Sp-8-CPT-cAMPS

PKA[1]

在没有 IL-1β 的情况下，血管平滑肌细胞在暴露于 Sp-8-CPT-cAMPS（100 μM；24 小时）时释放的亚硝酸盐是受到 IL-1β 刺激时的三倍[2]。在大鼠主动脉平滑肌细胞中，Sp-8-CPT-cAMPS（100 μM；24 小时）可促进 IL-1β 诱导的 iNOS 蛋白产生[2]。当应用 Sp-8-CPT-cAMPS（10 μM；30 分钟）时，豚鼠气管显示出对 ACh 诱导的张力发展的抗痉挛功效[3]。

在基础条件下、单独或联合非诺特罗刺激、Epac激活剂8-pCPT-2′-O-Me-cAMP和Sp-8-pCPT-2′-O-Me-cAMP、PKA激活剂6-Bnz-cAMP和cGMP类似物8-pCPT-2′-O-Me-cGMP后，通过ELISA法评估IL-8的释放。在有指示的情况下，用药物抑制剂艰难梭菌毒素B-1470 (GTPases)、U0126(细胞外信号调节激酶ERK1/2)和rp -8- cpt - camp (PKA)对细胞进行预孵育。通过测量PKA底物血管扩张剂刺激磷酸化蛋白的磷酸化，证实了环核苷酸类似物的特异性。采用下拉法测定Rap1和Rap2的gtp负载。western blot检测Rap1、Rap2、Epac1和Epac2的表达。通过siRNA实现Epac蛋白表达下调。采用非配对或配对双尾Student's t检验[2]。

[1]. Probing the cyclic nucleotide binding sites of cAMP-dependent protein kinases I and II with analogs of adenosine 3',5'-cyclic phosphorothioates. J Biol Chem. 1990 Jun 25;265(18):10484-91.

[2]. Effect of cyclic GMP-dependent vasodilators on the expression of inducible nitric oxide synthase in vascular smooth muscle cells: role of cyclic AMP. Br J Pharmacol. 1996 Oct;119(4):707-15.

[3]. Evidence that the anti-spasmogenic effect of the beta-adrenoceptor agonist, isoprenaline, on guinea-pig trachealis is not mediated by cyclic AMP-dependent protein kinase. Br J Pharmacol. 2001 Aug;133(8):1201-12.

合成了一系列 cAMP 类似物，这些类似物在环磷酸酯环的赤道位 (Rp) 或轴向位 (Sp) 引入了环外硫取代，并对 cAMP 的腺嘌呤碱基进行了修饰。定量测定了这些化合物抑制 [3H]cAMP 与 I 型（兔骨骼肌）和 II 型（牛心肌）cAMP 依赖性蛋白激酶 A 位点和 B 位点结合的能力。平均而言，Sp 异构体对 I 型同工酶 A 位点的亲和力比其环磷酸酯同系物低 5 倍，对 B 位点的亲和力低 30 倍。对 II 型同工酶相应位点的亲和力平均分别降低了 20 倍和 4 倍。与同工酶II的A位点和B位点相比，Rp异构体对同工酶I的A位点和B位点的亲和力分别降低了约400倍和200倍，而对同工酶II的A位点和B位点的亲和力则分别降低了约200倍和45倍。因此，Sp取代增加了对同工酶I的A位点和同工酶II的B位点的相对偏好性。另一方面，Rp取代增加了对两种同工酶B位点的相对偏好性。这些数据表明，同工酶I和II的两个链内位点对Rp和Sp取代的耐受性不同。它们也支持以下假设：在所有四个结合位点中，与保守精氨酸发生离子相互作用的负电荷是由轴向氧原子（而非先前提出的赤道氧原子）提供的。此外，他们还证明，cAMP腺嘌呤环和环磷酸环的联合修饰可以增强区分同工酶A位点和B位点以及区分同工酶I和II的能力。由于已知cAMP的Rp类似物能够抑制cAMP依赖性蛋白激酶的激活，因此本研究的发现对于合成对同工酶I或II具有极高选择性的类似物具有重要意义。[1]

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背景：气道平滑肌通过分泌炎症介质（例如白细胞介素-8 (IL-8)）参与肺部疾病的发病机制。IL-8的产生部分受Gq和Gs偶联受体激活的调控。本研究探讨了环磷酸腺苷 (cAMP) 效应分子蛋白激酶 A (PKA) 和 cAMP 直接激活的交换蛋白 (Epac1 和 Epac2) 在缓激肽诱导的人呼吸道平滑肌细胞系释放 IL-8 中的作用及其潜在的分子机制。[2]结果：β2 受体激动剂非诺特罗增强了缓激肽诱导的 IL-8 释放。PKA 激活剂 6-Bnz-cAMP 和 Epac 激活剂 8-pCPT-2'-O-Me-cAMP 显著增加了缓激肽诱导的 IL-8 释放。耐水解的 Epac 激活剂 Sp-8-pCPT-2'-O-Me-cAMPS 模拟了 8-pCPT-2'-O-Me-cAMP 的作用，而阴性对照 8-pCPT-2'-O-Me-cGMP 则没有这种作用。非诺特罗、福斯克林和6-Bnz-cAMP诱导VASP磷酸化，而PKA抑制剂Rp-8-CPT-cAMPS可减弱这种磷酸化。6-Bnz-cAMP和8-pCPT-2'-O-Me-cAMP诱导Rap1的GTP结合，但对Rap2无此作用。用毒素B-1470和U0126处理细胞，可显著降低缓激肽诱导的IL-8释放，无论单独使用还是与PKA和Epac激活剂联合使用，均有显著降低作用。有趣的是，Rp-8-CPT-cAMPS 对 PKA 的抑制以及特异性 siRNA 对 Epac1 和 Epac2 表达的沉默，均显著降低了 Rap1 的激活以及 PKA 和 Epac 对缓激肽诱导的 IL-8 释放的增强作用。[2]结论：综上所述，我们的数据表明，PKA、Epac1 和 Epac2 协同作用，通过向 Ras 样 GTP 酶 Rap1 和 ERK1/2 发出信号，调节气道平滑肌的炎症特性。[2]

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某些澳洲眼镜蛇科蛇类毒液中毒后的“猝死”是导致死亡的一个尚不完全清楚的原因。我们之前已证明，Oxyuranus scutellatus 的毒液会导致麻醉大鼠发生心血管衰竭。预先给予亚致死剂量的毒液可减弱随后给予更高（致死）剂量毒液的反应。本研究探讨了介导这种“保护作用”的可能机制。巴布亚太攀蛇毒液（5μg/kg，静脉注射）在麻醉大鼠中引起轻微的短暂性低血压，而10μg/kg剂量则导致动脉血压下降73±12%。毒液（20μg/kg或50μg/kg）在所有受试动物（n=12）中均引起心血管衰竭。预先给予“启动”剂量的毒液（5、10和20μg/kg）可预防50μg/kg毒液引起的心血管衰竭。此外，预先静脉注射吲哚美辛（30mg/kg）或肝素（300单位/kg）也可预防毒液（20μg/kg）引起的猝死。毒液对离体心脏无影响，表明直接的心脏效应不太可能是导致“猝死”的原因。毒液可诱导预收缩的大鼠肠系膜动脉环发生内皮依赖性和非内皮依赖性舒张，这种舒张作用可被吲哚美辛、IbTx 和 Rp-8-CPT-cAMPs 抑制。第二次接触毒液后，这种舒张作用显著减弱。我们的结果表明，O. scutellatus 毒液引起的心血管衰竭可能是多种物质释放共同作用的结果。[3]

C16H15CLN5O5PS2

487.88

508.976

129693-13-6

Rp-8-CPT-cAMPS sodium;221905-35-7;Rp-8-CPT-cAMPS;129735-01-9

23679060

Typically exists as solid at room temperature

3.773

207.8

2

11

3

31

701

4

[Na+].ClC1=CC=C(SC2=NC3=C(N=CN=C3N2[C@@H]2O[C@@H]3COP(O[C@H]3[C@H]2O)([O-])=S)N)C=C1

IVNQJYQKSYRLTE-IYKFWPKASA-N

InChI=1S/C16H15ClN5O5PS2/c17-7-1-3-8(4-2-7)30-16-21-10-13(18)19-6-20-14(10)22(16)15-11(23)12-9(26-15)5-25-28(24,29)27-12/h1-4,6,9,11-12,15,23H,5H2,(H,24,29)(H2,18,19,20)/t9-,11-,12-,15-,28?/m1/s1

(4aR,6R,7R,7aS)-6-[6-amino-8-(4-chlorophenyl)sulfanylpurin-9-yl]-2-hydroxy-2-sulfanylidene-4a,6,7,7a-tetrahydro-4H-furo[3,2-d][1,3,2]dioxaphosphinin-7-ol

Sp-8-CPT-cAMPS; Rp-8-CPT-cAMPS; 129693-13-6; (4AR,6R,7R,7aS)-6-(6-amino-8-((4-chlorophenyl)thio)-9H-purin-9-yl)-7-hydroxy-2-mercaptotetrahydro-4H-furo[3,2-d][1,3,2]dioxaphosphinine 2-oxide; Rp-8-CPT-Cyclic AMP (sodium salt); Sp-8-CPT-Cyclic AMPS (sodium salt); CHEMBL1412152;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。