| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
HBsAg(IC50: 2.8 nM);HBeAg(IC50: 2.6 nM);HBV DNA(IC50: 3.2 nM); TENT; PAPD5 and PAPD7
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| 体外研究 (In Vitro) |
除了抑制HBsAg表达的有效活性外，RG7834在HepaG2.2.15细胞中也显示出抑制HBV DNA产生的非常有效的活性，IC50＜0.13 nM，而核苷制剂拉米夫定（3-TC）的IC50约为25 nM。[1]
在HBV感染的dHepaRG细胞中，RG7834在单个数字nM浓度下抑制HBsAg、HBeAg和HBV DNA，而RG7834的对映体（R）-64在高达1μM的浓度下对所有三种病毒标志物都没有显示出显著的抑制作用。核苷药物ETV在抑制HBV DNA产生方面显示出非常有效的活性，IC50＝0.06nM，但对HBsAg和HBeAg没有活性。RG7834和ETV之间的不同抗病毒特性表明，与核苷药物相比，RG7834的MOA有差异。[1] 为了评估RG7834的抗病毒选择性，在15种不同的DNA和RNA病毒的小组中测试该化合物。RG7834对所有这些病毒的IC50均高于10μM，表明RG7834具有很高的抗HBV特异性。[1] 为了更好地了解MOA，我们尝试了不同的方法来识别DHQ化学系列的分子靶标。最后，非经典的聚（A）RNA聚合酶，包含PAP相关结构域的蛋白质5和7（PAPD5和PAPD7）被鉴定为DHQ化合物的蛋白质靶标。[1] RG7834 ((S)-(+)-64) 的 IC50 分别为 2.8、2.6 和 3.2 nM，是一种有效且高度选择性的口服生物可利用的 HBV 抑制剂，可有效抑制 dHepaRG 细胞中的 HBV DNA 和抗原（HBsAg 和 HBeAg） [1]. RG7834 不会抑制 CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9 (IC50 >50 μM) 和 hERG 通道[1]。 RG7834诱导的HBV信使核糖核酸衰变具有两个催化阶段[2] RG7834抑制PAPD5/7的poly（A）聚合酶功能[2] RG7834诱导的HBV核糖核酸3′剪切发生在细胞核和细胞质中[2]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
感染 HBV 的人肝嵌合 uPA-SCID 小鼠表现出对 RG7834（4 mg/kg，每天两次，持续 21 天）的抗 HBV 功效[1]。
在小鼠中，RG7834（2、14.5 mg/kg、 po) 的半衰期为 4.9 小时，具有良好的口服生物利用度[1]。 以ETV为对照，在HBV感染的人肝嵌合uPA SCID小鼠中评估体内抗HBV疗效。在用4 mg/kg每日两次给药治疗21天后，RG7834显著降低了HBsAg和HBeAg，而ETV对这两种抗原的降低没有明显疗效。RG7834在4 mg/kg的治疗下也将血清HBV DNA降低了0.6 log10，ETV显示出更明显的HBV DNA降低（图3）。体内结果与体外观察一致，最近报道了详细的生物学结果[1]。 |
| 酶活实验 |
微粒体稳定性测定[1]
为了测定微粒体的稳定性，将微粒体与试验化合物在37°C的磷酸钾缓冲液（100 mM，pH 7.4）中预孵育10分钟。最终孵育混合物由0.5mg微粒体蛋白/mL肝微粒体、1mM NADP、3mM葡萄糖6-磷酸、3mM MgCl2和0.05mg/mL葡萄糖6-磷酸脱氢酶组成，总体积为400μL磷酸钾缓冲液（100mM，pH 7.4）。反应是通过添加NADPH再生系统来引发的。在不同的时间点（0、3、6、9、15和30分钟），取等分试样（50μL），用150μL含内标乙腈骤冷。沉淀和离心后，通过LC-MS/MS分析上清液。 血浆蛋白结合测定[1] 使用分子量截止膜为12–14 kDa的96孔微平衡透析装置测定未结合的化合物。地西泮作为阳性对照。汇集的小鼠和人血浆购自Biopredic。在2-5个试剂盒中测量化合物，初始总浓度为1μM，其中一个试剂盒化合物为阳性对照。通过测定阳性对照的未结合分数值来测试膜的完整性。将等体积的空白透析缓冲液（pH 7.4的Soerensen缓冲液）和含有物质的基质样品分别加载到受体和供体室中。然后密封HTD透析块，并在5%CO2环境下于37°C的培养箱中保存5小时。然后通过LC-MS/MS对药物浓度进行定量。 |
| 细胞实验 |
HBsAg检测[1]
将HepG2.2.15细胞以1.5×104个细胞/孔的速度一式两份接种到白色96孔板中。用DMSO中的化合物的3倍连续稀释系列处理细胞。所有孔中的最终DMSO浓度为1%，并且DMSO用作非药物对照。应用HBsAg化学发光免疫分析（CLIA）试剂盒半定量测定乙型肝炎病毒分泌抗原水平。对于检测，使用50μL/孔培养上清液，并按照制造商的说明进行程序。使用CellTiter Glo测定细胞毒性。使用E-WorkBook Suite生成剂量-反应曲线，并外推IC50和CC50值。IC50和CC50定义为化合物浓度（或条件培养基对数稀释度），在该浓度下，与无药物对照相比，HBsAg的诱导和细胞毒性分别降低50%。 HBV DNA检测[1] 该检测采用实时qPCR直接测量细胞外HBV DNA拷贝数。将HepG2.2.15细胞接种在96孔微量滴定板中。只有内部孔用于减少细胞培养过程中观察到的“边缘效应”，外部孔填充完整的培养基以帮助最大限度地减少样品蒸发。第二天，洗涤HepG2.2.15细胞，并用含有不同浓度的试验化合物的完整培养基（一式三份）代替培养基。3TC被用作阳性对照，而单独的培养基被添加到细胞中作为阴性对照。三天后，用含有适当稀释的药物的新鲜培养基代替培养基。首次给药试验化合物后6天，收集细胞培养上清液，用Pronase处理，然后用于实时qPCR/TaqMan测定以测定HBV DNA拷贝数。抗病毒活性是根据HBV DNA水平（IC50）的降低来计算的。 Caco-2含量测定[1] 该药物是用pH 7.4 HBSS中的10μM输入药物溶液制备的。对于顶端到基底外侧的方向，向Caco-2细胞的顶端侧添加200μL输入药物溶液，向基底外侧添加700μL pH 7.4 HBSS（1%DMSO）。对于从基底外侧到顶端侧的方向，向Caco-2细胞的基底外侧添加700μL输入药物溶液，向顶端侧添加200μL pH 7.4 HBSS（1%DMSO）。将平板在37°C、95%湿度条件下的5%CO2中孵育1小时。测定顶端侧和基外侧的药物量，并计算从A到B和从B到A方向的渗透性。 |
| 动物实验 |
动物模型：HBV感染的人肝嵌合uPA-SCID小鼠[1]
剂量：4 mg/kg 给药途径：每日两次，持续21天 结果：显示出良好的口服生物利用度[1]。可使小鼠血清HBV DNA降低0.6 log10，并降低HBsAg和HBeAg水平。 小鼠药代动力学(PK)分析[1] 在小鼠中评估了该化合物，给药剂量分别为静脉注射1 mg/kg、口服2 mg/kg和口服14.5 mg/kg。静脉注射剂量的溶液制备方法为：将固体溶于5% DMSO、40% PEG400和55%生理盐水中；口服剂量的溶液制备方法为：将固体溶于1% RC-591水溶液中。在预定时间点采集血样至含肝素钠的试管中，并通过离心（4 °C，8000 rpm，6 min）分离血浆，并冷冻保存于 -80 °C 直至进行生物分析。口服给药组的肝脏样本在采血后立即采集。肝脏样本用生理盐水冲洗，用滤纸吸干，并保存于 -80 °C 直至进行生物分析。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定血浆和肝脏样本中的化合物浓度。使用 WinNonlin Professional 5.2 的非房室模型模块分析数据。本药代动力学研究已获得罗氏制药中国研发中心机构动物伦理委员会（IACUC）的批准。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
基于其良好的抗乙型肝炎病毒（HBV）活性、细胞毒性、溶解度和肝微粒体稳定性，RG7834被选中进行进一步的理化性质和ADME表征。测得的log D值为1.28，pKa值为5.79（酸性），RG7834在Caco-2细胞渗透试验中表现出良好的渗透性，Papp(A–B)为12.8 × 10⁻⁶ cm s⁻¹，Papp比值为1.3。RG7834在人血浆和鼠血浆中的游离分数分别为32.8%和35.2%。在雄性BALB/c小鼠中，通过静脉注射（iv）和口服（po）给药，评估了RG7834的单剂量药代动力学（SDPK）特征。结果汇总于表6。RG7834在小鼠体内具有中等的血浆清除率(Cl) (41.9 mL min–1 kg–1)和良好的口服生物利用度(F) (62%)。RG7834还表现出令人满意的口服暴露量，尤其是良好的肝脏暴露量，其肝脏暴露量是血浆暴露量的4倍。尽管我们没有游离肝脏药物浓度数据，但RG7834在肝脏中较高的总浓度被认为是抗HBV药物的理想特性，因为肝脏是慢性HBV感染的靶器官。随后进行了RG7834在食蟹猴体内的SDPK研究，结果显示静脉给药后血浆清除率较低 (4.6 mL min–1 kg–1)。RG7834还表现出良好的口服生物利用度 (57%)，口服半衰期为4.9小时。[1]
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
同时，我们也评估了RG7834的体外安全性。在体外药物相互作用（DDI）评估中，RG7834对CYP3A4、CYP2D6和CYP2C9的IC50值均大于50 μM。它不存在时间依赖性抑制（TDI）问题，也不存在CYP诱导问题。此外，RG7834表现出优异的体外毒理学特性，未显示hERG通道抑制、谷胱甘肽加合物（GSH）阳性反应，且在Ames试验（致突变性）和微核试验（MNT，染色体断裂性）中均未发现异常。[1]
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染是严重的公共卫生负担，现有疗法无法达到令人满意的治愈率。因此，亟需开发作用机制（MOA）与现有标准疗法不同的新型治疗药物。RG7834 是一种二氢喹诺酮（DHQ）类化合物，是首个具有高选择性和口服生物利用度的HBV抑制剂，其作用机制新颖，可同时降低病毒抗原和病毒DNA水平。本文报道了通过表型筛选发现 RG7834，并研究了DHQ类化合物的构效关系（SAR）。病毒筛选结果表明，RG7834 可选择性抑制HBV，而对其他DNA或RNA病毒无抑制作用。本文描述了RG7834的体外和体内特性，数据支持进一步开发该化合物作为慢性乙型肝炎病毒（HBV）治疗药物。[1]乙型肝炎病毒（HBV）mRNA代谢依赖于宿主蛋白PAPD5和PAPD7（PAPD5/7）。PAPD5/7是细胞内非经典聚腺苷酸聚合酶（PAP），其主要功能是使非编码RNA（ncRNA）的3'端寡腺苷酸化，从而被外泌体降解。HBV似乎利用这两种ncRNA质量控制因子来稳定病毒mRNA，而不是降解。RG7834是一种小分子化合物，可与PAPD5/7结合，并在组织培养和动物实验中抑制HBV基因的表达。我们报道了RG7834能够使多种HBV mRNA不稳定，包括3.5 kb的前基因组/前核心区mRNA和2.4/2.1 kb的乙型肝炎病毒表面蛋白（HBs）mRNA，但最小的0.7 kb X蛋白（HBx）mRNA除外。化合物诱导的HBV mRNA不稳定始于poly(A)尾的缩短，随后在细胞核和细胞质中加速降解。在表达HBV mRNA的细胞中，PAPD5/7均与病毒RNA存在物理结合，并且在生化实验中，PAPD5/7的聚腺苷酸化活性易受RG7834抑制。此外，在 PAPD5/7 双敲除细胞中，最初可以合成具有规则长度 poly(A) 序列的病毒转录本，但几个小时后就会缩短，这表明 PAPD5/7 参与 RNA 3' 末端加工，无论是在腺苷寡聚化期间还是之后，对于 RNA 的稳定性至关重要。[2]
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| 分子式 |
C22H27NO6
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|---|---|
| 分子量 |
401.452886819839
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| 精确质量 |
401.18
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| 元素分析 |
C, 65.82; H, 6.78; N, 3.49; O, 23.91
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| CAS号 |
2072057-18-0
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| 相关CAS号 |
199482-36-3 (S-isomer hydrate);2072057-17-9 (S-isomer);2072057-18-0 (R-isomer);1802407-46-0 (racemic);
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| PubChem CID |
118261819
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| 外观&性状 |
Solid powder
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| LogP |
3.8
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| tPSA |
85.3Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
8
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| 重原子数目 |
29
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| 分子复杂度/Complexity |
685
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
CC(C)[C@H]1CC2=CC(=C(C=C2C3=CC(=O)C(=CN13)C(=O)O)OC)OCCCOC
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| InChi Key |
KBXLMOYQNDMHQT-QGZVFWFLSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C22H27NO6/c1-13(2)17-8-14-9-21(29-7-5-6-27-3)20(28-4)10-15(14)18-11-19(24)16(22(25)26)12-23(17)18/h9-13,17H,5-8H2,1-4H3,(H,25,26)/t17-/m1/s1
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| 化学名 |
(6R)-6-Isopropyl-10-methoxy-9-(3-methoxypropoxy)-2-oxo-6,7-dihydrobenzo[a]quinolizine-3-carboxylic acid
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| 别名 |
RG7834 R-isomer; RG 7834 R-isomer; RG-7834 R-isomer; RO7020322 R-isomer; RO 7020322 R-isomer; RO-7020322 R-isomer; RO0321; RO-0321; RO 0321;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4910 mL | 12.4549 mL | 24.9097 mL | |
| 5 mM | 0.4982 mL | 2.4910 mL | 4.9819 mL | |
| 10 mM | 0.2491 mL | 1.2455 mL | 2.4910 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
血清淀粉样蛋白P成分(SAP)的配体
S 38093 盐酸盐
LGD-6972 sodium
盐酸塔马替尼
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COA
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