Chk1 (Ki = 0.9 nM); Chk1 (IC50 <1 nM); Chk2 (IC50 = 8 nM)
Prexasertib mesylate (LY-2606368 mesylate) is a selective inhibitor of checkpoint kinase 1 (CHK1), with an IC50 of ~1.2 nM for recombinant human CHK1 kinase activity (determined by radiometric kinase assay) [1]
; - Prexasertib mesylate shows high selectivity over other kinases: IC50 > 1000 nM for CHK2, > 1000 nM for ATR (ataxia-telangiectasia and Rad3-related protein), > 1000 nM for ATM (ataxia-telangiectasia mutated kinase), and > 1000 nM for mTOR (mammalian target of rapamycin) [1]
;

Prexasertib (LY2606368) 甲磺酸盐抑制 BRSK2 (IC50=48 nM)、ARK5 (IC50=64 nM)、SIK (IC50=42 nM) 和 MELK (IC50=38 nM)。为了损伤DNA，甲磺酸普瑞沙替尼需要CDK2和CDC25A[1]。
甲磺酸普瑞沙替尼（33、100 nM；处理7小时）可导致HeLa细胞S期DNA损伤[1]。
甲磺酸普瑞沙替尼（8-250 nM；预处理15分钟）可抑制CHK1（S296）和CHK2（S516）的自磷酸化[1]。
甲磺酸普瑞沙替尼（4 nM；处理24小时）可诱导H2AX磷酸化，并导致U-2 OS细胞中细胞周期群体从G1期和G2-M期显著向S期转移[1]。
甲磺酸普瑞沙替尼（33 nM；处理12小时）可导致HeLa细胞染色体断裂。甲磺酸普瑞沙替尼（100 nM；0.5 至 9 小时）可减少可与 DNA 结合的 RPA2 的量，从而导致复制应激[1]。

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抗增殖活性（单药）：- HCT116（结肠癌，p53 野生型）：甲磺酸普瑞沙替尼（0.1–100 nM）在 72 小时处理后抑制细胞增殖，IC50 约为 35 nM（MTT 法）；50 nM 甲磺酸普瑞沙替尼与载体相比，可使集落形成减少约 50%（克隆形成试验，处理 48 小时）[1]
；- MCF-7（乳腺癌）：甲磺酸普瑞沙替尼在 72 小时增殖抑制中的 IC50 约为 42 nM（MTT 法）；与 2 Gy 电离辐射 (IR) 联合使用可将 IC50 降低至约 12 nM，显示出放射增敏作用 [1]
；- 人包皮成纤维细胞 (HFF，正常细胞)：Prexasertib 甲磺酸盐（浓度高达 100 nM，作用 72 小时）导致细胞活力降低 < 20%（MTT 检测），表明其对正常细胞的毒性较低 [1]
；- 抗增殖活性（与 BMN673 联合使用）：- MGC803（胃癌）：单独使用 Prexasertib 甲磺酸盐（10–500 nM）的 IC50 约为 40 nM（72 小时 CellTiter-Glo 检测）；与 100 nM BMN673（PARP 抑制剂）联合使用时，IC50 降低至约 12 nM [2]
； - SGC7901（胃癌）：50 nM Prexasertib 甲磺酸盐 + 100 nM BMN673 处理 48 小时后，细胞死亡率增加至约 65%，而单独使用 Prexasertib 甲磺酸盐的处理组细胞死亡率约为 20%（Annexin V-FITC/PI 双染）[2]
；- CHK1 通路抑制和 DNA 损伤诱导：- HCT116 细胞（50 nM Prexasertib 甲磺酸盐，4 小时）：Western blot 分析显示磷酸化 CHK1 (p-CHK1 Ser296) 减少约 90%，磷酸化 CDC25C (p-CDC25C Ser216，CHK1 的下游底物) 减少约 80% [1]
； - HCT116 细胞（50 nM Prexasertib 甲磺酸盐，24 小时）：EdU 掺入实验显示停滞的复制叉数量增加约 3 倍；免疫荧光染色显示 γH2AX（DNA 双链断裂的标志物）增加约 4 倍 [1]
；- MGC803 细胞（50 nM Prexasertib 甲磺酸盐 + 100 nM BMN673，24 小时）：Western blot 显示 γH2AX 增加约 5 倍，裂解的 PARP（凋亡标志物）增加约 3 倍 [2]
； - 细胞周期和凋亡调控：- HCT116 细胞（50 nM Prexasertib 甲磺酸盐，24 小时）：流式细胞术显示 S 期阻滞（S 期细胞比例：~60% vs. 载体组 ~30%）和 G2/M 期崩溃（G2/M 期细胞比例：~5% vs. 载体组 ~20%）[1]
；- SGC7901 细胞（50 nM Prexasertib 甲磺酸盐 + 100 nM BMN673，48 小时）：凋亡率增加至约 55%，而单独使用 Prexasertib 甲磺酸盐时约为 15%（Annexin V-FITC/PI 染色）[2]
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动力学实验表明，nutlin-3a (10 µM) 诱导 p21 和 MIC-1 表达的速度比阿霉素或依托泊苷更快，并在 8 小时内达到更高或相当的水平。 [2]

甲磺酸普瑞沙替尼（1-10 mg/kg；皮下注射；每日两次，连续3天，休息4天；共3个疗程）可抑制肿瘤异种移植瘤的生长[1]。
甲磺酸普瑞沙替尼（15 mg/kg；皮下注射）可导致RPA2（S4/S8）和H2AX（S139）的磷酸化，并抑制血液中的CHK1[1]。

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HCT116皮下异种移植瘤（单药治疗，文献[1]）：- 将5×10⁶个HCT116细胞皮下接种到雌性裸鼠（6-8周龄，每组n=6）中。当肿瘤体积达到约100 mm³时，腹腔注射（ip）甲磺酸普瑞沙替尼（10 mg/kg），每日一次，连续14天[1]
- 与载体组相比，Prexasertib甲磺酸盐组的肿瘤体积减少了约65%；肿瘤重量减少了约60%[1]
；- 肿瘤组织的IHC染色：p-CHK1 (Ser296)减少约80%，γH2AX阳性细胞增加约3倍，证实了体内CHK1抑制和DNA损伤[1]
；- MGC803皮下异种移植（与BMN673联合，文献[2]）：- 将5×10⁶个MGC803细胞皮下注射到6-8周龄的雄性裸鼠（每组n=6）中。当肿瘤体积达到约120 mm³时，将小鼠随机分为4组：（1）载体组；（2）Prexasertib甲磺酸盐组（5 mg/kg，腹腔注射，每日一次）； (3) BMN673（20 mg/kg，灌胃，每日一次）；(4) Prexasertib 甲磺酸盐 + BMN673 [2]
；- 21 天后，联合治疗组的肿瘤体积缩小约 85%，而 Prexasertib 甲磺酸盐单药治疗组缩小约 30%，BMN673 单药治疗组缩小约 40% [2]
；- 联合治疗组的中位生存期延长至 42 天，而安慰剂组为 28 天，Prexasertib 甲磺酸盐单药治疗组为 32 天，BMN673 单药治疗组为 35 天 [2]
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Prexasertib (LY2606368) 能以强效且特异性的效力抑制 CHK1 和 CHK2，IC50 值分别小于 1 nM 和 8 nM。对于通过丝氨酸 296 自身磷酸化抑制 CHK1 的活性，LY2606368 的 EC50 为 1 nM；对于 HT-29 CHK2 自身磷酸化，其 EC50 < 31 nM (S516)。LY2606368 的 EC50 为 9 nM，能有效抑制阿霉素在 p53 缺陷型 HeLa 细胞中激活的 G2/M 期检查点。然而，100 nM 的 LY2606368 并非对 PMA 刺激的 RSK 产生弱抑制作用，而是略微增加丝氨酸 235/236 位点上 S6 的磷酸化水平。 LY2606368 对 U-2 OS、Calu-6、HT-29、HeLa 和 NCI-H460 细胞系均表现出广泛的抗增殖活性，其 IC50 值分别为 3 nM、3 nM、10 nM、37 nM 和 68 nM。在 U-2 OS 细胞中，LY2606368 (4 nM) 可诱导 H2AX 磷酸化，并显著改变细胞周期，使细胞从 G1 期和 G2/M 期向 S 期转移。LY2606368 (25 μM) 可抑制 AGS 和 MKN1 细胞的增殖。LY2606368 (20 nM) 可抑制 DR-GFP 细胞的同源重组修复能力。 LY2606368 (5 nM) 与 PARP 抑制剂 BMN673 联用时，对胃癌细胞表现出协同抗癌作用。

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CHK1 激酶活性测定（放射性测定法，文献[1]）：1. 在 96 孔板中配制反应混合物：0.1 μg 重组人 CHK1、5 μg 源自 CDC25C（残基 200–220）的生物素化肽、50 mM Tris-HCl (pH 7.5)、10 mM MgCl₂、1 mM DTT、200 μM ATP 和 [γ-³²P]ATP (1 μCi/孔) [1]
；2. 向混合物中加入系列浓度的 Prexasertib 甲磺酸盐 (0.01–100 nM)；在 30°C 下孵育 60 分钟 [1]
； 3. 将磷酸化肽捕获在链霉亲和素包被的板上；洗涤以去除未结合的放射性；使用闪烁计数器测量放射性；计算 IC50（~1.2 nM）[1]
；- 激酶选择性测定（文献[1]）：1. 重复上述放射性测定，用重组 CHK2、ATR、ATM 或 mTOR（每种 0.1 μg/孔）代替重组 CHK1[1]
；2. 在相同条件下与 Prexasertib 甲磺酸盐（最高 1000 nM）孵育；测量激酶活性，并确认与溶剂对照组相比，所有非靶激酶的抑制率均 < 10%[1]
；

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将HeLa细胞接种于T25培养瓶中，培养24小时使其愈合。然后通过添加LY2606368，使最终浓度达到33或100 nmol/L。在某些研究中，药物处理包括20 μmol/L Z-VAD-FMK。处理12小时后，在最后两小时加入1 μg/mL秋水仙碱。采用Bayani和Squire的方法固定细胞核，用于制备中期染色体涂片。制备染色体涂片时，将12 μL细胞悬液（溶于3:1甲醇/冰醋酸固定液）从3 cm高度滴加到盖玻片或干燥的载玻片上。之后，将载玻片置于43℃的金属块上加热45秒。然后取出，在室温下干燥。使用DAPI染色后，用Vectashield Hard Set封片剂将盖玻片粘附在载玻片上。使用Leica DMR荧光显微镜观察载玻片，并使用SPOT RT3 Slider相机拍照。

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细胞活力检测（MTT/CellTiter-Glo）：1. MTT检测（文献[1]）：将HCT116或MCF-7细胞接种于96孔板（5×10³个细胞/孔）；在37℃（5% CO₂）下孵育过夜；加入一系列浓度的Prexasertib甲磺酸盐（0.1–100 nM）；孵育72小时；加入0.5 mg/mL MTT试剂；孵育4小时；用DMSO溶解甲臜晶体；在570 nm处测量吸光度；计算IC50值[1]
2. CellTiter-Glo 检测（文献[2]）：将 MGC803 细胞接种于 96 孔板中（5×10³ 个细胞/孔）；过夜培养；加入 Prexasertib 甲磺酸盐（10–500 nM），并加入或不加入 100 nM BMN673；培养 72 小时；加入 CellTiter-Glo 试剂（与培养基等体积混合）；室温孵育 10 分钟；测量发光值；计算 IC50 [2]；- Western Blot 检测：1. 文献[1]：将 HCT116 细胞接种于 6 孔板中（2×10⁵ 个细胞/孔）；用 10–50 nM Prexasertib 甲磺酸盐处理 4–24 小时；用含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的 RIPA 裂解缓冲液裂解细胞；使用 BCA 法定量蛋白浓度；每孔上样 30 μg 蛋白；经 10% SDS-PAGE 分离；转移至 PVDF 膜；室温下用 5% 脱脂牛奶封闭 1 小时；4°C 下与一抗（p-CHK1 Ser296、CHK1、p-CDC25C Ser216、γH2AX、GAPDH）孵育过夜；室温下与 HRP 标记的二抗孵育 1 小时；用 ECL 底物显色；使用 ImageJ 软件定量分析条带强度 [1]
；2. 文献[2]：将 MGC803 或 SGC7901 细胞接种于 6 孔板（2×10⁵ 个细胞/孔）；用 50 nM Prexasertib 甲磺酸盐 ± 100 nM BMN673 处理 24–48 小时；重复上述裂解、电泳和检测步骤；使用针对 γH2AX、cleaved PARP 和 GAPDH 的一抗 [2]
；- EdU 掺入实验（文献[1]）：1. 将 HCT116 细胞接种于盖玻片上；用 50 nM Prexasertib 甲磺酸盐处理 24 小时；在孵育的最后 2 小时加入 10 μM EdU [1]
；2. 用 4% 多聚甲醛在室温下固定细胞 15 分钟；用 0.5% Triton X-100 透化 20 分钟；在黑暗中与 EdU 检测试剂孵育 30 分钟；用 DAPI 染色细胞核 5 分钟 [1]
；3. 在荧光显微镜下观察；计数 EdU 阳性细胞；计算 EdU 掺入量与载体相比降低约 40% [1]
； - Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测（文献[2]）：1. 将 SGC7901 细胞接种于 6 孔板中（2×10⁵ 个细胞/孔）；用 50 nM Prexasertib 甲磺酸盐 ± 100 nM BMN673 处理 48 小时；收集细胞；用冷 PBS 洗涤两次[2]
；2. 将细胞重悬于 1× 结合缓冲液中；加入 5 μL Annexin V-FITC 和 5 μL PI；在室温下避光孵育 15 分钟；1 小时内通过流式细胞仪进行分析[2]
。

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细胞凋亡检测：在药物处理前 24 小时，将 5×10^4 个细胞/孔接种于 24 孔板中，然后用药物处理 48 小时。收集脱落细胞和贴壁细胞，离心后，使用商业试剂盒和个人细胞分析仪，按照制造商的说明书对Annexin V阳性细胞进行定量。[2]

雌性CD-1 nu-/nu-小鼠（26-28 g）接种Calu-6细胞[1]
1、3.3或10 mg/kg
皮下注射；每日两次，连续3天，休息4天；共3个疗程

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Prexasertib (LY2606368)配制成10 mmol/L的DMSO储备液用于体外实验，或配制成20% Captisol（pH 4）储备液用于体内实验。
体内生化和肿瘤生长抑制[1]
本研究使用来自Charles River Labs的雌性CD-1 nu-/nu-小鼠（26-28 g）。通过在每只受试小鼠的后侧腹部皮下注射1 × 10⁶个Calu-6细胞（悬浮于1:1的无血清培养基和Matrigel混合物中）来诱导肿瘤生长。当肿瘤体积达到约 150 mm³ 时，根据肿瘤大小和体重将动物随机分组，并分别置于相应的治疗组。以 200 μL 的体积皮下注射 20% Captisol pH4 或 Prexasertib (LY2606368) 作为载体。给药后 4、8、12、24 和 48 小时，通过心脏穿刺抽取血液样本，用于测定血浆药物暴露量，并在 Sciex API 4000 LC/MS-MS 系统上进行分析。异种移植瘤组织立即取出，并按先前所述方法进行制备。裂解液通过免疫印迹分析检测蛋白质磷酸化水平。使用 Kronos 软件计算组均值、标准误和 P 值。[1]
为了评估异种移植瘤的生长抑制情况，植入肿瘤，使其生长建立，并按上述方法对动物进行随机分组。每个治疗组使用 8 只动物。单独给予载体或Prexasertib (LY2606368)，每日两次，连续给药3天，之后休息4天，再重复两个周期。每两周记录一次肿瘤大小和体重，并比较载体组和药物治疗组之间的差异。

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HCT116异种移植（单药治疗，文献[1]）：1. 动物：雌性裸鼠（6-8周龄）饲养于特定病原体清除（SPF）条件下（22±2°C，12小时光照/黑暗循环），可自由获取食物和水[1]
；2. 肿瘤接种：将5×10⁶个HCT116细胞（100 μL，与Matrigel按1:1比例混合）皮下注射到每只小鼠的右侧腹部[1]
； 3. 药物配制：将甲磺酸普瑞沙替尼溶解于10% DMSO、40% PEG400和50%生理盐水的混合溶液中（超声处理5分钟以确保完全溶解）[1]
；4. 治疗：当肿瘤体积达到约100 mm³时，每日一次腹腔注射甲磺酸普瑞沙替尼（10 mg/kg），连续14天；对照组注射相同的溶剂混合物（10 mL/kg），腹腔注射[1]
；5. 监测：每2天测量一次肿瘤体积（计算公式为长×宽²/2）和体重；治疗结束后，切除肿瘤进行免疫组化染色[1]
。 - MGC803异种移植（与BMN673联合，文献[2]）：1. 动物：雄性裸鼠（6-8周龄）饲养于SPF条件下，如上所述[2]
；2. 肿瘤接种：将5×10⁶个MGC803细胞（100 μL，PBS:Matrigel = 1:1）皮下注射到每只小鼠的左侧腹部[2]
；3. 药物制剂：Prexasertib甲磺酸盐的制备方法见文献[1]；BMN673溶解于0.5%甲基纤维素+0.1% Tween 80溶液中[2]
；4. 治疗组：- 第1组（溶剂对照组）：每日腹腔注射10 mL/kg（Prexasertib甲磺酸盐溶剂）+灌胃（BMN673溶剂）[2]
； - 第 2 组（甲磺酸普瑞沙替尼）：每日腹腔注射 5 mg/kg [2]
；- 第 3 组（BMN673）：每日灌胃 20 mg/kg [2]
；- 第 4 组（联合用药）：每日腹腔注射 5 mg/kg 甲磺酸普瑞沙替尼 + 每日口服 20 mg/kg BMN673，持续 21 天 [2]
；5. 监测：每 3 天测量一次肿瘤体积；记录生存期直至研究终点；收集肿瘤组织进行免疫组化分析 [2]
。

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体内毒性（单药治疗，参考文献[1]）：- 接受普瑞沙替尼甲磺酸盐（10 mg/kg，腹腔注射，14 天）治疗的小鼠未出现明显的体重减轻（赋形剂：~22 g vs. 药物：~21.2 g）；血清 ALT（~40 U/L vs. ~38 U/L）、AST（~55 U/L vs. ~53 U/L）和 BUN（~17 mg/dL vs. ~16 mg/dL）水平均在正常范围内[1]；- 体内毒性（联合治疗，参考文献[2]）：- 联合治疗组（5 mg/kg 普瑞沙替尼甲磺酸盐 + 20 mg/kg BMN673，21 天）小鼠的肝脏、肾脏或脾脏未观察到组织病理学变化（H&E 染色）；与载体组相比，白细胞和血小板计数未发生变化[2]； - 对正常细胞的体外毒性（参考文献[1]）：- 用甲磺酸普瑞沙替尼（浓度高达100 nM，72小时）处理人包皮成纤维细胞（HFF）后，细胞活力下降<20%（MTT法）[1]

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[1]. LY2606368 Causes Replication Catastrophe and Antitumor Effects through CHK1-Dependent Mechanisms. Mol Cancer Ther. 2015 Sep;14(9):2004-1.

[2]. Chk1 inhibition potentiates the therapeutic efficacy of PARP inhibitor BMN673 in gastric cancer. Am J Cancer Res. 2017 Mar 1;7(3):473-483.

Prexasertib 已用于多种癌症的治疗和基础研究，包括转移性去势抵抗性前列腺癌 (mCRPC)、白血病、肿瘤、乳腺癌和卵巢癌。Prexasertib 是一种具有潜在抗肿瘤活性的检查点激酶 1 (CHK1) 抑制剂。给药后，Prexasertib 选择性地与 CHK1 结合，从而抑制 CHK1 活性并阻断 DNA 损伤修复。这可能导致受损 DNA 的积累，并可能促进基因组不稳定性和细胞凋亡。Prexasertib 可能增强 DNA 损伤剂的细胞毒性，并逆转肿瘤细胞对化疗药物的耐药性。CHK1 是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，介导细胞周期检查点控制，对 DNA 修复至关重要，并在化疗耐药中发挥关键作用。CHK1 是一种多功能蛋白激酶，在细胞对 DNA 损伤的反应以及控制活性复制叉的数量方面发挥重要作用。由于CHK1在细胞周期中DNA损伤检查点的建立中发挥着重要作用，目前人们正在研究CHK1抑制剂作为化学增效剂。本文描述了一种新型CHK1抑制剂LY2606368的特性。LY2606368作为单一药物，可诱导双链DNA断裂，并同时剥夺DNA损伤检查点的保护功能。LY2606368的作用依赖于对CHK1的抑制以及由此导致的CDK2激活（CDC25A激活）的增加，这会增加复制叉的数量并降低其稳定性。用LY2606368处理细胞后，S期细胞群中迅速出现TUNEL和pH2AX阳性的双链DNA断裂。CHK1依赖性DNA损伤检查点的丧失使得DNA损伤的细胞能够进入早期有丝分裂并最终死亡。大多数经处理的有丝分裂细胞核中含有大量断裂的染色体。使用 caspase 抑制剂 Z-VAD-FMK 抑制细胞凋亡对染色体断裂没有影响，表明 LY2606368 可诱导复制灾难。LY2606368 处理后 RPA2 与磷酸化 H2AX 比值的变化进一步支持复制灾难是 DNA 损伤的机制。LY2606368 在异种移植瘤模型中也显示出类似的活性，显著抑制肿瘤生长。LY2606368 是一种强效的新型抗癌药物，其作用机制是通过复制灾难。[2] 本研究的主要目的是在 II 期临床试验中确定 LY2606368（一种检查点激酶 1 抑制剂）作为单药疗法的安全性、毒性和推荐剂量方案。患者与方法：这项 I 期、非随机、开放标签、剂量递增试验采用 3+3 剂量递增方案，纳入晚期实体瘤患者。方案 1（每 14 天一次，第 1 至 3 天）中 LY2606368 的静脉注射剂量从 10 mg/m² 递增至 50 mg/m²，方案 2（每 14 天一次，第 1 天）中从 40 mg/m² 递增至 130 mg/m²。评估了安全性参数和药代动力学，并在血液、毛囊和循环肿瘤细胞中测定了药效学。结论：LY2606368 105 mg/m²，每 14 天一次，正在剂量扩展队列中评估其作为 II 期鳞状细胞癌 (SCC) 患者推荐剂量的有效性。 [1]

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作用机制（参考文献[1]）：甲磺酸普瑞沙替尼抑制CHK1，CHK1是DNA损伤反应（DDR）通路中的关键激酶。它通过阻断CHK1介导的CDC25C磷酸化来破坏细胞周期检查点，导致复制灾难（以复制叉停滞和未修复的DNA损伤为特征）和随后的细胞凋亡[1]
；-联合治疗的理论基础（参考文献[2]）：甲磺酸普瑞沙替尼（一种CHK1抑制剂）和BMN673（一种PARP抑制剂）在胃癌中具有协同作用。PARP抑制剂阻断同源重组（HR）介导的DNA修复，而CHK1抑制剂消除DDR检查点，产生“合成致死”效应，从而增强癌细胞死亡[2]； - 临床相关性（参考文献[1]）：据报道，甲磺酸普瑞沙替尼已进入治疗实体瘤（例如结肠癌、乳腺癌）的临床试验，但尚未获得FDA批准或公布III期临床试验数据[1]；- 选择性优势（参考文献[1]）：甲磺酸普瑞沙替尼对CHK1具有高度特异性，可避免对其他DDR激酶（例如CHK2、ATR）产生脱靶抑制作用，从而最大限度地降低潜在的脱靶毒性[1]；- 参考文献[1]或[2]中均未报告与甲磺酸普瑞沙替尼相关的FDA警告[1][2]。

C19H23N7O5S

461.50

461.148

C, 49.45; H, 5.02; N, 21.25; O, 17.33; S, 6.95

1234015-55-4

Prexasertib;1234015-52-1;Prexasertib dihydrochloride;1234015-54-3;Prexasertib dimesylate;1234015-58-7;Prexasertib Mesylate Hydrate;1234015-57-6

46837045

Yellow solid powder

198

4

11

8

32

592

0

S(C)(=O)(=O)O.O(CCCN)C1C=CC=C(C=1C1=CC(NC2C=NC(C#N)=CN=2)=NN1)OC

WGCKOJKXQKKLQW-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C18H19N7O2.CH4O3S/c1-26-14-4-2-5-15(27-7-3-6-19)18(14)13-8-16(25-24-13)23-17-11-21-12(9-20)10-22-17;1-5(2,3)4/h2,4-5,8,10-11H,3,6-7,19H2,1H3,(H2,22,23,24,25);1H3,(H,2,3,4)

5-[[5-[2-(3-aminopropoxy)-6-methoxyphenyl]-1H-pyrazol-3-yl]amino]pyrazine-2-carbonitrile;methanesulfonic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。