| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
HBsAg(IC50: 2.8 nM);HBeAg(IC50: 2.6 nM);HBV DNA(IC50: 3.2 nM); TENT; PAPD5 and PAPD7
RG7834 R-isomer targets a host factor involved in HBV RNA stability and translation. It reduces the levels of HBV RNAs, including pregenomic RNA (pgRNA) and subgenomic RNAs, leading to inhibition of HBV replication. The compound does not directly inhibit the viral polymerase but acts through a host-dependent mechanism. The R-isomer is the active enantiomer with potent anti-HBV activity. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
除了对HBsAg表达具有强效抑制作用外，RG7834在HepaG2.2.15细胞中对HBV DNA的产生也表现出极强的抑制活性，其IC50 < 0.13 nM，而核苷类药物拉米夫定（3-TC）的IC50约为25 nM。[1] 在HBV感染的dHepaRG细胞中，RG7834在纳摩尔浓度下即可抑制HBsAg、HBeAg和HBV DNA的表达，而RG7834的对映体(R)-64在浓度高达1 μM时对这三种病毒标志物均未显示出显著的抑制作用。核苷类药物恩替卡韦（ETV）对HBV DNA的产生具有极强的抑制活性，IC50 = 0.06 nM，但对HBsAg和HBeAg没有抑制活性。 RG7834 和 ETV 之间不同的抗病毒谱表明，RG7834 的作用机制与核苷类药物不同。[1]
为了评估 RG7834 的抗病毒选择性，我们对 15 种不同的 DNA 和 RNA 病毒进行了测试。RG7834 对所有这些病毒的 IC50 值均高于 10 μM，表明 RG7834 对 HBV 具有高度特异性。[1] 为了更好地了解其作用机制，我们尝试了不同的方法来鉴定 DHQ 系列化合物的分子靶点。最终，我们确定非经典聚腺苷酸 RNA 聚合酶，即 PAP 相关结构域蛋白 5 和 7 (PAPD5 和 PAPD7) 为 DHQ 化合物的蛋白靶点。 [1] RG7834 ((S)-(+)-64) 是一种高效且高选择性的口服生物利用度乙型肝炎病毒 (HBV) 抑制剂，其 IC50 值分别为 2.8、2.6 和 3.2 nM，可有效抑制 dHepaRG 细胞中的 HBV DNA 和抗原（HBsAg 和 HBeAg）[1]。 RG7834 不抑制 CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9（IC50 > 50 μM）和 hERG 通道[1]。 RG7834 诱导的 HBV mRNA 降解具有两个催化阶段[2]。 RG7834 抑制 PAPD5/7 的 poly(A) 聚合酶功能[2]。 RG7834 诱导的 HBV RNA 3′ 端修剪发生在细胞核和细胞质中[2]。 在体外实验表明，RG7834 R-异构体在细胞培养模型中对HBV复制具有强效抑制作用。它能降低HBV感染肝细胞中HBV RNA和病毒蛋白（HBsAg和HBeAg）的水平。现有文献中未详细列出抑制HBV复制的具体EC50值。该化合物对HBV具有选择性，对其他病毒的抑制作用较弱，且对肝细胞系的细胞毒性较低。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
HBV感染的人肝嵌合uPA-SCID小鼠对RG7834（4 mg/kg，每日两次，持续21天）表现出抗HBV疗效[1]。
在小鼠中，RG7834（2、14.5 mg/kg，口服）的半衰期为4.9小时，且具有良好的口服生物利用度[1]。 在HBV感染的人肝嵌合uPA-SCID小鼠中评估了RG7834的体内抗HBV疗效，并以恩替卡韦（ETV）作为对照。经过21天4 mg/kg、每日两次的给药治疗后，RG7834显著降低了HBsAg和HBeAg水平，而ETV对这两种抗原的降低没有明显疗效。RG7834（4 mg/kg）治疗后，血清HBV DNA水平降低了0.6 log10，而ETV对HBV DNA的降低作用更为显著（图3）。体内实验结果与体外观察结果一致，详细的生物学结果已于近期报道[1]。体内实验表明，RG7834 R-异构体在包括人源化肝嵌合小鼠和转基因小鼠模型在内的乙型肝炎病毒（HBV）感染动物模型中具有显著的抗HBV活性。口服RG7834可显著降低血清中HBV DNA、HBsAg和HBeAg的水平。该化合物已在临床前研究中被评估为治疗慢性HBV感染的潜在药物。 |
| 酶活实验 |
微粒体稳定性测定[1]
为测定微粒体稳定性，将微粒体与待测化合物在磷酸钾缓冲液（100 mM，pH 7.4）中于 37 °C 预孵育 10 分钟。最终孵育体系包含 0.5 mg/mL 肝微粒体蛋白、1 mM NADP、3 mM 葡萄糖-6-磷酸、3 mM MgCl₂ 和 0.05 mg/mL 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，总体积为 400 μL 磷酸钾缓冲液（100 mM，pH 7.4）。加入 NADPH 再生系统启动反应。在不同时间点（0、3、6、9、15 和 30 分钟），取 50 μL 样品，并用 150 μL 含内标的乙腈终止反应。沉淀和离心后，取上清液进行LC-MS/MS分析。 血浆蛋白结合试验[1] 使用96孔微平衡透析装置测定游离化合物，该装置配备分子量截留膜，截留分子量为12–14 kDa。地西泮用作阳性对照。混合小鼠和人血浆购自Biopredic公司。化合物在2–5个化合物的透析盒中进行测定，初始总浓度为1 μM，其中一个化合物作为阳性对照。通过测定阳性对照的游离分数来检测膜的完整性。将等体积的空白透析缓冲液（pH 7.4的Soerensen缓冲液）和含有物质的基质样品分别加入受体室和供体室。然后密封HTD透析模块，并在37 °C、5% CO2环境下孵育5小时。然后采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）对药物浓度进行定量分析。 RG7834 R-异构体的HBV复制抑制试验包括用不同浓度的化合物处理HBV感染的肝细胞（例如HepG2.2.15细胞或原代人肝细胞）。处理3-7天后，采用定量PCR检测细胞外和细胞内HBV DNA水平。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测培养上清液中的HBsAg和HBeAg水平。根据剂量反应曲线计算HBV复制抑制的EC50值。 |
| 细胞实验 |
HBsAg 检测[1]
将 HepG2.2.15 细胞以 1.5 × 10⁴ 个细胞/孔的密度接种于白色 96 孔板中，每个处理设置两个复孔。用 DMSO 配制的化合物进行 3 倍系列稀释处理细胞。所有孔中 DMSO 的最终浓度均为 1%，DMSO 作为无药物对照。使用 HBsAg 化学发光免疫分析 (CLIA) 试剂盒半定量检测分泌的 HBV 抗原水平。检测时，每孔取 50 μL 培养上清液，并按照制造商的说明进行操作。使用 CellTiter-Glo 试剂盒测定细胞毒性。使用 E-WorkBook Suite 软件生成剂量-反应曲线，并外推 IC₅₀ 和 CC₅₀ 值。 IC50 和 CC50 定义为化合物浓度（或条件培养基的对数稀释度），在该浓度下，HBsAg 分泌和细胞毒性分别比未用药对照组降低 50%。 HBV DNA 检测[1] 该检测采用实时定量 PCR (qPCR) 直接测量细胞外 HBV DNA 拷贝数。将 HepG2.2.15 细胞接种于 96 孔微孔板中。仅使用内侧孔以减少细胞培养过程中观察到的“边缘效应”，外侧孔则加入完全培养基以尽量减少样品蒸发。次日，洗涤 HepG2.2.15 细胞，并将培养基更换为含有不同浓度待测化合物的完全培养基，每个浓度设置三个复孔。以 3TC 作为阳性对照，阴性对照仅加入培养基。三天后，将培养基更换为含有适当稀释药物的新鲜培养基。在首次给予测试化合物六天后，收集细胞培养上清液，用蛋白酶处理，然后用于实时 qPCR/TaqMan 检测，以确定 HBV DNA 拷贝数。抗病毒活性根据 HBV DNA 水平的降低（IC50）计算。 Caco-2 细胞实验[1] 将药物配制成 10 μM 的起始药物溶液，溶于 pH 7.4 的 HBSS 缓冲液中。对于从顶端到基底外侧的方向，将 200 μL 起始药物溶液加入 Caco-2 细胞的顶端，将 700 μL pH 7.4 的 HBSS 缓冲液（1% DMSO）加入 Caco-2 细胞的基底外侧。对于从基底外侧到顶端的方向，将 700 μL 起始药物溶液加入 Caco-2 细胞的基底外侧，将 200 μL pH 7.4 的 HBSS 缓冲液（1% DMSO）加入 Caco-2 细胞的顶端。将培养板置于37℃、5% CO₂、95%湿度条件下孵育1小时。测定顶端和基底外侧的药物含量，并计算A至B和B至A方向的渗透性。 为评估RG7834 R-异构体的细胞活性，将HBV感染的肝细胞接种于96孔板中，并用不同浓度的化合物处理。处理3-7天后，收集细胞培养上清液，通过定量PCR检测HBV DNA，并通过ELISA检测HBsAg/HBeAg。使用MTT或CellTiter-Glo法监测细胞活力，以确保观察到的抗病毒作用并非由细胞毒性引起。通过定量RT-PCR检测HBV RNA水平，以验证其作用机制。 |
| 动物实验 |
动物模型：HBV感染的人肝嵌合uPA-SCID小鼠[1]
剂量：4 mg/kg 给药途径：每日两次，持续21天 结果：显示出良好的口服生物利用度[1]。可使小鼠血清HBV DNA降低0.6 log10，并降低HBsAg和HBeAg水平。 小鼠药代动力学(PK)分析[1] 在小鼠中评估了该化合物，给药剂量分别为静脉注射1 mg/kg、口服2 mg/kg和口服14.5 mg/kg。静脉注射剂量的溶液制备方法为：将固体溶于5% DMSO、40% PEG400和55%生理盐水中；口服剂量的溶液制备方法为：将固体溶于1% RC-591水溶液中。在预定时间点采集血样至含肝素钠的试管中，并通过离心（4 °C，8000 rpm，6 min）分离血浆，并冷冻保存于 -80 °C 直至进行生物分析。口服给药组的肝脏样本在采血后立即采集。肝脏样本随后用生理盐水冲洗，用滤纸吸干，并保存于 -80 °C 直至进行生物分析。采用液相色谱-串联质谱法 (LC-MS/MS) 测定血浆和肝脏样本中的化合物浓度。使用 WinNonlin Professional 5.2 的非房室模型模块分析数据。本药代动力学研究已获得罗氏医药中国研发中心机构动物伦理委员会 (IACUC) 的批准。 在乙型肝炎病毒 (HBV) 感染的动物模型中评估 RG7834 R-异构体的体内疗效，例如人源化肝嵌合小鼠（uPA/SCID 小鼠，含人肝细胞）或 HBV 转基因小鼠。动物经口给予不同剂量的RG7834 R-异构体，持续特定时间（例如4-8周）。定期采集血清样本，用于检测HBV DNA、HBsAg和HBeAg水平。研究结束时采集肝组织，用于检测肝内HBV DNA和RNA水平。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
基于其良好的抗乙型肝炎病毒（HBV）活性、细胞毒性、溶解性和肝微粒体稳定性，RG7834被选作进一步的理化性质和ADME表征对象。测得的log D值为1.28，pKa值为5.79（酸性），且RG7834在Caco-2细胞渗透性试验中表现出良好的渗透性，Papp(A–B)为12.8 × 10⁻⁶ cm s⁻¹，Papp比值为1.3。RG7834在人血浆和鼠血浆中的游离分数分别为32.8%和35.2%。通过静脉注射（iv）和口服（po）给药，在雄性BALB/c小鼠中评估了RG7834的单剂量药代动力学（SDPK）特征。表6总结了相关结果。RG7834在小鼠体内显示出中等的血浆清除率(Cl) (41.9 mL min–1 kg–1)和良好的口服生物利用度(F) (62%)。RG7834还显示出令人满意的口服暴露量，尤其是良好的肝脏暴露量，肝脏暴露量是血浆暴露量的4倍。尽管我们没有游离肝脏药物浓度的数据，但肝脏中RG7834的高总浓度被认为是抗HBV药物的理想特征，因为肝脏是慢性HBV感染的靶器官。随后，在食蟹猴中进行了RG7834的SDPK研究，结果显示静脉给药后血浆清除率较低(4.6 mL min–1 kg–1)。RG7834还显示出良好的口服生物利用度(57%)和4.9小时的口服半衰期。[1]
RG7834的R-异构体具有良好的口服生物利用度。现有资料中未详细列出具体的药代动力学参数（例如，Cmax、Tmax、半衰期、AUC）。该化合物的分子量为520.96，分子式为C27H25ClN4O5。它是一种小分子，具有适合口服给药的特性。通常以粉末形式储存于-20°C。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
同时，我们也评估了RG7834的体外安全性。在体外药物相互作用（DDI）评估中，RG7834对CYP3A4、CYP2D6和CYP2C9的IC50值均大于50 μM。它没有表现出时间依赖性抑制（TDI）或CYP诱导问题。此外，RG7834表现出优异的体外毒理学特性，不抑制hERG通道，谷胱甘肽加合物（GSH）反应呈阳性，Ames试验（致突变性）和微核试验（MNT，染色体断裂）均未发现异常。[1]
现有文献中未提供RG7834 R-异构体的具体毒性数据。作为一种研究化合物，它仅供实验室使用，尚未获准用于人体治疗。该化合物是HBV复制的强效抑制剂，其毒性特征已在临床前研究中得到评估。处理该化合物时应遵循标准安全预防措施。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染是严重的公共卫生负担，现有疗法难以达到令人满意的治愈率。因此，迫切需要开发作用机制（MOA）不同于现有标准疗法的新型治疗药物。RG7834 是一种二氢喹诺酮（DHQ）类化合物，是首个具有高选择性和口服生物利用度的 HBV 抑制剂。其作用机制新颖，可同时降低病毒抗原和病毒 DNA 水平。本文报道了通过表型筛选发现 RG7834 的过程，并研究了 DHQ 类化合物的构效关系（SAR）。病毒筛选结果表明，RG7834 选择性抑制 HBV，对其他 DNA 或 RNA 病毒无抑制作用。本文描述了 RG7834 的体外和体内特性，相关数据支持进一步开发该化合物作为慢性乙型肝炎病毒（HBV）治疗药物。 [1] 乙型肝炎病毒 (HBV) mRNA 的代谢依赖于宿主蛋白 PAPD5 和 PAPD7 (PAPD5/7)。PAPD5/7 是细胞内非经典聚腺苷酸聚合酶 (PAP)，其主要功能是使非编码 RNA (ncRNA) 的 3' 端发生寡腺苷酸化，从而促进其被外泌体降解。HBV 似乎利用这两种 ncRNA 质量控制因子来稳定病毒 mRNA，而不是将其降解。RG7834 是一种小分子化合物，可与 PAPD5/7 结合，并在组织培养和动物实验中抑制 HBV 基因表达。我们发现，RG7834 可使多种 HBV mRNA 不稳定，包括 3.5 kb 的前基因组/前核心 mRNA 和 2.4/2.1 kb 的乙型肝炎病毒表面蛋白 (HBs) mRNA，但最小的 0.7 kb X 蛋白 (HBx) mRNA 除外。化合物诱导的HBV mRNA不稳定性始于poly(A)尾的缩短，随后在细胞核和细胞质中加速降解。在表达HBV mRNA的细胞中，PAPD5/7与病毒RNA发生物理结合，生化实验表明，PAPD5/7的聚腺苷酸化活性很容易被RG7834抑制。此外，在PAPD5/7双敲除细胞中，最初可以合成具有正常长度poly(A)序列的病毒转录本，但几个小时后poly(A)尾就会缩短，这表明PAPD5/7参与了RNA 3'末端的加工，无论是在腺苷寡聚化过程中还是之后，并且对RNA的稳定性至关重要。[2]
RG7834 R-异构体是RG7834的R-异构体，RG7834是一种强效的乙型肝炎病毒（HBV）复制抑制剂。它是一种二氢喹诺酮（DHQ）化合物，靶向HBV RNA的稳定性。该化合物可降低HBV RNA的水平，包括前基因组RNA（pgRNA）和亚基因组RNA，从而抑制HBV复制。临床前研究表明，该化合物具有显著的抗HBV活性。 |
| 分子式 |
C22H27NO6
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|---|---|
| 分子量 |
401.452886819839
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| 精确质量 |
401.18
|
| 元素分析 |
C, 65.82; H, 6.78; N, 3.49; O, 23.91
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| CAS号 |
2072057-18-0
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| 相关CAS号 |
199482-36-3 (S-isomer hydrate);2072057-17-9 (S-isomer);2072057-18-0 (R-isomer);1802407-46-0 (racemic);
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| PubChem CID |
118261819
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| 外观&性状 |
Solid powder
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| LogP |
3.8
|
| tPSA |
85.3Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
8
|
| 重原子数目 |
29
|
| 分子复杂度/Complexity |
685
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
|
| SMILES |
CC(C)[C@H]1CC2=CC(=C(C=C2C3=CC(=O)C(=CN13)C(=O)O)OC)OCCCOC
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| InChi Key |
KBXLMOYQNDMHQT-QGZVFWFLSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C22H27NO6/c1-13(2)17-8-14-9-21(29-7-5-6-27-3)20(28-4)10-15(14)18-11-19(24)16(22(25)26)12-23(17)18/h9-13,17H,5-8H2,1-4H3,(H,25,26)/t17-/m1/s1
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| 化学名 |
(6R)-6-Isopropyl-10-methoxy-9-(3-methoxypropoxy)-2-oxo-6,7-dihydrobenzo[a]quinolizine-3-carboxylic acid
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| 别名 |
RG7834 R-isomer; RG 7834 R-isomer; RG-7834 R-isomer; RO7020322 R-isomer; RO 7020322 R-isomer; RO-7020322 R-isomer; RO0321; RO-0321; RO 0321;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4910 mL | 12.4549 mL | 24.9097 mL | |
| 5 mM | 0.4982 mL | 2.4910 mL | 4.9819 mL | |
| 10 mM | 0.2491 mL | 1.2455 mL | 2.4910 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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