PSI-7976 is a prodrug that must be metabolized to the active triphosphate form (PSI-7409) to inhibit the HCV NS5B RNA-dependent RNA polymerase (RdRp). The active triphosphate metabolite PSI-7409 has been previously shown to be a potent inhibitor of HCV NS5B RdRp with a Ki value of 0.42 μM. [1]

PSI-7976在clone A HCV复制子细胞中抑制HCV RNA复制，EC50为1.07 ± 0.04 μM，EC90为2.99 ± 0.82 μM。相比之下，另一种非对映异构体PSI-7977的EC50为0.092 ± 0.005 μM，EC90为0.29 ± 0.08 μM；异构体混合物PSI-7851的EC50为0.149 ± 0.001 μM，EC90为0.51 ± 0.16 μM。[1]
在使用clone A细胞（表达CatA但不表达CES1）的细胞代谢研究中，用50 μM PSI-7976孵育后，活性三磷酸PSI-7409的细胞内浓度低于PSI-7977。在原代人肝细胞（同时表达CatA和CES1）中，用PSI-7976、PSI-7977或PSI-7851孵育后形成的PSI-7409量相似。[1]

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PSI-7976 和 PSI-7977 这两种非对映异构体在 HCV 复制子测试中被认为是 HCV RNA 复制的更有效抑制剂，将 PSI-7976 和 PSI-7977 组合在一起，得到 PSI-7851。与 PSI-7977 相比，PSI-7976 更容易被羧酸酯酶 1 (CES1) 水解。此外，根据动力学数据，PSI-7976 是比组织蛋白酶 A (CatA) 更有效的 CES1 底物 [1]。

PSI-7976的组织蛋白酶A水解实验：纯化的重组人CatA通过在25 mM MES缓冲液（pH 6.0）中加入1 μg/ml组织蛋白酶L和5 mM DTT，在37°C孵育30分钟进行激活，然后用10 μM E-64灭活CatL。CatA测定在100 μl反应混合物中进行，包含活化的CatA（0.1 μg）、100 μM PSI-7976、25 mM MES pH 6.0、100 mM NaCl、1 mM DTT和0.1% Nonidet P-40。在37°C孵育1小时后，反应混合物通过YM-10 Microcon滤膜过滤以去除蛋白质，滤液用PARTISIL 10 SAX柱进行HPLC分析，使用缓冲液B（1 M KH2PO4 pH 3.5）在90分钟内从0到100%的线性梯度洗脱。监测共同中间体PSI-352707的时间依赖性生成。当CatA与PSI-7976孵育150分钟时，与以PSI-7977为底物相比，形成的PSI-352707量约少18倍。[1]
PSI-7976与CatA的稳态动力学参数使用¹⁴C标记化合物测定。反应在37°C下于100 μl体积中进行，含有不同浓度的PSI-7976，缓冲液为50 mM Hepes pH 7.0、100 mM NaCl和0.1% Nonidet P-40，活化的CatA终浓度为0.1 μg/ml。在每个时间点取10 μl等分试样点样在DE81纸上，用1 mM甲酸铵洗涤三次，每次5分钟，然后用乙醇洗涤，干燥后置于液体闪烁计数器中计数。动力学参数为：Km = 880 ± 430 μM，kcat = 0.30 ± 0.07 min⁻¹，kcat/Km = 0.0003 μM⁻¹•min⁻¹。[1]
PSI-7976的羧酸酯酶1水解实验：CES1测定在50 mM Tris/HCl缓冲液（pH 7.5）中进行，含有100 μM PSI-7976和0.4 μg CES1。在37°C孵育1小时后，样品如上所述过滤并进行HPLC分析。PSI-7976与CES1反应时呈现时间依赖性的产物增加。PSI-7976与CES1的动力学参数为：Km = 51 ± 1 μM，kcat = 0.27 ± 0.02 min⁻¹，kcat/Km = 0.0053 μM⁻¹•min⁻¹。相比之下，PSI-7977与CES1的动力学行为复杂，无法测定动力学参数。[1]

PSI-7976 HCV复制子实验：将clone A HCV复制子细胞以1,500个/孔接种在96孔板中，加入2倍系列稀释的药物（总体积100 μl/孔）。将板在37°C、5% CO2条件下孵育4天。弃去上清液，使用RNeasy 96试剂盒提取总RNA，并按所述方法进行扩增。测定HCV RNA的ΔCt值，计算EC90。使用"无药"对照确定HCV RNA的最大量。PSI-7976的EC50为1.07 ± 0.04 μM，EC90为2.99 ± 0.82 μM。[1]
细胞代谢研究：将clone A细胞（约5×10⁶个/T75培养瓶）或原代人肝细胞（约5×10⁶个/T75培养瓶）接种并过夜孵育以使其贴壁。然后用新鲜培养基中的50 μM PSI-7976在37°C、5% CO2条件下孵育细胞长达24小时。在选定时间点，将细胞胰酶消化、计数，以1,200 rpm离心5分钟，将细胞沉淀悬浮于1 ml冷的60%甲醇中，在-20°C过夜孵育。样品以14,000 rpm离心5分钟，上清液用SpeedVac浓缩仪干燥，并在-20°C保存。残留物重悬于100 μl水中，用SAX柱通过离子交换HPLC进行分析，使用缓冲液B（1 M KH2PO4 pH 3.5）在90分钟内从0到100%的线性梯度洗脱，在254 nm处进行UV检测。使用标准曲线计算细胞内PSI-7409浓度，并根据正常人肝实质细胞每1×10⁶细胞3 μl体积转换为微摩尔浓度。在不表达CES1的clone A细胞中，PSI-7977产生的PSI-7409浓度高于PSI-7976，而PSI-7851产生中等浓度。在表达CatA和CES1的原代人肝细胞中，PSI-7976、PSI-7977和PSI-7851观察到的PSI-7409浓度相似。[1]

PSI-7976在细胞内通过多步途径代谢为活性三磷酸PSI-7409。在同时表达CatA和CES1的原代人肝细胞中，PSI-7976、PSI-7977和异构体混合物PSI-7851形成的PSI-7409量相似。相比之下，在不表达CES1的clone A细胞中，PSI-7976产生的细胞内PSI-7409浓度低于PSI-7977。[1]
PSI-7976是CatA和CES1两者的底物。PSI-7976与CatA的动力学参数为：Km = 880 ± 430 μM，kcat = 0.30 ± 0.07 min⁻¹，kcat/Km = 0.0003 μM⁻¹•min⁻¹。与CES1的动力学参数为：Km = 51 ± 1 μM，kcat = 0.27 ± 0.02 min⁻¹，kcat/Km = 0.0053 μM⁻¹•min⁻¹。[1]

毒性概述
识别和用途：索非布韦为白色至类白色结晶固体。索非布韦是一种直接作用于丙型肝炎病毒的抗病毒药物（泛基因型聚合酶抑制剂）。它与其他抗病毒药物联合使用，用于治疗成人慢性丙型肝炎病毒（HCV）基因1、2、3或4型感染，包括等待肝移植的肝细胞癌患者和合并人类免疫缺陷病毒（HIV）感染的患者。索非布韦必须作为多药联合治疗方案的一部分，不应单独用于治疗慢性HCV感染。人体暴露和毒性：记录在案的最高索非布韦剂量为单次给予59名健康受试者1200 mg超治疗剂量。在此剂量水平下未观察到不良反应，不良事件的发生频率和严重程度与安慰剂组和索非布韦400 mg治疗组报告的不良事件相似。索非布韦未诱导人外周血淋巴细胞染色体畸变。动物研究：在大鼠中进行了GS-9851/PSI-7851（非对映异构体混合物）的单剂量毒性研究。在最高剂量1800 mg/kg下，未观察到死亡、临床症状、体重变化、肉眼病理改变或肝脏和肾脏器官重量变化。在小鼠中进行了长达13周的重复给药口服毒性研究，在大鼠中进行了长达26周的重复给药口服毒性研究，在犬中进行了长达39周的重复给药口服毒性研究，评估了索非布韦或GS-9851（索非布韦及其立体异构体的1:1非对映异构体混合物）。主要靶器官包括心血管系统、肝胆系统、胃肠道系统和造血（红系）系统。在为期7天的GS-9851毒性研究中，大鼠每日剂量为2000 mg/kg，犬每日剂量为1500 mg/kg，结果显示（但不限于）胃黏液分泌增加、糖原耗竭、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）和胆红素水平升高，犬还出现相关的肝脏组织病理学改变；大鼠（例如，多灶性心肌纤维变性）和犬（例如，QT/QTc间期延长）均出现心脏不良反应。在GS-9851或索非布韦的长期研究中，未观察到肝脏和心脏的上述不良反应。在对大鼠（26周）和犬（39周）进行的慢性毒性研究中，观察到的不良反应包括（但不限于）胃肠道相关临床症状（例如软便和呕吐）以及平均红细胞指数下降（例如下降约10%），这些症状主要见于犬的高剂量组。在对大鼠进行评估时，索非布韦对胚胎-胎儿活力或生育力没有影响。在对大鼠和兔进行的索非布韦发育毒性研究中，未观察到致畸作用。在对大鼠进行的产前和产后发育研究中，索非布韦对后代的行为、生殖或发育没有不良影响。在最高测试剂量下，主要循环代谢物GS-331007的暴露量至少是推荐临床剂量下人体暴露量的8倍。从出生前（子宫内）到哺乳期第20天，每天暴露于GS-331007（AUC）的大鼠，其后代生育能力正常。GS-331007的日暴露量约为推荐临床剂量下人类暴露量的12倍。对小鼠和大鼠进行了为期两年的索非布韦致癌性研究。雄性小鼠的给药剂量高达200 mg/kg/天，雌性小鼠高达600 mg/kg/天；雄性和雌性大鼠的给药剂量高达750 mg/kg/天。在小鼠和大鼠的最高测试剂量下，未观察到药物相关肿瘤发生率增加，导致主要循环代谢物 GS-331007 的 AUC 暴露量分别约为推荐临床剂量下人类暴露量的 7 倍（小鼠）和 30 倍（大鼠），以及 13 倍和 17 倍（大鼠）。索非布韦在一系列体外或体内试验中均未显示出遗传毒性，包括细菌致突变性试验和体内小鼠微核试验。

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相互作用
利福平（一种强效的肠道 P-gp 诱导剂）与索非布韦合用可能导致索非布韦和 GS-331007 的血浆浓度降低，并可能导致索非布韦的治疗效果降低。利福平和索非布韦不应同时使用。
预计利福布汀会降低索非布韦和GS-331007的血浆浓度，这可能导致索非布韦的疗效降低。不建议同时使用利福布汀和索非布韦。
当与索非布韦同时使用时，某些抗癫痫药物（例如卡马西平、奥卡西平、苯巴比妥、苯妥英钠）预计会降低索非布韦和GS-331007的血浆浓度，这可能导致索非布韦的疗效降低。不建议同时使用这些抗癫痫药物和索非布韦。
索非布韦是乳腺癌耐药蛋白（BCRP）的底物；GS-331007不是BCRP的底物。 BCRP抑制剂可能导致索非布韦血浆浓度升高，但不会增加GS-331007的血浆浓度。索非布韦和GS-331007并非BCRP抑制剂；与BCRP底物药物发生药代动力学相互作用的可能性很小。
有关索非布韦的更多相互作用（完整）数据（共13项），请访问HSDB记录页面。

[1]. Mechanism of activation of PSI-7851 and its diastereoisomer PSI-7977. J Biol Chem. 2010 Nov 5;285(45):34337-47.

PSI-7976是PSI-7851的Rp非对映异构体，而PSI-7977是Sp非对映异构体。两种异构体在第一步水解步骤中表现出立体特异性差异：CatA优先水解PSI-7977，而CES1优先水解PSI-7976。一旦羧酸酯部分被水解，导致活性三磷酸PSI-7409形成的其余步骤对两种异构体是相同的。[1]
在同时表达CatA和CES1的原代人肝细胞中，两种异构体产生相似水平的活性三磷酸，表明在HCV感染的肝细胞中两者将具有相似的活性。然而，在常用的HCV复制子筛选系统（使用Huh7来源的clone A细胞，其中CES1表达显著低于原代人肝细胞）中，氨基磷酸酯化合物的抗HCV活性可能与其体内活性不直接相关。[1]

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治疗用途
Sovaldi 是一种丙型肝炎病毒 (HCV) 核苷酸类似物 NS5B 聚合酶抑制剂，适用于治疗慢性丙型肝炎 (CHC) 感染，可作为联合抗病毒治疗方案的一部分。/美国产品标签包含/
开始使用 Sovaldi 治疗时应考虑以下几点：不建议使用 Sovaldi 单药治疗慢性丙型肝炎 (CHC)。治疗方案和疗程取决于病毒基因型和患者人群。治疗反应因宿主和病毒基线因素而异。

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药物警告
FDA 警告，当抗心律失常药物胺碘酮与丙型肝炎药物 Harvoni（雷迪派韦/索非布韦）或 Sovaldi（索非布韦）与另一种用于治疗丙型肝炎感染的直接抗病毒药物联合使用时，可能会出现严重的心率减慢。美国食品药品监督管理局 (FDA) 已在 Harvoni 和 Sovaldi 的药品标签中添加了关于严重心率减慢（称为症状性心动过缓）的信息。FDA 建议医护人员不应将 Harvoni 或 Sovaldi 与另一种直接抗病毒药物（例如在研药物达卡他韦或奥利西奥（西美普韦））以及胺碘酮联合使用。FDA 对提交的上市后不良事件报告进行审查后发现，当 Harvoni 或 Sovaldi 与另一种直接抗病毒药物以及胺碘酮联合使用时，患者可能会出现严重且危及生命的症状性心动过缓。报告显示，一名患者因心脏骤停死亡，三名患者需要植入心脏起搏器来调节心律。其他患者在停用丙型肝炎药物或胺碘酮（或两者都停用）后康复。这些事件的原因尚无法确定。 FDA将继续监测Harvoni和Sovaldi是否存在严重症状性心动过缓的风险，并进一步调查胺碘酮与这些丙型肝炎药物合用导致心脏相关事件的原因。
不建议将索非布韦与肠道P-糖蛋白（P-gp）转运系统的强效诱导剂（例如利福平、圣约翰草）合用，因为这可能导致索非布韦血浆浓度显著降低，并可能降低其疗效。
已有报道称，接受索非布韦联合利巴韦林或联合聚乙二醇干扰素α和利巴韦林治疗的患者出现贫血。在临床试验中，接受索非布韦、聚乙二醇干扰素α和利巴韦林治疗 12 周的患者中，有 21% 报告出现贫血，而接受聚乙二醇干扰素α和利巴韦林治疗 24 周但不使用索非布韦的患者中，有 12% 报告出现贫血。此外，接受索非布韦、聚乙二醇干扰素α和利巴韦林治疗12周的患者中，23%报告血红蛋白浓度低于10 g/dL，而接受聚乙二醇干扰素α和利巴韦林治疗24周（未联合索非布韦）的患者中，这一比例为14%。
接受索非布韦联合利巴韦林和聚乙二醇干扰素α治疗的患者中，超过20%报告的不良反应包括疲劳、头痛、恶心、失眠和贫血。
有关索非布韦的更多药物警告（完整）数据（共13条），请访问HSDB记录页面。

C22H29FN3O9P

529.45

529.163

C, 49.91; H, 5.52; F, 3.59; N, 7.94; O, 27.20; P, 5.85

1190308-01-0

Sofosbuvir;1190307-88-0;Sofosbuvir impurity C;1496552-28-3;Sofosbuvir impurity A;1496552-16-9;Sofosbuvir-d6;1868135-06-1;Sofosbuvir-13C,d3

45375809

White to off-white solid powder

2.047

167.99

3

11

11

36

913

6

C[C@@H](C(=O)OC(C)C)NP(=O)(OC[C@@H]1[C@H]([C@@]([C@@H](O1)N2C=CC(=O)NC2=O)(C)F)O)OC3=CC=CC=C3

TTZHDVOVKQGIBA-IAAJYNJHSA-N

InChI=1S/C22H29FN3O9P/c1-13(2)33-19(29)14(3)25-36(31,35-15-8-6-5-7-9-15)32-12-16-18(28)22(4,23)20(34-16)26-11-10-17(27)24-21(26)30/h5-11,13-14,16,18,20,28H,12H2,1-4H3,(H,25,31)(H,24,27,30)/t14-,16+,18+,20+,22+,36?/m0/s1

propan-2-yl (2S)-2-[[[(2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-dioxopyrimidin-1-yl)-4-fluoro-3-hydroxy-4-methyloxolan-2-yl]methoxy-phenoxyphosphoryl]amino]propanoate

psi-7976; psi7976; psi 7976

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。