NMDA receptor [1]

藏红花的中枢神经系统作用被认为归因于藏红花酸，这是一种由藏红花素类胡萝卜素代谢而来的产物，已被证实对NMDA受体具有显著的亲和力。将Caco-2细胞线粒体脱氢酶与测试化合物孵育24小时后，采用MTT法测定其活性：藏红花水醇提取物（SE，0.5-1 mg/mL）和藏红花素-1（250-1000 µM）均未引起细胞活力的显著变化，结果为阴性。此步骤旨在确保Caco-2细胞的活力在整个转运实验过程中保持不变。藏红花酸在 10 µM 浓度下对细胞活力无影响，但在 40–160 µM 浓度下则显著降低 [1]。

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反式藏红花酸以浓度非依赖性方式（10–114 µM）通过跨细胞途径渗透 Caco-2 单层细胞。顶端至基底外侧 (A⇒B) 转运的表观渗透系数 (Papp) 为 2.6 ± 0.6 × 10⁻⁵ cm/s（9 个不同浓度的平均值），相当于约 32% 的底物在 2 小时内被转运。 [1]
- 反式藏红花酸（20、72 µM）的基底外侧至顶端（B⇒A）转运导致其渗透速度显著低于顶端至基底外侧转运（Papp = 3.0 ± 0.2 × 10⁻⁵ cm/s），表明被动跨细胞扩散是主要的吸收途径。[1]
- 添加维拉帕米（50 µM，一种 P-糖蛋白抑制剂）显著增加了反式藏红花酸（24、62 µM）的渗透性：未添加维拉帕米时，渗透率为 35%，Papp = 3.0 ± 0.3 × 10⁻⁵ cm/s；与维拉帕米合用时，渗透率为 41%，Papp = 3.6 ± 0.6 × 10⁻⁵ cm/s。这表明反式藏红花酸可能作为 ABC 转运蛋白家族外排泵的底物。[1]
- 用 EDTA (3.2 mM) 预孵育并未增加反式藏红花酸的转运速度（未用 EDTA 时 Papp = 3.1 ± 0.1 × 10⁻⁵ cm/s，用 EDTA 时 Papp = 3.2 ± 0.8 × 10⁻⁵ cm/s），表明反式藏红花酸不通过细胞旁途径吸收。 [1]
- 使用依泽替米贝（15 µM，一种胆固醇转运蛋白 SR-BI、NPC1L1 和 ABCA1 的抑制剂）进行的渗透实验表明，无论是否使用依泽替米贝，反式藏红花酸（156 µM）的 Papp 值均无显著差异。此外，用依泽替米贝预处理 Caco-2 细胞 1 天和 14 天后，Papp 值也未发生改变，表明反式藏红花酸并非此类转运蛋白的底物。[1]
- 反式藏红花酸在 29 小时内缓慢但持续地透过血脑屏障 (BBB)。在猪脑毛细血管内皮细胞 (BCEC) 模型中，浓度为 27 µM 时，Papp = 1.48 ± 0.12 × 10⁻⁶ cm/s。维拉帕米（50 µM）对渗透性没有影响（Papp = 1.4 ± 0.1 × 10⁻⁶ cm/s）。在猪血脑脊液屏障（BCSFB）模型中，50 µM 的反式藏红花酸的 Papp 为 3.85 ± 0.21 × 10⁻⁶ cm/s，100 µM 的 Papp 为 3.7 ± 0.3 × 10⁻⁶ cm/s（差异无统计学意义）。[1] 在 Caco-2 细胞中，10 µM 的反式藏红花酸不影响细胞活力，而较高浓度（40–160 µM）则显著降低了细胞活力，该结果通过 MTT 法在孵育 24 小时后测得。[1]

采用 MTT 法测定 Caco-2 细胞活力。将细胞以每孔 20,000 个细胞的密度接种于 96 孔板中，每孔加入 200 µl 无血清培养基，培养 96 小时后，加入待测化合物（包括不同浓度的反式藏红花酸），于 37°C/5% CO2 条件下孵育 24 小时。吸出孵育液，用 PBS 洗涤两次，加入 50 µl MTT 溶液（2.5 mg/ml，溶于 PBS）。孵育结束后，弃去上清液，将生成的甲臜溶解于 50 µl DMSO 中。以 690 nm 为参考波长，在 492 nm 处测定吸光度。10 µM 的反式藏红花酸不影响细胞活力，而 40–160 µM 的反式藏红花酸则显著降低了细胞活力。[1]
- Caco-2 细胞转运实验在 Transwell 小室中进行。实验前，测量跨上皮电阻 (TEER)；仅使用 TEER > 150 Ω·cm² 的单层细胞。将溶解于 HBSS 中的测试化合物（反式藏红花酸）加入供体室（顶端或基底外侧）。每 30 分钟从受体室取样一次，持续 2 小时（或对于血脑屏障模型延长至 29 小时）。使用加权归一化累积量方程计算表观渗透系数 (Papp)。实验后，通过 TEER > 150 Ω·cm² 确认细胞完整性。[1]
- 对于机制研究，在进行反式藏红花酸转运实验之前，将 Caco-2 单层细胞预先与维拉帕米（50 µM，30 分钟）、依泽替米贝（15 µM，30 分钟、1 天或 14 天）或 EDTA（3.2 mM，15 分钟）孵育。[1]

肠道吸收：反式藏红花酸以高速度（Papp = 2.6 ± 0.6 × 10⁻⁵ cm/s，约 32% 在 2 小时内被转运）通过被动跨细胞扩散穿过 Caco-2 细胞屏障，浓度范围为 10 至 114 µM，且与浓度无关。[1]
- 外排泵相互作用：反式藏红花酸是 P-糖蛋白 (P-gp) 外排泵的底物，维拉帕米可增加其渗透性。[1]
- 血脑屏障穿透：反式藏红花酸缓慢穿过血脑屏障，29 小时内 Papp 分别为 1.48 ± 0.12 × 10⁻⁶ cm/s（BCEC 模型）和 3.85 ± 0.21 × 10⁻⁶ cm/s（BCSFB 模型）。 [1]
- 代谢：反式藏红花酸是由糖基化的藏红花素（例如藏红花素-1、藏红花素-2、藏红花素-4、藏红花素-5）在肠道内经酶促水解生成，主要由肠上皮细胞（酯酶或β-糖苷酶）催化，而非由粪便微生物群催化。粪便细菌会将脱辅基类胡萝卜素骨架降解为较小的烷基单元，这些烷基单元不显示藏红花素的紫外吸收。[1]
- 稳定性：在模拟胃液 (SGF) 和模拟肠液 (SIF) 中，未检测到藏红花素生成反式藏红花酸；藏红花素在 SGF 中损失约 20%，在胃肠道转运过程中总损失达 36%。[1]

相互作用
本研究采用戊四唑（PTZ）诱导的小鼠癫痫模型，评估了藏红花柱头成分藏红花醛和藏红花酸的抗惊厥活性。藏红花醛（0.15和0.35 mL/kg，腹腔注射）可缩短癫痫发作持续时间，延缓强直-阵挛性癫痫发作的发生，并保护小鼠免于死亡。藏红花酸（200 mg/kg，腹腔注射）未显示抗惊厥活性。/藏红花醛和藏红花酸/
灌胃给予小鼠125-250.0 mg/kg体重的50%乙醇藏红花柱头提取物，可产生镇静作用，并增强巴比妥类药物的镇静作用。藏红花柱头乙醇提取物
局部涂抹100 mg/kg体重的95%藏红花柱头乙醇提取物可抑制小鼠皮肤癌的两阶段起始和发展，延缓乳头状瘤的形成，并减少每只小鼠的平均乳头状瘤数量。每日灌胃给予100.0 mg/kg体重的相同提取物，持续30天，可使20-甲基胆蒽诱导的小鼠软组织肉瘤发生率降低10%。灌胃给予100.0 mg/kg体重的藏红花柱头乙醇提取物，可分别抑制实体型道尔顿淋巴瘤腹水和肉瘤180肿瘤的生长87%和41%。每周皮下注射400.0 mg/kg体重的藏红花提取物，持续13周，可减缓结肠腺癌的生长并延长雌性小鼠（而非雄性小鼠）的寿命。/藏红花柱头乙醇提取物/
腹腔注射50 mg/kg体重的95%藏红花柱头乙醇提取物可部分预防顺铂引起的小鼠体重、血红蛋白水平和白细胞计数下降。藏红花乙醇提取物

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非人类毒性值
LD50 大鼠（雄性）5.53 mL/kg/藏红花醛/
LD50 大鼠（雄性）1.5 mL/kg/藏红花醛/
LD50 小鼠（雌性）腹腔注射 1.88 mL/kg/藏红花醛/
LD50 小鼠（雄性）腹腔注射 1.48 mL/kg/藏红花醛/
有关藏红花油（共8种）更完整的非人类毒性数据，请访问HSDB记录页面。

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在Caco-2细胞中，10 µM的反式藏红花酸不改变细胞活力，而较高浓度（40–160 µM）则显著降低细胞活力（MTT法，孵育24小时后）。 [1]

[1]. Intestinal formation of trans-Crocetin from saffron extract (Crocus sativus L.) and in vitro permeation through intestinal and blood brain barrier. Phytomedicine. 2015 Jan 15;22(1):36-44.

[2]. Saffron: An Old Medicinal Plant and a Potential Novel Functional Food. Molecules. 2017 Dec 23;23(1). pii: E30.

番红花酸是一种20碳二羧酸，属于二萜类化合物，也是一种天然类胡萝卜素。它存在于藏红花中，并被用作抗疲劳膳食补充剂。番红花酸具有营养、促进健康、代谢和抗氧化作用。它是一种胡萝卜酸、二萜类化合物和多不饱和二羧酸。它是番红花酸(2-)的共轭酸。它是一种维生素A类似物，可以提高水溶液（包括血浆）中氧气的扩散速率。据报道，番红花酸存在于栀子花、紫苏和其他具有相关数据的生物体中。药物适应症：它已被研究用于治疗癌症/肿瘤（未具体说明）、出血、缺氧、呼吸衰竭和中风。作用机制：反式番红花酸钠是一种新型药物，已被证明可以提高出血性休克期间的全身耗氧量。其作用机制是通过提高血浆中氧气的扩散速率，而非针对出血性休克的特定症状，因此被认为是一种潜在的低氧血症治疗方法。因此，它也可能对呼吸功能不全的治疗有益。

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治疗用途
探索性治疗：本研究采用20%柠檬酸雾化溶液，评估了藏红花柱头和花瓣提取物及其成分藏红花酸和藏红花苷在豚鼠体内的镇咳活性。提取物和药物均采用腹腔注射给药。藏红花乙醇提取物（100-800 mg/kg）和藏红花酸（0.25-0.75 mL/kg）可降低咳嗽频率。花瓣的乙醇提取物和水提取物以及藏红花酸均未显示出镇咳活性。 /藏红花柱头提取物/
探索疗法：藏红花（Crocus sativus L.）在民间医学中应用广泛，例如用作消肿剂。作者旨在评估藏红花提取物在小鼠体内的镇痛和抗炎活性。他们使用了藏红花（Crocus sativus L.）柱头和花瓣的水提取物和乙醇提取物。采用热板试验和扭体试验评估提取物的镇痛活性。使用二甲苯诱导的小鼠耳廓水肿模型研究提取物对急性炎症的影响。使用福尔马林诱导的大鼠足爪水肿模型评估提取物对慢性炎症的影响。在热板试验中，腹腔注射任一提取物均未显示出对小鼠的显著镇痛活性。提取物在醋酸诱导的扭体试验中显示出镇痛活性。纳洛酮仅部分阻断了柱头水提物的镇痛活性。仅柱头提取物在急性炎症中表现出弱至中度的镇痛活性。在慢性炎症中，柱头水提物、乙醇提取物和花瓣乙醇提取物均表现出抗炎作用。作者得出结论，藏红花柱头和花瓣的水提物和乙醇提取物具有镇痛作用，以及急性和/或慢性抗炎活性。柱头提取物
实验处理：每月一次肌注藏红花酸（剂量未指定）给喂食动脉粥样硬化诱导饮食的兔子，可使血清胆固醇浓度降低50%，动脉粥样硬化的严重程度降低约30%。藏红花酸
实验治疗：一项评估藏红花柱头抗氧化作用的临床试验招募了30名参与者，分为三组：10名健康志愿者、10名冠状动脉疾病患者和10名健康对照者。两个实验组均每日两次服用50毫克藏红花柱头，持续6周，藏红花柱头加入100毫升牛奶中服用；对照组仅饮用牛奶。与对照组相比，健康志愿者血液样本中的脂蛋白氧化水平降低了42.3%（P < 0.001），冠状动脉疾病患者血液样本中的脂蛋白氧化水平降低了37.9%（P < 0.01）。/藏红花/
有关藏红花油（7种）治疗用途的更完整数据，请访问HSDB记录页面。

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药物警告
服用5.0克或以上剂量的藏红花可能会引起严重不良反应。过量服用藏红花（12.0–20.0 克/天）可能致命。/藏红花/
藏红花可能诱发子宫收缩，因此孕妇禁用。由于缺乏安全性数据，儿童和哺乳期妇女应将藏红花的摄入量限制在正常范围内。出血性疾病患者禁用藏红花。藏红花柱头抑制血小板聚集，因此服用抗凝血剂或抗血小板药物的患者应谨慎使用。

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研究表明，反式藏红花酸具有很强的 NMDA 受体亲和力和通道开放活性。基于这些药代动力学和药效学特性，使用藏红花（口服后产生反式藏红花酸）治疗中枢神经系统疾病似乎是合理的。[1]
藏红花提取物传统上用于治疗抑郁症，近期的临床前和临床研究也证实了这种用途的合理性。反式藏红花酸被认为是藏红花中枢神经系统活性的主要成分。[1]

C20H24O4

328.4022

328.167

27876-94-4

Crocetin disodium;591230-99-8;Crocetin meglumine

5281232

Yellow to orange solid powder

1.1±0.1 g/cm3

585.1±23.0 °C at 760 mmHg

285°

321.7±19.1 °C

0.0±3.5 mmHg at 25°C

1.559

4.72

74.6

2

4

8

24

608

0

C/C(=C\C=C\C=C(\C=C\C=C(\C(=O)O)/C)/C)/C=C/C=C(/C(=O)O)\C

PANKHBYNKQNAHN-MQQNZMFNSA-N

InChI=1S/C20H24O4/c1-15(11-7-13-17(3)19(21)22)9-5-6-10-16(2)12-8-14-18(4)20(23)24/h5-14H,1-4H3,(H,21,22)(H,23,24)/b6-5+,11-7+,12-8+,15-9+,16-10+,17-13+,18-14+

(2E,4E,6E,8E,10E,12E,14E)-2,6,11,15-tetramethylhexadeca-2,4,6,8,10,12,14-heptaenedioic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 该产品在溶液状态不稳定，请现配现用。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~1 mg/mL (~3.05 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。