Chk1 (Ki = 0.9 nM); Chk1 (IC50 <1 nM); Chk2 (IC50 = 8 nM)

体外活性：Prexasertib（也称为 LY2606368）是一种新型、有效、选择性和 ATP 竞争性 CHK1（检查点激酶 1）蛋白激酶抑制剂，对 CHK1 和 CHK2 的 IC50 值分别<1 nM 和 8 nM。 CHK1 是一种多功能蛋白激酶，对于细胞对 DNA 损伤的反应和活性复制叉数量的控制都是不可或缺的。由于 CHK1 在细胞周期中建立 DNA 损伤检查点方面的作用，CHK1 抑制剂目前正在作为化学增效剂进行研究。 Prexasertib 作为单一药物会导致双链 DNA 断裂，同时消除 DNA 损伤检查点的保护。 Prexasertib 的作用取决于 CHK1 的抑制以及 CDK2 CDC25A 激活的相应增加，这增加了复制叉的数量，同时降低了其稳定性。用 Prexasertib 处理细胞会导致 S 期细胞群中快速出现 TUNEL 和 pH2AX 阳性双链 DNA 断裂。 Prexasertib 在异种移植肿瘤模型中显示出类似的活性，从而导致显着的肿瘤生长抑制。总之，Prexasertib 是一类通过复制灾难来治疗癌症的新型药物的有力代表。激酶测定：Prexasertib (LY2606368) 有效且选择性地抑制 CHK1，IC50 小于 1 nM，并且还抑制 CHK2，IC50 为 8 nM。 LY2606368 通过丝氨酸 296 自磷酸化对 CHK1 活性的 EC50 为 1 nM，对 HT-29 CHK2 自磷酸化 (S516) 的 EC50 <31 nM。 LY2606368 可有效消除 p53 缺陷型 HeLa 细胞中阿霉素激活的 G2-M 检查点，EC50 为 9 nM。然而，100 nM LY2606368 不会抑制 PMA 刺激的 RSK，而是微弱地刺激丝氨酸 235/236 上 S6 的磷酸化。 LY2606368 对 U-2 OS、Calu-6、HT-29、HeLa 和 NCI-H460 细胞系具有广泛的抗增殖作用，IC50 分别为 3 nM、3 nM、10 nM、37 nM 和 68 nM。 LY2606368 (4 nM) 导致细胞周期群体从 G1 和 G2-M 向 S 期发生大幅转变，同时诱导 U-2 OS 细胞中的 H2AX 磷酸化。 LY2606368 (25 μM) 对 AGS 和 MKN1 细胞的增殖具有抑制活性。 LY2606368 (20 nM) 抑制 DR-GFP 细胞的 HR 修复能力。 LY2606368 (5 nM) 与 PARP 抑制剂 BMN673 组合，在胃癌细胞中显示出协同抗癌作用。细胞检测：采用MTS细胞增殖比色检测试剂盒检测BMN673和LY2606368的CHK1消融的增殖抑制作用、IR敏感性、抗癌作用。将细胞接种到96孔细胞培养板中，按照规定的实验条件处理，然后向每孔中加入20 μL MTS试剂，孵育2小时后，在酶标仪上以490 nM的波长检测每孔的细胞活力。

Prexasertib (LY2606368) 作为单一疗法或与其他药物联合使用时，可抑制癌症异种移植物中的肿瘤生长。在原位 SKOV3 卵巢癌模型中，LY2606368 抑制原发肿瘤的生长，并显着降低转移和腹水积聚的发生率。 LY2606368 还在 SW1990 原位胰腺癌模型中表现出功效，可抑制原发肿瘤生长 92%，并消除淋巴结、脾脏和肠道的转移

Prexasertib (LY2606368) 抑制 CHK1 和 CHK2，IC50 值分别小于 1 nM 和 8 nM，具有很强的特异性效力。对于通过丝氨酸 296 自磷酸化的 CHK1 活性，LY2606368 的 EC50 为 1 nM，对于 HT-29 CHK2 自磷酸化，其 EC50 <31 nM (S516)。 LY2606368 的 EC50 为 9 nM，可有效抑制多柔比星在 p53 缺陷型 HeLa 细胞中激活的 G2-M 检查点。尽管如此，100 nM LY2606368 并未微弱抑制 PMA 刺激的 RSK，而是略微增加了丝氨酸 235/236 上 S6 的磷酸化。 LY2606368 对 U-2 OS、Calu-6、HT-29、HeLa 和 NCI-H460 细胞系表现出广泛的抗增殖活性，IC50 值分别为 3 nM、3 nM、10 nM、37 nM 和 68 nM。 LY2606368 (4 nM) 在 U-2 OS 细胞中诱导 H2AX 磷酸化以及细胞周期群体从 G1 和 G2-M 向 S 期的显着转变。 LY2606368 (25 μM) 证明了 AGS 和 MKN1 细胞的抗增殖特性。 DR-GFP 细胞中的 HR 修复能力受到 LY2606368 (20 nM) 的抑制。当与 PARP 抑制剂 BMN673 联合使用时，LY2606368 (5 nM) 在胃癌细胞中表现出协同抗癌作用。

将 HeLa 细胞铺在 T25 烧瓶上，并给予其 24 小时的愈合时间。然后通过添加 LY2606368 获得 33 或 100 nmol/L 的终浓度。在某些研究中，药物治疗包括20μmol/L Z-VAD-FMK。 12 小时处理后，在处理的最后两小时内添加 1 μg/mL 秋水仙碱。使用 Bayani 和 Squire 的方法，固定细胞核以进行中期扩散。染色体扩散完成。将 12 μL 体积的细胞悬浮液（3:1 甲醇/乙酸固定剂）从 3 cm 的高度滴到盖玻片或干玻璃载玻片上。之后，将载玻片在设定为 43°C 的金属块上加热 45 秒。之后取出，在室温下完成干燥。使用 DAPI，使用 Vectashield Hard Set 安装介质将盖玻片粘附到载玻片上。使用 Leica DMR 荧光显微镜检查载玻片，并使用 SPOT RT3 Slider 相机拍照。

Female CD-1 nu-/nu- mice (26-28 g) with Calu-6 cells[1]
1, 3.3, or 10 mg/kg
SC; twice daily for 3 days, rest 4 days; for three cycles

[1]. LY2606368 Causes Replication Catastrophe and Antitumor Effects through CHK1-Dependent Mechanisms. Mol Cancer Ther. 2015 Sep;14(9):2004-1.

[2]. Chk1 inhibition potentiates the therapeutic efficacy of PARP inhibitor BMN673 in gastric cancer. Am J Cancer Res. 2017 Mar 1;7(3):473-483.

C19H23N7O5S

461.50

461.14813803

C, 49.45; H, 5.02; N, 21.25; O, 17.33; S, 6.95

1234015-55-4

Prexasertib;1234015-52-1;Prexasertib dihydrochloride;1234015-54-3;Prexasertib dimesylate;1234015-58-7;Prexasertib Mesylate Hydrate;1234015-57-6

Yellow solid powder

COC1=C(C(=CC=C1)OCCCN)C2=CC(=NN2)NC3=NC=C(N=C3)C#N.CS(=O)(=O)O

WGCKOJKXQKKLQW-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C18H19N7O2.CH4O3S/c1-26-14-4-2-5-15(27-7-3-6-19)18(14)13-8-16(25-24-13)23-17-11-21-12(9-20)10-22-17;1-5(2,3)4/h2,4-5,8,10-11H,3,6-7,19H2,1H3,(H2,22,23,24,25);1H3,(H,2,3,4)

5-[[5-[2-(3-aminopropoxy)-6-methoxyphenyl]-1H-pyrazol-3-yl]amino]pyrazine-2-carbonitrile;methanesulfonic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Note: Listed below are some common formulations that may be used to formulate products with low water solubility (e.g. < 1 mg/mL), you may test these formulations using a minute amount of products to avoid loss of samples.

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Injection Formulation 1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (i.e. 100 μL DMSO stock solution → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*Preparation of saline: Dissolve 0.9 g of sodium chloride in 100 mL ddH ₂ O to obtain a clear solution.
Injection Formulation 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (i.e. 100 μL DMSO → 400 μLPEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
Injection Formulation 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (i.e. 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
Example: Take the Injection Formulation 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) as an example, if 1 mL of 2.5 mg/mL working solution is to be prepared, you can take 100 μL 25 mg/mL DMSO stock solution and add to 900 μL corn oil, mix well to obtain a clear or suspension solution (2.5 mg/mL, ready for use in animals).

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Injection Formulation 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in saline = 10 : 90 [i.e. 100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in saline)]
*Preparation of 20% SBE-β-CD in Saline (4°C，1 week): Dissolve 2 g SBE-β-CD in 10 mL saline to obtain a clear solution.
Injection Formulation 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (i.e. 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin → 500 μL Saline)
Injection Formulation 6: DMSO : PEG300 : castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (i.e. 50 μL DMSO → 100 μLPEG300 → 200 μL castor oil → 650 μL Saline)
Injection Formulation 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (i.e. 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
Injection Formulation 8: Dissolve in Cremophor/Ethanol (50 : 50), then diluted by Saline
Injection Formulation 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (i.e. 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
Injection Formulation 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (i.e. 100 μL EtOH → 400 μLPEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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Oral Formulation 1: Suspend in 0.5% CMC Na (carboxymethylcellulose sodium)
Oral Formulation 2: Suspend in 0.5% Carboxymethyl cellulose
Example: Take the Oral Formulation 1 (Suspend in 0.5% CMC Na) as an example, if 100 mL of 2.5 mg/mL working solution is to be prepared, you can first prepare 0.5% CMC Na solution by measuring 0.5 g CMC Na and dissolve it in 100 mL ddH2O to obtain a clear solution; then add 250 mg of the product to 100 mL 0.5% CMC Na solution, to make the suspension solution (2.5 mg/mL, ready for use in animals).

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Oral Formulation 3: Dissolved in PEG400
Oral Formulation 4: Suspend in 0.2% Carboxymethyl cellulose
Oral Formulation 5: Dissolve in 0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose
Oral Formulation 6: Mixing with food powders

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Note: Please be aware that the above formulations are for reference only. InvivoChem strongly recommends customers to read literature methods/protocols carefully before determining which formulation you should use for in vivo studies, as different compounds have different solubility properties and have to be formulated differently.

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。