被鉴定为人类乳酸脱氢酶A的强效酶促和细胞抑制剂。通过基于结构的设计和物理性质优化，我们筛选出几种在MiaPaca2细胞系中对乳酸IC50值小于10 μM的抑制剂。经过对该系列化合物的优化，我们获得了化合物29，它是一种强效的细胞活性分子（MiaPaca2 IC50 = 0.67 μM），并且在小鼠口服给药后也显示出良好的暴露水平。[2] GNE-140 外消旋体（CAS：1802977-61-2）是 (R)-GNE-140 和 (S)-GNE-140 的外消旋混合物。(R)-GNE-140 是乳酸脱氢酶 A (LDHA) 的强效特异性抑制剂，而 (S)-对映异构体的活性较低。LDHA 是糖酵解途径中的关键酶，可将丙酮酸转化为乳酸。抑制 LDHA 可降低乳酸生成、糖酵解通量和细胞增殖，尤其是在依赖有氧糖酵解的癌细胞中（瓦博格效应）。研究表明，GNE-140 外消旋体可抑制 MIA PaCa-2 胰腺癌细胞的增殖（IC50 = 0.43 μM），降低葡萄糖摄取（IC50 = 0.47 μM），并减少乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。分子式：C25H23ClN2O3S2，分子量：499.04。溶解度：DMSO ≥10 mg/mL。纯度：>99%。储存：粉末，-20℃保存3年。未获准用于临床。仅供研究使用。参考文献：GNE-140 外消旋体是 (R)-GNE-140 和 (S)-GNE-140 的外消旋混合物，是一种强效且特异性的乳酸脱氢酶 A (LDH-A) 抑制剂。它能抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭，使其成为癌症研究的潜在候选药物。 |
| 分子式 |
C25H23CLN2O3S2
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|---|---|
| 分子量 |
499.04
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| 精确质量 |
498.083
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| 元素分析 |
C, 60.17; H, 4.65; Cl, 7.10; N, 5.61; O, 9.62; S, 12.85
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| CAS号 |
1802977-61-2
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| 相关CAS号 |
(R)-GNE-140;2003234-63-5;(S)-GNE-140;2003234-64-6
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| PubChem CID |
118384725
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
739.0±60.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
400.7±32.9 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±2.4 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.699
|
| LogP |
3.84
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| tPSA |
112
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
33
|
| 分子复杂度/Complexity |
714
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
C1COCCN1C2=CC=C(C=C2)C3(CC(=O)C(C(=O)N3)SC4=CC=CC=C4Cl)C5=CSC=C5
|
| InChi Key |
GLDDJXYFHWRGPI-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C25H23ClN2O3S2/c26-20-3-1-2-4-22(20)33-23-21(29)15-25(27-24(23)30,18-9-14-32-16-18)17-5-7-19(8-6-17)28-10-12-31-13-11-28/h1-9,14,16,23H,10-13,15H2,(H,27,30)
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| 化学名 |
3-(2-chlorophenyl)sulfanyl-6-(4-morpholin-4-ylphenyl)-6-thiophen-3-ylpiperidine-2,4-dione
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| 别名 |
GNE-140 (racemate); 1802977-61-2; GNE-140 racemate; CHEMBL3335792; 3-(2-chlorophenyl)sulfanyl-6-(4-morpholin-4-ylphenyl)-6-thiophen-3-ylpiperidine-2,4-dione; 3-[(2-chlorophenyl)sulfanyl]-6-[4-(morpholin-4-yl)phenyl]-6-(thiophen-3-yl)piperidine-2,4-dione; GNE140; SCHEMBL17100418;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 20 mg/mL (40.08 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0038 mL | 10.0192 mL | 20.0385 mL | |
| 5 mM | 0.4008 mL | 2.0038 mL | 4.0077 mL | |
| 10 mM | 0.2004 mL | 1.0019 mL | 2.0038 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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