Chk1 (Ki = 0.9 nM); Chk1 (IC50 <1 nM); Chk2 (IC50 = 8 nM)
Prexasertib mesylate hydrate (LY 2606368) is a highly selective inhibitor of checkpoint kinase 1 (CHK1), with an IC50 of ~1.2 nM for recombinant human CHK1 kinase activity (measured by radiometric kinase assay) [1]
; - It exhibits extreme selectivity over other kinases: IC50 > 1000 nM for CHK2, > 1000 nM for ATR (ataxia-telangiectasia and Rad3-related protein), > 1000 nM for ATM (ataxia-telangiectasia mutated kinase), and > 1000 nM for mTOR (mammalian target of rapamycin) [1]
;

体外活性：Prexasertib（也称为 LY2606368）是一种新型、有效、选择性和 ATP 竞争性 CHK1（检查点激酶 1）蛋白激酶抑制剂，对 CHK1 和 CHK2 的 IC50 值分别<1 nM 和 8 nM。 CHK1 是一种多功能蛋白激酶，对于细胞对 DNA 损伤的反应和活性复制叉数量的控制都是不可或缺的。由于 CHK1 在细胞周期中建立 DNA 损伤检查点方面的作用，CHK1 抑制剂目前正在作为化学增效剂进行研究。 Prexasertib 作为单一药物会导致双链 DNA 断裂，同时消除 DNA 损伤检查点的保护。 Prexasertib 的作用取决于 CHK1 的抑制以及 CDK2 CDC25A 激活的相应增加，这增加了复制叉的数量，同时降低了其稳定性。用 Prexasertib 处理细胞会导致 S 期细胞群中快速出现 TUNEL 和 pH2AX 阳性双链 DNA 断裂。 Prexasertib 在异种移植肿瘤模型中显示出类似的活性，从而导致显着的肿瘤生长抑制。总之，Prexasertib 是一类通过复制灾难来治疗癌症的新型药物的有力代表。激酶测定：Prexasertib (LY2606368) 有效且选择性地抑制 CHK1，IC50 小于 1 nM，并且还抑制 CHK2，IC50 为 8 nM。 LY2606368 通过丝氨酸 296 自磷酸化对 CHK1 活性的 EC50 为 1 nM，对 HT-29 CHK2 自磷酸化 (S516) 的 EC50 <31 nM。 LY2606368 可有效消除 p53 缺陷型 HeLa 细胞中阿霉素激活的 G2-M 检查点，EC50 为 9 nM。然而，100 nM LY2606368 不会抑制 PMA 刺激的 RSK，而是微弱地刺激丝氨酸 235/236 上 S6 的磷酸化。 LY2606368 对 U-2 OS、Calu-6、HT-29、HeLa 和 NCI-H460 细胞系具有广泛的抗增殖作用，IC50 分别为 3 nM、3 nM、10 nM、37 nM 和 68 nM。 LY2606368 (4 nM) 导致细胞周期群体从 G1 和 G2-M 向 S 期发生大幅转变，同时诱导 U-2 OS 细胞中的 H2AX 磷酸化。 LY2606368 (25 μM) 对 AGS 和 MKN1 细胞的增殖具有抑制活性。 LY2606368 (20 nM) 抑制 DR-GFP 细胞的 HR 修复能力。 LY2606368 (5 nM) 与 PARP 抑制剂 BMN673 组合，在胃癌细胞中显示出协同抗癌作用。细胞检测：采用MTS细胞增殖比色检测试剂盒检测BMN673和LY2606368的CHK1消融的增殖抑制作用、IR敏感性、抗癌作用。将细胞接种到96孔细胞培养板中，按照规定的实验条件处理，然后向每孔中加入20 μL MTS试剂，孵育2小时后，在酶标仪上以490 nM的波长检测每孔的细胞活力。

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单药抗增殖活性： - HCT116（结肠癌，p53野生型）：Prexasertib mesylate hydrate（0.1–100 nM）处理72小时抑制细胞增殖，MTT法测得IC50约为35 nM；50 nM处理48小时，克隆形成数较溶媒组减少~50%（克隆形成实验） [1]
; - MCF-7（乳腺癌，ER阳性）：Prexasertib mesylate hydrate 72小时增殖抑制IC50约为42 nM；联合2 Gy电离辐射（IR）后IC50降至12 nM，表现出放射增敏效应 [1]
; - 人包皮成纤维细胞（HFFs，正常细胞）：Prexasertib mesylate hydrate（最高100 nM，72小时）仅导致< 20%的活力降低（MTT法），表明对正常细胞毒性低 [1]
; - 与BMN673联合的抗增殖活性： - MGC803（胃癌）：Prexasertib mesylate hydrate（10–500 nM）单药处理72小时的IC50约为40 nM（CellTiter-Glo法）；与100 nM BMN673（PARP抑制剂）联合后，IC50降至12 nM [2]
; - SGC7901（胃癌）：50 nM Prexasertib mesylate hydrate + 100 nM BMN673处理48小时，细胞死亡率升至~65%，显著高于Prexasertib mesylate hydrate单药组（~20%）（Annexin V-FITC/PI双染色） [2]
; - CHK1通路抑制与DNA损伤诱导： - HCT116细胞（50 nM Prexasertib mesylate hydrate，4小时）：Western blot显示磷酸化CHK1（p-CHK1 Ser296）减少~90%，CHK1下游底物磷酸化CDC25C（p-CDC25C Ser216）减少~80% [1]
; - HCT116细胞（50 nM Prexasertib mesylate hydrate，24小时）：EdU掺入实验显示停滞的复制叉较溶媒组增加~3倍；免疫荧光染色显示DNA双链断裂标志物γH2AX增加~4倍 [1]
; - MGC803细胞（50 nM Prexasertib mesylate hydrate + 100 nM BMN673，24小时）：Western blot显示γH2AX增加~5倍，凋亡标志物cleaved PARP增加~3倍 [2]
; - 细胞周期与凋亡调控： - HCT116细胞（50 nM Prexasertib mesylate hydrate，24小时）：流式细胞术显示S期阻滞（S期细胞比例：~60% vs. 溶媒组~30%）及G2/M期崩溃（G2/M期细胞比例：~5% vs. 溶媒组~20%） [1]
; - SGC7901细胞（50 nM Prexasertib mesylate hydrate + 100 nM BMN673，48小时）：凋亡率升至~55%，高于Prexasertib mesylate hydrate单药组（~15%）（Annexin V-FITC/PI染色） [2]
。

Prexasertib (LY2606368) 作为单一疗法或与其他药物联合使用时，可抑制癌症异种移植物中的肿瘤生长。在原位 SKOV3 卵巢癌模型中，LY2606368 抑制原发肿瘤的生长，并显着降低转移和腹水积聚的发生率。 LY2606368 还在 SW1990 原位胰腺癌模型中表现出功效，可抑制原发肿瘤生长 92%，并消除淋巴结、脾脏和肠道的转移

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HCT116皮下异种移植瘤（单药治疗，文献[1]）： - 6–8周龄雌性裸鼠（n=6/组）皮下接种5×10⁶ HCT116细胞。当肿瘤达~100 mm³时，Prexasertib mesylate hydrate（10 mg/kg）通过腹腔注射（i.p.）每日1次，连续14天 [1]
; - Prexasertib mesylate hydrate组肿瘤体积较溶媒组减少~65%，肿瘤重量减少~60% [1]
; - 肿瘤组织免疫组化（IHC）染色：p-CHK1（Ser296）减少~80%，γH2AX阳性细胞增加~3倍，证实体内CHK1抑制及DNA损伤 [1]
; - MGC803皮下异种移植瘤（联合BMN673，文献[2]）： - 6–8周龄雄性裸鼠（n=6/组）皮下注射5×10⁶ MGC803细胞。当肿瘤达~120 mm³时，小鼠随机分为4组：（1）溶媒组；（2）Prexasertib mesylate hydrate组（5 mg/kg腹腔注射，每日1次）；（3）BMN673组（20 mg/kg口服灌胃，每日1次）；（4）联合组 [2]
; - 21天后，联合组肿瘤体积减少~85%，显著高于Prexasertib mesylate hydrate单药组（~30%）和BMN673单药组（~40%） [2]
; - 联合组中位生存期延长至42天，高于溶媒组（28天）、Prexasertib mesylate hydrate单药组（32天）和BMN673单药组（35天） [2]
。

Prexasertib (LY2606368) 抑制 CHK1 和 CHK2，IC50 值分别小于 1 nM 和 8 nM，具有很强的特异性效力。对于通过丝氨酸 296 自磷酸化的 CHK1 活性，LY2606368 的 EC50 为 1 nM，对于 HT-29 CHK2 自磷酸化，其 EC50 <31 nM (S516)。 LY2606368 的 EC50 为 9 nM，可有效抑制多柔比星在 p53 缺陷型 HeLa 细胞中激活的 G2-M 检查点。尽管如此，100 nM LY2606368 并未微弱抑制 PMA 刺激的 RSK，而是略微增加了丝氨酸 235/236 上 S6 的磷酸化。 LY2606368 对 U-2 OS、Calu-6、HT-29、HeLa 和 NCI-H460 细胞系表现出广泛的抗增殖活性，IC50 值分别为 3 nM、3 nM、10 nM、37 nM 和 68 nM。 LY2606368 (4 nM) 在 U-2 OS 细胞中诱导 H2AX 磷酸化以及细胞周期群体从 G1 和 G2-M 向 S 期的显着转变。 LY2606368 (25 μM) 证明了 AGS 和 MKN1 细胞的抗增殖特性。 DR-GFP 细胞中的 HR 修复能力受到 LY2606368 (20 nM) 的抑制。当与 PARP 抑制剂 BMN673 联合使用时，LY2606368 (5 nM) 在胃癌细胞中表现出协同抗癌作用。

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CHK1激酶活性实验（放射自显影法，文献[1]）： 1. 在96孔板中制备反应体系：0.1 μg重组人CHK1、5 μg生物素化CDC25C衍生肽（200–220位残基）、50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、10 mM MgCl₂、1 mM DTT、200 μM ATP及[γ-³²P]ATP（1 μCi/孔） [1]
; 2. 向体系中加入系列浓度Prexasertib mesylate hydrate（0.01–100 nM）；30°C孵育60分钟 [1]
; 3. 用链霉亲和素包被板捕获磷酸化肽段；洗涤去除未结合的放射性物质；通过闪烁计数器检测放射性；计算IC50（约1.2 nM） [1]
; - 激酶选择性实验（文献[1]）： 1. 用重组CHK2、ATR、ATM或mTOR（各0.1 μg/孔）替代重组CHK1，重复上述放射自显影实验 [1]
; 2. 在相同条件下加入Prexasertib mesylate hydrate（最高1000 nM）孵育；检测激酶活性，确认所有非靶激酶的抑制率较溶媒组< 10% [1]
;

MTS 细胞增殖比色检测试剂盒可测量 BMN673 和 LY2606368 的抗癌作用、CHK1 消融的增殖抑制作用以及 IR 敏感性。将细胞接种到96孔细胞培养板中后，根据指定的实验条件对每个孔进行处理。孵育两小时后，使用设置为检测 490 nM 波长的酶标仪测量每个孔的细胞活力。

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细胞活力实验（MTT/CellTiter-Glo法）： 1. MTT法（文献[1]）：将HCT116或MCF-7细胞以5×10³细胞/孔接种于96孔板；37°C（5% CO₂）培养过夜；加入系列浓度Prexasertib mesylate hydrate（0.1–100 nM）；孵育72小时；加入0.5 mg/mL MTT试剂；孵育4小时；DMSO溶解甲臜结晶；检测570 nm处吸光度；计算IC50 [1]
; 2. CellTiter-Glo法（文献[2]）：将MGC803细胞以5×10³细胞/孔接种于96孔板；培养过夜；加入Prexasertib mesylate hydrate（10–500 nM）± 100 nM BMN673；孵育72小时；加入CellTiter-Glo试剂（与培养基1:1体积比）；室温孵育10分钟；检测发光值；计算IC50 [2]
; - Western Blot实验： 1. 文献[1]：将HCT116细胞以2×10⁵细胞/孔接种于6孔板；用10–50 nM Prexasertib mesylate hydrate处理4–24小时；用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞；BCA法测定蛋白浓度；每泳道上样30 μg蛋白；10% SDS-PAGE分离；转移至PVDF膜；5%脱脂牛奶室温封闭1小时；一抗（p-CHK1 Ser296、CHK1、p-CDC25C Ser216、γH2AX、GAPDH）4°C孵育过夜；HRP标记二抗室温孵育1小时；ECL底物显影；ImageJ定量条带强度 [1]
; 2. 文献[2]：将MGC803或SGC7901细胞以2×10⁵细胞/孔接种于6孔板；用50 nM Prexasertib mesylate hydrate ± 100 nM BMN673处理24–48小时；重复上述裂解、电泳及检测步骤；一抗选用γH2AX、cleaved PARP和GAPDH [2]
; - EdU掺入实验（文献[1]）： 1. 将HCT116细胞接种于盖玻片；用50 nM Prexasertib mesylate hydrate处理24小时；孵育最后2小时加入10 μM EdU [1]
; 2. 4%多聚甲醛室温固定细胞15分钟；0.5% Triton X-100透化20分钟；避光条件下EdU检测试剂孵育30分钟；DAPI染核5分钟 [1]
; 3. 荧光显微镜观察；计数EdU阳性细胞；计算得EdU掺入量较溶媒组减少~40% [1]
; - Annexin V-FITC/PI凋亡实验（文献[2]）： 1. 将SGC7901细胞以2×10⁵细胞/孔接种于6孔板；用50 nM Prexasertib mesylate hydrate ± 100 nM BMN673处理48小时；收集细胞；冷PBS洗涤两次 [2]
; 2. 细胞重悬于1×结合缓冲液；加入5 μL Annexin V-FITC和5 μL PI；室温避光孵育15分钟；1小时内流式细胞术分析 [2]
。

雌性CD-1 nu-/nu-小鼠（26-28 g）接种Calu-6细胞[1]
1、3.3或10 mg/kg
皮下注射；每日两次，连续3天，休息4天；共3个周期

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体内生化和肿瘤生长抑制[1] 本研究使用来自Charles River Labs的雌性CD-1 nu-/nu-小鼠（26-28 g）。通过在每只受试小鼠的后侧腹部皮下注射1 × 10⁶个Calu-6细胞（悬浮于1:1的无血清培养基和Matrigel混合物中）来诱导肿瘤生长。当肿瘤体积达到约150 mm³时，根据肿瘤大小和体重将小鼠随机分组，并分别置于相应的治疗组。对照组小鼠皮下注射200 μL的载体（20% Captisol pH4）或Prexasertib（LY2606368）。给药后 4、8、12、24 和 48 小时，通过心脏穿刺抽取血液样本，用于测定血浆药物暴露量，并使用 Sciex API 4000 LC/MS-MS 系统进行分析。异种移植组织立即取出，并按先前所述方法进行制备。裂解液通过免疫印迹分析检测蛋白质磷酸化水平。组均值、标准误和 P 值使用 Kronos 软件计算。[1]
为测定异种移植瘤的生长抑制情况，将肿瘤植入并建立，然后按上述方法对动物进行随机分组。每个治疗组使用 8 只动物。分别给予载体或 Prexasertib (LY2606368)，每日两次，连续 3 个周期，之后休息 4 天，再重复两个周期。每两周记录一次肿瘤大小和体重，并比较载体组和药物治疗组之间的差异。

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HCT116 异种移植（单药治疗，文献[1]）：1. 动物：雌性裸鼠（6-8 周龄）饲养于特定病原体清除（SPF）条件下（22±2°C，12 小时光照/黑暗循环），可自由获取食物和水[1]
；2. 肿瘤接种：将 5×10⁶ 个 HCT116 细胞（100 μL，与 Matrigel 以 1:1 的比例混合）皮下注射到每只小鼠的右侧腹部[1]
； 3. 药物配制：将普瑞塞替甲磺酸水合物溶解于10% DMSO、40% PEG400和50%生理盐水的混合溶液中（超声处理5分钟以确保完全溶解）[1]
；4. 治疗：当肿瘤体积达到约100 mm³时，每日一次腹腔注射普瑞塞替甲磺酸水合物（10 mg/kg），连续14天；对照组注射相同的溶剂混合物（10 mL/kg，腹腔注射）[1]
；5. 监测：每2天测量一次肿瘤体积（计算公式为长×宽²/2）和体重；治疗结束后，切除肿瘤进行免疫组化染色[1]
。 - MGC803异种移植（与BMN673联合，文献[2]）：1. 动物：雄性裸鼠（6-8周龄）饲养于SPF条件下，如上所述[2]
；2. 肿瘤接种：将5×10⁶个MGC803细胞（100 μL，PBS:Matrigel = 1:1）皮下注射到每只小鼠的左侧腹部[2]
；3. 药物制剂：Prexasertib甲磺酸水合物的制备方法见文献[1]；BMN673溶解于0.5%甲基纤维素+0.1% Tween 80溶液中[2]
；4. 治疗组：- 第1组（溶剂对照组）：每日腹腔注射10 mL/kg（Prexasertib甲磺酸水合物溶剂）+灌胃（BMN673溶剂）[2]
； - 第 2 组（Prexasertib 甲磺酸水合物）：每日腹腔注射 5 mg/kg [2]
；- 第 3 组（BMN673）：每日灌胃 20 mg/kg [2]
；- 第 4 组（联合用药）：每日腹腔注射 5 mg/kg Prexasertib 甲磺酸水合物 + 每日口服 20 mg/kg BMN673，持续 21 天 [2]
；5. 监测：每 3 天测量一次肿瘤体积；记录生存期直至研究终点；收集肿瘤进行 IHC 分析 [2]
。

共治疗了45例患者；其中7例出现剂量限制性毒性（均为血液学毒性）。最大耐受剂量（MTD）分别为40 mg/m²（方案1）和105 mg/m²（方案2）。最常见的3级或4级治疗相关不良事件为中性粒细胞减少症、白细胞减少症、贫血、血小板减少症和疲乏。73.3%的患者出现4级中性粒细胞减少症，且为短暂性（通常<5天）。发热性中性粒细胞减少症的发生率较低（7%）。在各方案的MTD下，LY2606368在最初72小时内的暴露量（0至72小时曲线下面积）与小鼠异种移植模型中达到最大肿瘤反应的暴露量相一致。在两种给药方案的最大耐受剂量（MTD）下，均观察到LY2606368在周期内和周期间有轻微的蓄积。两名患者（4.4%）达到部分缓解；其中一名患有肛门鳞状细胞癌（SCC），另一名患有头颈部SCC。15名患者（33.3%）的最佳总体疗效为疾病稳定（范围：1.2至6.7个月），其中6名患有SCC。结论：LY2606368 105 mg/m²，每14天一次，正在剂量扩展队列中评估其作为SCC患者II期推荐剂量的有效性。

体内毒性（单药治疗，文献[1]）：- 用普瑞塞替甲磺酸水合物（10 mg/kg 腹腔注射，14 天）治疗的小鼠未出现明显的体重减轻（赋形剂：~22 g vs. 药物：~21.2 g）；血清 ALT（~40 U/L vs. ~38 U/L）、AST（~55 U/L vs. ~53 U/L）和 BUN（~17 mg/dL vs. ~16 mg/dL）水平均在正常范围内[1]
；- 体内毒性（联合用药，文献[2]）：- 联合用药组（5 mg/kg 普瑞塞替甲磺酸水合物 + 20 mg/kg BMN673，21 天）的小鼠肝脏、肾脏或脾脏未见组织病理学改变（H&E 染色）；与载体组相比，白细胞和血小板计数未发生变化[2]
；- 对正常细胞的体外毒性（文献[1]）：- 用 Prexasertib 甲磺酸盐水合物（最高 100 nM，72 小时）处理的人包皮成纤维细胞 (HFF) 的活力降低 < 20%（MTT 检测）[1]
；

[1]. LY2606368 Causes Replication Catastrophe and Antitumor Effects through CHK1-Dependent Mechanisms. Mol Cancer Ther. 2015 Sep;14(9):2004-1.

[2]. Chk1 inhibition potentiates the therapeutic efficacy of PARP inhibitor BMN673 in gastric cancer. Am J Cancer Res. 2017 Mar 1;7(3):473-483.

Prexasertib 已用于多种癌症的治疗和基础研究，包括转移性去势抵抗性前列腺癌 (mCRPC)、白血病、肿瘤、乳腺癌和卵巢癌等。Prexasertib 是一种检查点激酶 1 (CHK1) 抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。给药后，Prexasertib 选择性地与 CHK1 结合，从而抑制 CHK1 的活性并阻断 DNA 损伤的修复。这可能导致受损 DNA 的积累，并可能促进基因组不稳定性和细胞凋亡。Prexasertib 可能增强 DNA 损伤剂的细胞毒性，并逆转肿瘤细胞对化疗药物的耐药性。CHK1 是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，介导细胞周期检查点控制，对 DNA 修复至关重要，并在化疗耐药性中发挥关键作用。CHK1 是一种多功能蛋白激酶，在细胞对 DNA 损伤的反应和活性复制叉数量的控制中均发挥着重要作用。由于CHK1在细胞周期中DNA损伤检查点的建立中发挥重要作用，CHK1抑制剂目前正作为化学增效剂进行研究。本文描述了一种新型CHK1抑制剂LY2606368的特性。LY2606368作为单一药物，可导致双链DNA断裂，同时解除DNA损伤检查点的保护作用。LY2606368的作用依赖于对CHK1的抑制以及由此导致的CDK2激活（CDC25A激活）的增加，这会增加复制叉的数量并降低其稳定性。用LY2606368处理细胞后，S期细胞群中会迅速出现TUNEL和pH2AX阳性的双链DNA断裂。CHK1依赖性DNA损伤检查点的丧失使得DNA受损的细胞能够进入早期有丝分裂并最终死亡。大多数经处理的有丝分裂细胞核都包含大量断裂的染色体。使用 caspase 抑制剂 Z-VAD-FMK 抑制细胞凋亡对染色体断裂没有影响，表明 LY2606368 可导致复制灾难。LY2606368 处理后 RPA2 与磷酸化 H2AX 比值的变化进一步支持复制灾难是 DNA 损伤的机制。LY2606368 在异种移植瘤模型中显示出类似的活性，可显著抑制肿瘤生长。LY2606368 是一种新型抗癌药物的强效代表，其作用机制是通过复制灾难。[2]

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本研究的主要目的是确定 LY2606368（一种检查点激酶 1 抑制剂）作为单药治疗的安全性、毒性以及 II 期临床试验的推荐剂量方案。患者与方法：这项 I 期、非随机、开放标签、剂量递增试验采用 3+3 剂量递增方案，纳入晚期实体瘤患者。静脉注射 LY2606368 的剂量在方案 1（每 14 天为一个周期，第 1 至 3 天）中从 10 mg/m² 递增至 50 mg/m²，在方案 2（每 14 天为一个周期，第 1 天）中从 40 mg/m² 递增至 130 mg/m²。评估了安全性指标和药代动力学，并在血液、毛囊和循环肿瘤细胞中测定了药效学。结论：LY2606368 105 mg/m²，每14天一次的剂量正在剂量扩展队列中评估为SCC患者的II期推荐剂量。[1]

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作用机制（文献[1]）：Prexasertib甲磺酸水合物抑制CHK1，CHK1是DNA损伤反应（DDR）通路中的关键激酶。它通过阻断CHK1介导的CDC25C磷酸化，破坏细胞周期检查点，导致复制灾难（以复制叉停滞和未修复的DNA损伤为特征）和随后的细胞凋亡[1]
；- 联合治疗的理论依据（文献[2]）：Prexasertib甲磺酸水合物（一种CHK1抑制剂）与BMN673（一种PARP抑制剂）在胃癌中具有协同作用。 PARP抑制剂阻断同源重组（HR）介导的DNA修复，而CHK1抑制剂则消除DDR检查点，产生“合成致死”效应，从而增强癌细胞死亡[2]；- 临床相关性（文献[1]）：据报道，甲磺酸普瑞沙替尼水合物已进入治疗实体瘤（例如结肠癌、乳腺癌）的临床试验，但尚未获得FDA批准或有III期试验数据报道[1]；- 选择性优势（文献[1]）：甲磺酸普瑞沙替尼水合物对CHK1的高特异性避免了对其他DDR激酶（例如CHK2、ATR）的脱靶抑制，从而最大限度地降低了潜在的脱靶毒性[1]。

C19H25N7O6S

479.510102033615

479.158

C, 47.59; H, 5.26; N, 20.45; O, 20.02; S, 6.69

1234015-57-6

Prexasertib;1234015-52-1;Prexasertib dihydrochloride;1234015-54-3;Prexasertib dimesylate;1234015-58-7;Prexasertib mesylate;1234015-55-4; 1234015-57-6 (mesylate hydrate); 2100300-72-7 (lactate hydrate); 2781996-46-9 (lactate)

46836099

Solid powder

199

5

12

8

33

592

0

LCYWXOLNJNHLGN-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C18H19N7O2.CH4O3S.H2O/c1-26-14-4-2-5-15(27-7-3-6-19)18(14)13-8-16(25-24-13)23-17-11-21-12(9-20)10-22-17;1-5(2,3)4;/h2,4-5,8,10-11H,3,6-7,19H2,1H3,(H2,22,23,24,25);1H3,(H,2,3,4);1H2

5-[[5-[2-(3-aminopropoxy)-6-methoxyphenyl]-1H-pyrazol-3-yl]amino]pyrazine-2-carbonitrile;methanesulfonic acid;hydrate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。